嗜水气单胞菌RecA和Gap-2作为内参蛋白的评价

为确定嗜水气单胞菌中可用于Western Blot的适宜内参蛋白,考察了重组酶RecA和3-磷酸甘油醛脱氢酶Gap-2在该菌不同培养阶段及培养条件下的表达稳定性.以嗜水气单胞菌基因组为模板扩增recA和gap-2基因,并对蛋白进行异源表达.利用亲和层析和凝胶过滤层析技术纯化蛋白,制备多克隆抗体.通过Western Blot技术研究了RecA和Gap-2蛋白在嗜水气单胞菌不同培养时间、不同培养温度和培养环境中铁离子浓度差异条件下的表达情况.结果显示,重组表达载体pET-28a-recA和pET-28a-gap-2构建成功,可与His标签融合表达.纯化后得到了纯度较高的RecA和Gap-2,以二者为抗原制备的多克隆抗体效价均达到1:512000.Western Blot结果表明,RecA在细菌生长稳定期表达情况与前期有所差异,而Gap-2蛋白在该菌不同培养时期、温度及铁离子浓度差异的环境中表达较为恒定.研究表明,Gap-2更适合作为嗜水气单胞菌Western Blot检测用内参蛋白.     

妊娠相关血浆蛋白A的分离及纯化

采用人胎盘血为原料,利用Sephadex G-200,DEAE-Sephadex A-50层析,Sepharose 4B反相免疫亲和层析技术,获得妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)纯品,经8.0％聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫电泳、双向免疫扩散证明,所提取的PAPP-A纯品为单一成分。免疫家兔获得抗血清,其效价在1:16以上。     

链霉亲和素-蛋白A融合蛋白基因在大肠杆菌中的表达

将合链霉亲和亲-蛋白A（Streptavidin－proteinA）融合蛋白基因的表达质粒pTSAPA导入大肠杆菌BL21（DE3），成功地表达了该融合蛋白，经SIJS－PAGE及免疫印迹等方法证实该蛋白既具有IgG的结合活性，又具生物素结合活性。     

蛋白质在超滤过程中的膜污染和膜清洗

本文选用四种不同的膜清洗剂对牛血清蛋白溶液超滤后污染的三种超滤膜进行研究，结果表明：在蛋白质的等电点取得在不同ＰＨ值下蛋白质对膜污染的最佳清洗效果，清洗效率与蛋白质的所荷电荷有关。采用适宜的清洗过程将会延长膜使用寿命和增强超滤膜性能。     

重组人白细胞介素-10在大肠杆菌中的表达及生物学活性分析

目的在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10),并检测其生物学活性。方法将IL-10基因重组到质粒pET11c中,转化BL21(DE),提取质粒,经酶切鉴定和测序分析;在25℃用低浓度的IPTG诱导表达,对包涵体IL-10稀释复性;经ELISA检测其含量,MC/9细胞增殖法检测其生物学活性。结果工程菌IL-10/pET11c/BL21诱导表达的目的蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,Westernblot鉴定证实为IL-10蛋白,两种形式的IL-10均具有一定的生物学活性。结论已成功地在大肠杆菌中表达了IL-10,为进一步纯化和制备IL-10的基因工程药物打下了基础。     

生物标记用发光材料研究现状

综述了生物标记用材料及其应用,对各种材料的特点进行了分析,得出以绿色荧光蛋白等为代表的荧光材料将是未来生物标记的主流.     

人血浆蛋白C的纯化与鉴定

目的　建立人血浆蛋白C的纯化与鉴定方法。方法　利用DEAE SephadexA 5 0代替氯化钡 ,对血浆进行预处理 ,再经DEAE SepharoseFF离子交换和肝素 SepharoseCL 6B亲和层析进行分离纯化 ,用活化的部分凝血活酶时间 (APTT)测定组分活性 ,非还原型SDS PAGE测定其相对分子质量 ,Westernblot鉴定其特异性。结果获得相对分子质量为 6 2 0 0 0的蛋白条带 ,此条带可与人蛋白C单克隆抗体发生特异性反应。结论　已成功地从血浆中分离到蛋白C ,为其规模化生产奠定了基础。     

洗涤剂去污力评价中蛋白污布的制备与应用

以鸡蛋、奶粉、碳黑为主要成分制备了蛋白污布（JB－02），并将其应用于加酶洗涤剂的去污力测定中。实验证明JB－02与瑞士EMPA116、EMPA117类污布在洗涤剂去污力的表现上有相同的效果，通过对所制备的同批闪或不同批次JB－02污布的对照测定，得出此种污布的去污力测定结果实验误于10％，且常规保存下的保质期为2个月。     

Ⅱ型B族链球菌表面免疫相关蛋白基因的克隆和原核表达

目的重组表达Ⅱ型B族链球菌表面免疫相关蛋白(Surfaceimmunogenicprotein,SIP)基因,为进一步免疫学研究提供目标蛋白。方法用PCR的方法从GBSⅡ型标准株的基因组DNA中扩增出SIP基因,用T/A克隆法将其插入pMD18T载体,构建原核表达载体pET32aSIP,用BL21(DE3)/pET系统表达TrixSIP融合蛋白,SDSPAGE和质谱分析鉴定表达产物,并对表达蛋白进行初步纯化。结果PCR扩增产物经测序,证实与GenBank中Ⅰa/c型GBS的SIP的基因序列同源性为99%。SDSPAGE显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET32aSIP总蛋白中出现一条相对分子质量为66000的新蛋白带。质谱分析和蛋白质库的比较证实其为B族链球菌表面免疫相关蛋白(SIP)的可能性分数为74。结论已成功表达并初步纯化SIP,为SIP在细菌致病中的作用研究以及相关疫苗的制备奠定了基础。     

废蚕沙制取叶蛋白

介绍了用废蚕沙制取叶蛋白的原理，方法，工艺流程与操作条件，为广大蚕区开发利用蚕沙资源提供一条新思路。