热力对IgG制品中的HIV—1灭活的研究

采用病毒感染细胞技术观察热力对ＩｇＧ制品中人类免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）的灭活作用。冻干ＩｇＧ中ＨＩＶ－１（１０＾４．８ＴＣＩＤ５０）可被８０℃２ｈ和１００℃３０ｍｉｎ灭活。ＩｇＧ溶液中的ＨＩＶ－１（１０＾６．１ＴＣＩＤ５０）可被６０℃２０ｍｉｎ和８０℃５ｍｉｎ灭活。用灭活后的ＨＩＶ－１再感染ＭＴ４细胞，通过连续传代培养（３代，２１天）后，细胞均未出现感染性病变，提示ＨＩＶ－１对热较敏感。     

双通道放电低温等离子体灭活螺旋鱼腥藻研究

针对水体富营养化问题,利用双通道放电低温等离子体对蓝藻水华优势藻之一的螺旋鱼腥藻进行灭活研究。在电极-液面间距2 mm,放电时间5 min,液层厚度10 mm,溶液初始浓度0.35,pH值为弱碱性的条件下,螺旋鱼腥藻的灭活率可达90%以上,并且处理效果不反弹。经双通道放电低温等离子体处理后,藻细胞的丙二醛(Malondialdehyde, MDA)含量随放电时间的延长而增加;电解质渗出率随放电时间的延长而增大,细胞膜相对通透性增大,细胞内容物外泄。以上理化性质测定表明,经双通道放电低温等离子体处理后,螺旋鱼腥藻细胞的光合作用能力基本丧失,生长遭到严重破坏甚至已经死亡,灭活效果显著。     

热力病毒灭活对血液制品潜在影响的剖析

蛋白质分子对环境条件极为敏感,考虑到蛋白质分子的微观结构的潜在变化,应通过温度的控制、物料配比的控制、药物分子的运动性能控制等方式降低热力病毒灭活对蛋白质分子的影响,确保最大限度的降低热力病毒灭活工序对血液制品稳定性的影响。     

低温等离子体在不同时间条件下对黄曲霉孢子灭活作用的研究

黄曲霉孢子能抵抗食品灭菌处理,并产生对动物和人类有毒的黄曲霉毒素。探索在不影响食品品质的条件下使孢子失活,降低真菌毒素污染造成的风险。利用介质阻挡放电产生低温等离子体装置在不同时间(30、60、90 s)条件下处理黄曲霉孢子,研究等离子体对细胞膜完整性和通透性的影响,进行了SEM、细胞内容物含量测定、胞外电导率及细胞外pH值的测定试验。结果表明：黄曲霉孢子在处理30、60、90 s后显示出孢子停止萌发的现象;扫描电镜显示,随着处理时间从30 s延长至90 s,孢子表面发生变形,皱缩更加严重;黄曲霉孢子经等离子体处理30、60、90 s后出现内容物泄漏、pH值下降、电导率上升等现象,细胞膜发生损伤,通透性增加。此外,通过荧光显微镜和荧光分光光度计的分析证实了处理后的黄曲霉菌胞内产生了大量活性氧(ROS),说明等离子体处理造成了黄曲霉的氧化损伤,导致ROS在细胞内积累,这是黄曲霉孢子失活的主要因素之一。总之,介质阻挡放电低温等离子体处理可以在数分钟内使真菌孢子失活。     

低pH胃蛋白酶-甲苯消化法灭活破伤风免疫血浆中脂包膜病毒效果验证

目的验证低pH条件下胃蛋白酶-甲苯消化法对不同核酸类型的脂包膜病毒的灭活效果。方法以水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)作为RNA指示病毒,以伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)作为DNA指示病毒,将破伤风免疫血浆样品经低pH(3.2±0.2)、0.2%甲苯、6～12活力单位胃蛋白酶处理后各取27 ml,分别加入3 ml指示病毒(9∶1),在(30.0±1)℃水浴中分别振摇10、30、60、90 min灭活病毒。以Vero细胞、PK-15细胞为基质,采用96孔细胞病变法检测残余病毒滴度,验证病毒灭活效果。结果破伤风免疫血浆样品经低pH胃蛋白酶及甲苯消化处理90 min后,VSV和PRV两种指示病毒的灭活效果分别为3.12～3.88和5.25～5.38 logTCID50/0.1 ml。结论采用低pH胃蛋白酶-甲苯消化法对破伤风免疫血浆中PRV灭活效果较好,而对VSV灭活效果有待提高。     

木糖利用融合子D2的制备与乙醇发酵特性

以树干毕赤酵母（Pichia stipitis）1960（Ps1960）与酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）AADY（ScAADY）为亲本菌株,采用双亲灭活原生质体技术制备木糖利用融合子,并对其制备条件进行了优化。优化后的原生质体制备条件为Ps1960采用2%蜗牛酶和1%纤维素酶在28℃酶解45 min,20W紫外灯距离10 cm照射3 min灭活;ScAADY采用1.5%蜗牛酶和1%纤维素酶28℃酶解50 min,55℃水浴50 min灭活;均采用0.6 mol/L山梨醇为渗透压稳定剂。在该条件下,共得到22株融合子。通过测定各融合子在不同培养基条件下的生物量来评价其木糖代谢和乙醇耐受能力,最终获得能利用木糖高效发酵产乙醇、遗传性状稳定的融合子D2,并进行乙醇发酵条件优化。结果表明,在混合糖质量分数8%、木糖和葡萄糖质量比6：1、5%接种量、30℃、160 r/min、培养72 h条件下,融合子D2发酵产乙醇的产量为40.58 g/L。     

α1—抗胰蛋白酶制剂的制备及其病毒灭活

目的从CohnFⅣ中提纯α1-抗胰蛋白酶(α1-Antitrypsin,α1-AT),制备较高纯度α1-AT制剂.方法对CohnFⅣ抽提液经沉淀、超滤、离子交换及凝胶过滤,提纯α1-AT.用巴氏法(液态,60℃,10h加热)作病毒灭活,并考察其效果.用免疫单扩散、双向交叉免疫电泳、SDS-PAGE及合成基质法检测α1-AT蛋白及生物活性.用区带扫描法测定α1-AT制剂的纯度.结果3批试制的α1-AT制剂的纯度为91.3±1.52%,比活0.49±0.08u/mg,比活性比抽提液提高了27.4倍.巴氏法处理可使VSV、Sindbis、PolioⅠ型疫苗病毒分别降低10.0±0.3,10.0±0.3l及7.11±0.3lgTCID50/ml,但仍能检出PolioⅠ型疫苗病毒.结论可从CohnFⅣ中制得较高纯度的α1-AT制剂,巴氏法能对α1-AT制剂作有效的病毒灭活处理.     

一种离子交换层析制备人凝血因子Ⅷ方法的建立及保护剂配方的筛选

目的建立一种离子交换层析结合病毒灭活方式获得人凝血因子Ⅷ(FⅧ)的方法,并筛选其保护剂配方。方法采用聚乙二醇沉淀法及离子交换层析法对血浆来源的冷沉淀进行纯化,经S/D和80℃72 h干热两步病毒灭活法进行病毒灭活,验证灭活效果,并筛选最佳保护剂配方。结果聚乙二醇沉淀后的FⅧ纯度较新鲜血浆提高了约110倍,离子交换层析纯化后FⅧ纯度提高30倍以上;S/D和80℃72 h干热法的灭活效果良好。最佳保护剂配方为0.01 mol/L枸橼酸钠、0.001 mol/L氯化钙、8 mg/ml白蛋白和40 mg/ml盐酸精氨酸。结论该方法可制备纯度较高、稳定性和安全性较好的FⅧ制品,确定的保护剂配方对干热灭活的耐受性良好。     

基孔肯雅病毒无血清培养及灭活病毒保护效果的分析

目的 建立无血清条件下培养基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)的生产工艺,评价灭活CHIKV在小鼠感染模型的保护效果.方法 采用无血清培养基(virus production serum-free medium,VP-SFM)适应培养Vero细胞扩增CHIKV,与含血清DMEM培养基扩增CHI...     

介质阻挡放电低温等离子体灭活铜绿微囊藻的实验研究

采用介质阻挡放电(Dielectric Barrier Discharge, DBD)低温等离子体对铜绿微囊藻进行灭活研究,考察了电气参数、场结构参数及铜绿微囊藻溶液液相体系因素等放电条件对其灭活规律的影响。利用多种分析方法[如丙酮提取分光光度法、电导率测定、扫描电镜(SEM)和高效液相色谱(HPLC)]检验DBD低温等离子体对铜绿微囊藻的灭活效果。实验结果表明,放电条件对铜绿微囊藻灭活率有极大影响,在最佳条件下(放电电压160 V,放电电流0.6 A,介质间距4 mm,溶液初始OD值0.2,pH值为弱碱性)放电时间5 min,铜绿微囊藻的灭活率可达90%以上。经DBD低温等离子体放电处理后,藻液颜色由鲜绿色→淡绿色→浅黄色→无色,藻细胞的Chl-a含量大幅减少,光合作用能力被抑制,藻细胞的生长受阻。扫描电镜结果显示,藻细胞在放电处理前饱满、完整;而放电后的藻细胞细胞结构破坏严重,细胞膜破裂,细胞内容物泄漏,仅存少量细胞残骸。放电处理后的藻细胞电解质渗出率增大,细胞膜结构受到严重的破坏导致其通透性增大,细胞内容物外泄。DBD低温等离子体灭活铜绿微囊藻的过程中,藻毒素的含量随放电时间先增...