IgG分子在单晶硅片表面导向性固定的XPS和EIA研究

本文报道了利用ＩｇＧ分子中绞链区的寡糖链作为结合位点在氨基化的单晶硅片表面导向性固定抗体分子。我们通过改变硅烷化条件并用自然还原的方法使ＩｇＧ分子共价结合在单晶硅片表面,ＸＰＳ和ＥＩＡ表征结果表明这种导向性固定生物分子的途径能有效地固定ＩｇＧ分子并维持其结合抗原的能力。     

IgY抗体对幽门螺旋菌菌体抗原细胞毒活性的中和作用

以超声震荡及高速离心法裂解空泡毒素基因阳性 (VacA+ )HP临床分离株 ;采用Hela细胞体外培养法分析此HP菌体蛋白的细胞毒活性及其免疫产卵母鸡制备的IgY抗体的保护作用。HP菌体抗原制备物经SDS PAGE显示至少有十余个蛋白区带 ,主要区带位于约 940 0 0和 6 70 0 0。以此HP菌体抗原包被的ELISA显示 ,球部溃疡患者血清IgG抗体滴度明显增高。体外培养中HP菌体蛋白制备物对Hela细胞具有明显的细胞毒活性 ,LD50 小于 12 μg/ml。以此抗原免疫产卵母鸡 ,提取的IgY抗体浓度依赖地阻断HP菌体蛋白的Hela细胞毒活性 ;提示局部应用抗体制剂做被动免疫 ,有可能成为治疗HP感染性疾病的有效方法     

鸭骨骼肌肌钙蛋白I单克隆抗体的制备及其特性

提取鸭骨骼肌肌钙蛋白I（skeletal muscle troponin I,sTnI）用于制备单克隆抗体,并对抗体性能进行 评价。将鸭骨骼肌提取后经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE）测定,取凝胶条带免疫小鼠,融合后经筛选获得分泌抗鸭sTnI的杂交瘤细胞株,用 酶联免疫吸附测定法检测抗体效价、亚型及特异性等特性。结果表明：鸭骨骼肌提取物经SDS-PAGE后出现2 条 颜色较深的条带,取分子质量24 kDa条带用于免疫;筛选后获得2 株单克隆抗体,其中3E7特异性较好,效价在 1∶1.0×105以上,为IgG1亚型,亲和常数（Ka）为5.9×105 L/mol;免疫印迹结果显示,抗体3E7能与鸭骨骼肌提取 物反应,与牛、羊、鸡、鱼骨骼肌提取物无明显反应。     

禽蛋黄过敏原Gal d 6的重组表达、纯化鉴定

目的:建立表达蛋黄Gal d 6 重组蛋白工程菌,并鉴定重组Gal d6蛋白免疫活性。方法:直接合成Gal d 6 DNA,与pET-28a构建重组质粒,转化E.coli BL21经IPTG诱导表达;优化表达条件制备重组Gal d 6蛋白,经镍离子亲和层析柱纯化得到纯品蛋白;纯化Gal d6蛋白经间接ELISA及western blot鉴定Gal d 6蛋白免疫活性。结果:经DNA测序、SDS-PAGE、禽蛋过敏血清鉴定表达Gal d 6蛋白具有免疫活性,经镍柱亲和层析获得单一条带。该工程菌最佳表达条件为37 ℃,0.5 mmol/L IPTG,2 h,收获量每升菌液可收获重组蛋白约9.1 mg。重组蛋白与禽蛋过敏血清具有良好反应性。结论:建立稳定表达具有免疫活性的Gal d 6蛋白的工程菌株。     

转基因甜菜GTSB77品系特异性实时荧光聚合酶链式反应检测方法建立

目的 为实现转基因甜菜GTSB77的标识管理,建立其品系特异性实时荧光聚合酶链式反应(PCR)检测方法。方法 针对GTSB77的3′端外源插入片段与甜菜基因组DNA之间的邻接区序列设计引物和探针,建立GTSB77品系特异性实时荧光PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测。结果 建立的GTSB77检测方法特异性强,定量限(LOQ)为16拷贝,扩增效率为102%,重复性测试结果相对标准偏差(RSD)介于0.21%～1.66%之间。结论 建立的实时荧光PCR方法可应用于GTSB77的鉴定检测。     

显色图像分析技术在水稻叶耳花青甙显色目测分级中的应用

目的基于颜色特征的叶耳花青甙显色分级研究。方法以水稻倒二叶叶耳花青甙显色测试为切入点,在Emgu Cv3.0图像分析软件基础上,对完成图像分割的目标区域提取红绿蓝(red green blue, RGB)、色调饱和度亮度(hue saturation value, HSV)颜色特征,利用SPSS软件对颜色特征和测试分级数据进行相关性、回归等统计分析,建立颜色特征多元回归模型。结果叶耳花青甙显色强度与R(红色)、G(绿色)、B(蓝色)、H(色调)、V(亮度)极显著负相关;所有颜色特征值中,G值与叶耳花青甙显色强度相关性最显著,是一元和多元回归主要自变量; G值建立的一元回归模型中, R~2为0.980;多元回归模型R~2值为0.994。结论回归模型的拟合效果好,用这两个模型均可完成叶耳花青甙显色强度分级。     

SN/T 2980-2011在动物源性成分检测中的适用性分析

目的 探讨行业标准SN/T 2980-2011《动物产品中牛、山羊和绵羊源性成分三重实时荧光PCR检测方法》在动物源性成分检测中的适用性。方法 基于中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2980-2011和国家标准GB/T 25165-2010《明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法实时荧光PCR法》对鲜肉组织及加工肉制品进行动物源性成分检测实验, 建立依托上述标准的动物源性成分检测能力。结果 SN/T 2980-2011中牛源性成分检测特异性不佳, 山羊源性成分检测特异性良好, 绵羊探针仅适用于单通道实时荧光PCR检测; GB/T 25165-2010中的牛、羊源性成分检测均展示出良好的特异性。结论 建议SN/T 2980-2011行业标准的起草单位及起草人重新设计适用于三重实时荧光PCR的牛、绵羊引物及探针,既要保证引物和探针的特异性也要保证适用性。     

住宅采暖热负荷的特异性与计量收费

由于住宅的位置、朝向及围护结构不同等因素,使得相同面积和功能的住宅达到相同的室温所消耗的热量不同,因此不能简单地按热表读数直接计取热费,而应根据具体情况作出适当的修正,并提出了修正的建议公式。     

阳离子交换树脂静态吸附法特异性分离乳清中乳铁蛋白的关键技术

乳铁蛋白(lactoferrin,Lf)是一种对婴幼儿有重要生理功能的活性乳蛋白,掌握Lf特异性分离技术对打破国外技术垄断、降低成本、促进我国婴幼儿配方奶粉发展具有重要意义.该研究以乳清为原料,基于最大吸附量、吸附率、特异吸附为指标,对不同吸附剂做了筛选,探讨了工艺参数对吸附效果的影响及洗脱液离子浓度对洗脱效果的影响,...     

应用通用引物量化检测鲜肉及其制品中羊源性成分

分别以牛、羊、猪、鸡、鸭、马线粒体细胞色素b基因为研究对象,设计羊源性成分特异性引物和探针,同时结合实时荧光定量PCR技术,引入16SrDNA内参基因校正羊种属特异性基因测定方法,建立快速、高通量的鲜肉及鲜肉制品中羊源性成分确证方法,实现科学准确的食品掺假量化判定技术体系。通过特异性、通用性及模拟混合样品的检测,对所建立方法进行验证。结果表明:建立的羊源性成分含量测定方法具有良好的特异性和通用性,且通过标准曲线的构建,呈现良好的线性关系均达0.996以上;通过羊种属特异性基因与16SrDNA内参基因Quantity值及校正系数,可以计算出样品中所含羊源性成份的质量百分比含量,经模拟混合样品的检测,回收率平均值到达96.25%,说明量化研究结果具有较高的准确性。