基于单拷贝核基因的数字PCR定量检测肉制品中羊源性成分

GeneBank搜索牛、绵羊、山羊、猪、马、驴、鸡、鸭、鹅、火鸡、狗、猫、鼠、兔、貂等15种动物的单拷贝核基因组序列信息,应用生物信息学分析筛选15种动物共有的种间保守区域,设计一对可同时扩增15种动物源性DNA的内参基因引物和探针;同时分析筛选绵羊和山羊共有且和其余动物种内特异性区域,设计一对只能扩增羊源性DNA的特...     

杂交-杂交瘤技术制备BsMAb的研究进展及其在食品安全检测中的应用

双特异性单克隆抗体（bispecific monoclonal antibody,BsMAb）是指具有两个不同特异性抗原结合位点的单克隆抗体分子。杂交-杂交瘤技术因其简便易行、制备周期短,在制备BsMAb方面有较大优势。基于杂交-杂交瘤技术能制备出可以特异性识别两种或者两类小分子药物的BsMAb,在食品安全多残留免疫分析检测中具有较好的应用价值。本文综述了杂交-杂交瘤技术制备BsMAb的进展,探讨了基于该技术的BsMAb生成机制,讨论分析了杂交-杂交瘤及BsMAb筛选制备的关键技术要点,并归纳了BsMAb在检测食品中小分子污染物方面的应用进展,旨在为食品安全多残留免疫分析技术的发展应用提供参考。     

龙须菜酸性多糖的非特异性免疫调节活性研究

本文从体外和体内两方面研究了龙须菜酸性多糖(GLSPs)对小鼠非特异性免疫的调节作用。结果显示,GLSPs在体外能够增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬作用且呈剂量依赖性,但是对小鼠脾NK细胞的杀伤活性未见显著影响;将GLSPs分别以200mg/kg·d和600mg/kg·d连续灌胃管理小鼠14 d,GLSPs能够显著提高小鼠脾NK细胞的杀伤活性,其中最大杀伤率近90%;能够增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬作用且与多糖剂量正相关,同时使小鼠白细胞和淋巴细胞略有增加但较空白组小鼠无显著差异,表明GLSPs对非特异性免疫具有显著的调节作用。     

南酸枣中多酚氧化酶的特性研究

以南酸枣为原料,利用磷酸盐溶液提取其多酚氧化酶(PPO)粗酶液。以邻苯二酚为底物,采用分光光度法测定南酸枣PPO的活性。研究温度、pH对南酸枣PPO活性的影响以及底物特异性,并探讨抗坏血酸、亚硫酸钠、L-半胱氨酸、柠檬酸、酒石酸和氯化钙6种抑制剂对南酸枣PPO的抑制效果。结果表明:南酸枣PPO最适反应温度为50℃;最适pH值为7.0;邻苯二酚、对叔丁基邻苯二酚及4-甲基儿茶酚作为底物时PPO的活性较高,没食子酸及焦性没食子酸性作为底物时PPO的活性较小;6种抑制剂对南酸枣PPO均表现出一定的抑制作用,其抑制效果为:抗坏血酸亚硫酸钠L-半胱氨酸柠檬酸酒石酸氯化钙。     

两种牛乳κ-酪蛋白的间接ELISA定量检测研究

分别以兔血清IgG与鸡卵黄抗体(IgY)为检测抗体,建立了两种牛乳κ-酪蛋白的间接ELISA定量方法。牛乳κ-酪蛋白分别免疫新西兰大白兔和临产母鸡,经亲和层析分离纯化后得到anti-κ-CN-IgG与anti-κ-CN-IgY两种抗体。两种抗体均与β-酪蛋白、α-乳白蛋白和乳清粉存在一定交叉反应,抗体与相应抗原进行免疫吸收后得到高特异性IgG与IgY。用吸收后的anti-κ-CN-IgG建立的间接ELISA法,当标准κ-CN质量浓度在0.098~3.125 mg/L时,A450 nm值与κ-CN的质量浓度具有线性关系,变异系数小于1%,回收率在99.10%~101.1%之间;用吸收后的anti-κ-CN-IgY检测κ-CN,在0.098~6.25 mg/L时,A450 nm值与κ-CN的质量浓度成良好的线性关系,变异系数小于2%,回收率在98%~100.8%之间。当三聚氰胺掺假量在0~20%时,两种抗体均能通过κ-CN的定量检测而实现乳品的掺假检验。     

环介导等温扩增技术快速检测双歧杆菌属细菌

目的建立一种利用环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测双歧杆菌属细菌的方法。方法针对双歧杆菌属细菌16S rDNA基因特异性区段设计LAMP引物,根据反应体系的颜色或浊度变化特异性地检测样品中双歧杆菌属细菌。结果对5株双岐杆菌属细菌和19株非双歧杆菌属细菌进行特异性和非特异检测,结果均为100%。该检测可在60 min内完成,双歧杆菌属细菌DNA的检测限为16.1±8.2 pg/μL,对双歧杆菌属细菌菌体的检测限为0.1 CFU/mL。结论LAMP方法可作为传统国家标准检测方法的辅助手段,有效检测食品、保健食品和药品中双歧杆菌属细菌DNA的存在。     

C、H、O同位素分析在葡萄酒产区鉴别中的应用

为有效鉴别产区葡萄酒,利用点特异性天然同位素分馏核磁共振技术和同位素比质谱仪技术对葡萄酒中C、H和O同位素进行研究。通过收集2010-2012年河北昌黎、山东烟台蓬莱、宁夏贺兰山东麓和河北沙城四大产区的60 个样品,发现（D/H）i、（D/H）ii、R、δ13C、δ18O、酒精体积分数的范围分别为95.68×10－6～99.15×10－6、115.99×10－6～126.39×10－6、2.38～2.59、－28.35‰～－23.00‰、－1.94‰～－0.05‰和11.3%～12.9%,总体上含量范围分布广泛,但同一地区较为集中。研究发现,单一使用任何一种元素都只能区分环境差异很大的地区,当结合3 种元素,采用线性判别分析能100%有效鉴别四大产区葡萄酒。基于沙城产区的数据库和酒精体积分数,结合t检验法,分3 步可判定出产区酒的真实性。待测的5 个盲样中只有1 个样品属于沙城产区的真实葡萄酒。     

复合保护剂与牛IgG的相互作用机制研究

本研究综合利用紫外吸收光谱法、荧光光谱法、傅里叶变换红外光谱法、圆二色谱法、拉曼光谱法、扫描电镜法和差示扫描量热法研究复合保护剂与IgG的相互作用机制以及IgG结构的变化。结果表明复合保护剂对IgG的肽骨架影响较小,而对氨基酸残基的微环境影响较大,使IgG氨基酸残基所处的微环境极性增强;复合保护剂与IgG的相互作用主要涉及氢键、静电作用力和疏水作用力,并引起IgG的二级结构从α-螺旋结构向β-折叠、β-转角和无规卷曲结构转变,使IgG的二级结构趋于无序化,IgG二硫键构型由g-g-g构型逐渐转变为g-g-t构型和t-g-t构型。扫描电镜表明,复合保护剂在IgG分子表面形成不规则的棱形晶体复合物;差示扫描量热法表明,复合保护剂使IgG的变性温度从71.76℃升高到87.22℃,IgG的热焓变从6.51 J/g降低到4.68 J/g。说明复合保护剂使IgG分子的构象发生转变,从而增强了IgG的热稳定性。     

快速检测沙门氏菌的荧光免疫试纸的研制

研制一种基于低噪声激发式荧光沙门氏菌免疫层析检测试纸条,用于沙门氏菌快速、高敏、兼顾定性及精准定量的检测。采用低噪声激发式荧光染料作为标记,采用免疫层析技术,制备靶向于沙门氏菌的免疫层析试纸条。检测时,采用专用便携式低噪声激发式荧光扫描仪分别扫描质控线和检测线,以检测线荧光强度检测值实现样本的定性及定量检测,并对免疫层析试纸条各项性能进行评价。低噪声激发式荧光沙门氏菌免疫层析检测试纸条制备成功,免疫层析试纸条性能检测结果显示,该试纸条特异性强、灵敏度高、检测限可达到0.5×10~3 CFU/mL,是一种新型快速高效稳定的检测方法。该免疫层析试纸条可适用于食品及病理样本中沙门氏菌初筛和即时检测。     

绵羊EST-SSR分子标记的鉴定及特异性分析

通过SSR Finder软件及MISA技术从NCBI系统中的绵羊表达序列标签(EST)数据库中筛查SSR位点,利用Primer 3.0设计绵羊EST-SSR荧光引物,对宁夏滩羊肉、新疆细毛羊肉和藏绵羊肉进行区分。以3种绵羊的肝脏DNA为模板,对设计的EST-SSR引物进行PCR扩增并使用毛细管电泳检测SSR分型。结果显示,通过EST-SSR标记设计的荧光引物p2105.1:248-559、p2025.1:896-1059和p2104.1:704-1015在宁夏滩羊肉、新疆细毛羊肉和藏绵羊肉中具有良好特异性,可实现3个绵羊品种的区分。通过EST-SSR标记技术可准确判断3个纯种绵羊肉的品种,这对绵羊遗传资源的开发利用、品种鉴别以及丰富分子标记类型具有重要的意义。