反相HPLC测定盐酸氨基葡萄糖含量

目的建立反相HPLC法测定盐酸氨基葡萄糖,避免目标峰周围出现负峰、与杂质峰分离不好和目标物不保留的问题。方法采用反相高效液相色谱法,样品经流动相超声提取,用hilic色谱柱Zorbax Rx-Sil(2.1 mm×150 mm,5μm)分离;色谱条件为流动相:10 mmo L乙酸铵乙腈(V/V=12/88);流速:0.7 m L/min;检测波长:195 nm;柱温:30℃。结果本品在0.2~1.0 mg/m L范围内呈线性关系,相关系数为0.9994。平均回收率为94.2%~96.3%,精密度为1.21%~2.10%。结论此方法可定量测定胶囊中盐酸氨基葡萄糖,改进国标方法中目标物不保留的现象,方法简单,结果可靠。     

保健食品中硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖含量的不确定度评定

依据《测量不确定度评定与表示》(JJF1059.1-2012),分析硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖含量测定过程中的不确定度来源,建立数学模型量化不确定度分量,计算合成不确定度及扩展不确定度。保健食品中硫酸软骨素含量为(266.36±8.58)mg/g,包含因子k=2,盐酸氨基葡萄糖含量为(281.90±8.06)mg/g,包含因子k=2,本方法适用于高效液相色谱法测定保健食品中硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖的不确定度评定。     

N-己酰氨基葡萄糖合成方法的改进

改进了N-己酰氨基葡萄糖的合成方法，产率为91%；并研究了不同温度和不同比例时，产物在水和乙醇中的溶解度。     

氨基葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖和小分子壳聚糖对C_2H_5OH和CCl_4所致肝细胞损伤的预防和修复作用

研究了氨基葡萄糖（D-glucosamine,Glc-NH2）,N-乙酰氨基葡萄糖（N-acetyl-D-glucosamine,GlcNAc）和小分子壳聚糖（chitosan,CS）对酒精（C2H5OH）或四氯化碳（CCl4）诱导的小鼠肝细胞损伤的预防和修复作用。采用组织块培养法获取小鼠肝细胞,通过对小鼠传代培养过程中肝细胞活性的测定,证实该细胞在第6d达到最佳生长状态。分别用无糖培养基,含500或1000μg/mL GlcNH2、GlcNAc或小分子CS的培养基对肝细胞培养3d后用C2H5OH或CCl4诱导损害不同的时间,继续培养6d。结果发现GlcNH2、GlcNAc和小分子CS都能预防CCl4诱导的肝细胞损伤;而只有小分子CS对C2H5OH诱导的肝细胞损伤具有较好的预防效果。2000μg/mL的Glc-NH2、GlcNAc和小分子量CS对C2H5OH诱导损伤小鼠肝细胞的修复正相性都很明显;而对于CCl4诱导的肝细胞损伤,只有GlcNH2对CCl4诱导损伤30min的肝细胞具有修复作用。     

N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的异源表达及甘油糖苷的酶法合成

从杆菌状链霉菌中克隆了一个N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（N-acetyl-glucosaminidase,NAGase）的编码基因sbnag2550,并将其在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了异源表达。利用镍离子亲和层析得到纯酶后对SbNag2550的酶学性质进行了研究。该酶的最适温度为50℃,在45～60℃均表现出90%以上的酶活力。SbNag2550还表现出优良的热稳定性,在55℃孵育60 h仍能保留将近90%的酶活力。利用SbNag2550催化N-乙酰氨基葡萄糖（N-acetyl-glucosamine,NAG）和甘油发生逆水解反应,合成了甘油-N-乙酰氨基葡萄糖苷（glyceryl N-acetyl-glucosamine,GNAG）。在最适条件下,反应24 h时转化率达到28.20%,反应72 h时转化率为34.82%。本研究中首次通过酶法合成了GNAG,为其功能研究和应用开发奠定了基础。     

紫外可见分光光度法测定胶囊剂中D-氨基葡萄糖盐酸盐的含量

建立Elson-Morgan法测定胶囊剂中D-氨基葡萄糖盐酸盐的含量。方法 样品中D-氨基葡萄糖盐酸盐用水溶解,与乙酰丙酮、对二甲氨基苯甲醛试液显色之后,以试剂空白溶液为参比,以D-盐酸氨基葡萄糖为对照品,在525 nm波长处比色测定。D-氨基葡萄糖盐酸盐含量在20. 26～121. 56μg范围内,线性关系良好。加标回收率为101. 8%～103. 4%,精密度RSD为0. 10%,重复性RSD为0. 90%。本方法简便准确可靠,可用于胶囊剂中D-氨基葡萄糖盐酸盐含量的测定。     

氨基葡萄糖盐酸盐稳定性及其制备的研究

测定了Ｄ－氨基葡萄糖盐酸盐在酸液中的溶解度及在加热条件下其稳定性，探讨了甲壳素酸水解和甲壳素质量与产品质量、收率之间的关系，对工业化生产Ｄ－氨基葡萄糖盐酸盐的工艺条件优化、质量和收率的提高具有指导意义。     

调控乙酰CoA合成酶表达促进乙酸利用及GlcNAc合成

N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)是一种重要的功能单糖。在利用枯草芽孢杆菌发酵产GlcNAc的过程中,乙酸的积累严重抑制了细胞生长和GlcNAc合成。为了获得高效利用乙酸生产GlcNAc的微生物细胞工厂,作者通过突变乙酰CoA(Ac-CoA)合成酶编码基因acsA 5′UTR区域内全局转录调控因子CodY结合序列,调控acsA转录水平,进一步突变AcsA乙酰化调控位点,解除乙酰化修饰,促进乙酸转化为Ac-CoA,最终乙酸积累量由6.3 g/L减少到3.6 g/L,同时细胞干重(DCW)由2.7 g/L增加到5.3 g/L,GlcNAc产量由1.9 g/L提高到5.0 g/L,为进一步获得高产GlcNAc细胞工厂提供了基础。     

代谢改造黑曲霉合成乙酰氨基葡萄糖

该研究以黑曲霉为底盘细胞,首先敲除N-乙酰氨基葡萄糖（N-acetylglucosamine,GlcNAc）摄取相关转运蛋白ngtA编码基因,获得GlcNAc的吸收利用缺陷型菌株,有利于胞外GlcNAc的积累。在此基础上,通过表达大肠杆菌来源的卤酸脱卤酶样磷酸酶编码基因yqaB,构建黑曲霉GlcNAc的完整合成途径,实现GlcNAc的合成,产量为1.78 g/L。通过共过表达氨基葡萄糖-6-磷酸乙酰转移酶基因gnaA和氨基葡萄糖-6-磷酸合成酶基因gfaA强化GlcNAc合成途径,GlcNAc的合成水平提升至3.64 g/L。为增加GlcNAc合成前体GlcNAc6P的胞内供给,利用RNA干扰技术对乙酰氨基葡萄糖-6-磷酸（GlcNAc6P）分解代谢途径中氨基葡萄糖-6-磷酸脱氨基酶基因nagB和乙酰氨基葡萄糖-6-磷酸脱乙酰酶基因nagA基因表达进行弱化表达,GlcNAc产量进一步提高至4.03 g/L。为减弱黑曲霉糖酵解途径与GlcNAc合成途径竞争共同前体物质果糖-6-磷酸,对磷酸果糖激酶基因pfkA进行弱化表达,GlcNAc的最终产量为4.61 g/L。     

天然型N-乙酰-D-氨基葡萄糖的生理功效及市场前景

天然型N-乙酰-D-氨基葡萄糖(N-Acetyl-D-Glucosamine,简称GlcNAc或NAG)是生物细胞内许多重要多糖的基本组成单位,在生物体内具有许多重要的生理功能:能改善皮肤的保水性和弹性,预防和缓解皮肤粗糙,具有抑制细纹生成等作用;天然型N-乙酰-D-氨基葡萄糖也是软骨的组成成分之一,具有保护软骨及韧带等软组织,提升骨骼润滑等作用;能增强人体免疫系统的功能,抑制癌细胞或纤维细胞的过度生长,对癌症和恶性肿瘤起到抑制和治疗作用;能治疗各种炎症,降低体内胆固醇含量;作为合成双歧因子的重要前体,能够促进双岐乳杆菌的生长繁殖,起到调节肠道的作用。