棉子糖及水苏糖对兔外周血中性粒细胞功能的影响

棉子糖及水苏糖是大豆低聚糖的主要组成成分,属于半乳糖苷类非还原性功能低聚糖。在保健性食品、糖果和医药及饲料添加剂方面有广泛的应用。两种寡糖胃肠吸收虽少,但生物活性很高,具有防癌、抗癌、抗衰老、降血脂及防治心脑血管病等功能目,还能促进外周血T淋巴细胞的增强。正常人每天仅需摄取2～5g的棉子糖或水苏糖就能促进双歧杆菌的增殖,提高机体免疫力。棉子糖及水苏糖具有的整肠作用能促进肠道内有益菌群的活化和增殖,促进对矿物元素的吸收。饲料中添加o．1野叼．3％的水苏糖就能提高动物的抗病能力日。已经证明,水苏糖具有对动物机体的免疫调节作用月,但这两种糖对中性粒细胞这一非特异性免疫系统中重要的效应细胞的影响目前尚未有研究。本文就该方面问题做了初步研究。     

MenA PS-EA偶联物的制备及其在多糖抗体检测中的应用

目的制备MenA PS-EA偶联物及以MenA PS-EA为包被抗原的A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体的ELISA检测试剂。方法培养A群脑膜炎奈瑟菌,提取多糖(MenA PS),与卵清蛋白(EA)以还原氨基法偶联,Sepharose CL-4B纯化。制备以MenA PS-EA为包被抗原的A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体的ELISA检测试剂,考察试剂的精密性和稳定性,并与血清杀菌力试验(SBA)比较。结果纯化的MenA PS-EA经高效液相色谱检测,纯度为81.50%;以MenA PS-EA为包被抗原的ELISA检测试剂精密性和稳定性良好;将该试剂与SBA法比较,其敏感性为96.91%,特异性为90.00%,一致性为95.83%。两种检测方法之间差异无显著意义。结论以纯化MenA PS-EA作为包被抗原建立的A群脑膜炎奈瑟菌多糖特异性IgG抗体ELISA检测试剂可用于检测多糖IgG抗体,为进一步研究及开发细菌多糖类抗体诊断试剂提供参考。     

梅毒螺旋体特异性抗原TpN47基因片段的克隆与表达

目的在大肠埃希菌中表达梅毒螺旋体(Tp)TpN47(68~410 aa)重组蛋白。方法采用PCR法从Tp全基因组中扩增TpN47(202~1230 bp)片段,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22 b(+)-TpN47,经酶切鉴定后转化EcoliBL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化,Western blot鉴定其免疫反应性。结果PCR法扩增出约1 000 bp的目的片段,原核表达质粒pET-22 b(+)-TpN47经酶切鉴定正确,表达的蛋白约占菌体总蛋白的43%,相对分子质量约为39 000,以包涵体形式存在。经纯化后蛋白纯度达95%以上,Western blot证实该蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应。结论所表达的TpN47重组蛋白具有良好的免疫反应性,为开发临床检测效果更好的梅毒诊断试剂盒奠定了实验基础。     

促凋亡蛋白BID多克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗BID的多克隆抗体,用于检测凋亡信号转导过程中BID蛋白的表达。方法采用PCR技术合成编码BID特异性肽段的基因,构建GST融合基因表达载体,在E.coli BL21中诱导表达GST-BID多肽的融合蛋白,经Glutathione Sepharose 4B纯化后免疫家兔,免疫血清经纯化后,得到抗BID的多克隆抗体,经Western blot鉴定其特异性。结果通过PCR扩增获得了BID肽段的编码基因;pGEX-6P-1-BID多肽重组质粒经酶切鉴定及测序证明构建正确;在E.coli BL21中表达了GST-BID多肽融合蛋白;纯化后蛋白纯度达95%;制备的抗BID多克隆抗体能够特异地识别BID蛋白。结论所制备的抗BID多克隆抗体可特异性检测BID蛋白。     

巨细胞病毒感染PCR检测方法的建立

目的建立检测巨细胞病毒污染的PCR检测方法,并制备检测试剂盒。方法采用TaqMan探针,选择保守序列CMV-pp65设计引物,荧光定量病毒载量;对试剂盒进行敏感性、重复性和特异性等测试;对31份临床阳性血清标本和106份正常献血者血浆标本进行检测,并与国内同类试剂盒进行比较。结果该试剂盒检测线性定量范围可达202~3.6×109copies/ml,敏感性为360copies/ml,CV值在1%左右,特异性高,临床标本检测的符合率为100%。本试剂盒与国内已上市试剂盒比较,具有较好的相关性、更高的敏感性和更宽的定量检测范围。结论制备的试剂盒特异性和敏感性均较高,适用于临床上的病毒检测。     

从易感基因多态性探讨原发性高血压病中医证候实质的思考

认为基因背景可能是证候形成的主要原因之一,基因的这种细微差异决定其生物行为出现极大的变化.运用基因组技术寻找不同中医证型中相关基因表达谱的差异表达,对研究中医证型的实质及指导临床用药有重大的意义.     

液相色谱法分析牛血清中IgG的方法研究

本文以牛布氏菌病血清为例,阐述了采用两种不同原理的高效液相色谱法测定血清中IgG含量的方法。通过实验,筛选出利用Protein G柱测定血清中IgG含量的方法比较理想,该方法精密度试验的相对标准偏差为0.2%,平均回收率为95.71%,回收率试验的相对标准偏差为0.9%。并利用该方法测定不同的牛布氏菌病阳性血清中IgG的含量,与其效价(补体结合试验测定)进行比较,可知在一定范围内牛布氏菌病阳性血清中的IgG含量与其效价存在一定的趋势性对应关系。     

嗜硫磁性微球特异性分离牛免疫球蛋白G

利用徽悬浮法制各微米级顺磁性聚合物微球,进一步使用嗜硫性配基（2-巯基噻唑啉）进行表面修饰。并利用此嗜硫性聚合物磁性微球对成牛血清的免疫球蛋白G进行特异性分离。结果表明,聚合物徽球的粒径为0．6～20岫,磁性微球的磁含量高于47％,在PH=3．5的柠檬酸缓冲液中可以特异性吸附成牛血清中的免疫球蛋白G,用低盐浓度NaCI（0．6mol／L）实现解吸附,同时分离提纯后抗体活性依然可以高达99％,磁球分离效率达到88％,最高分离量可以达到39．5mg／g。     

高效液相色谱法测定牛初乳粉中IgG含量的不确定度评估

建立高效液相色谱法测定牛乳乳粉中IgG含量的不确定度评估方法,依据GB/T5009.194-2003《保健食品中免疫球蛋白IgG的测定》和JJF1059-1999《测定不确定度的评定与表示》,建立不确定度的数学模型,分析IgG含量测定的不确定度,为检验工作的质量控制提供帮助。     

除草剂莎稗磷多克隆抗体的制备

根据莎稗磷的化学结构特征,设计合成莎稗磷半抗原,采用活化酯法与牛血清白蛋白偶联,免疫新西兰大耳白兔获得抗莎稗磷多克隆抗血清用于免疫分析试验。抗血清效价高达1∶160 000,100μg/L莎稗磷的抑制率达到了59.76%。抗体经Protein A-Sepharose 4B亲和层析柱纯化后,50μg/L莎稗磷的抑制率提高到92%,其它有机磷农药及结构类似化合物与抗体的交叉反应率均小于0.01%,表明了所制备莎稗磷抗体的高特异性。