双水相分离纯化R-藻红蛋白

为了获得优于食品级的R-藻红蛋白(R-PE),采用双水相体系从坛紫菜中分离纯化R-PE.结果表明,聚乙二醇(PEG)/酒石酸钾钠双水相体系,当PEG相对分子质量为1 500且p H为8.06、系线长22.30%、体积比0.12时纯化效果最佳,R-PE纯度由细胞破碎液的0.43提高到1.47,回收率为84.42%.经过二次双水相纯度达1.55,纯化因子为3.60.得到的R-PE具有较高的生物活性.PEG相对分子质量1500/酒石酸钾钠双水相体系成功分离纯化R-PE,操作简单,成本低,适于工业化.     

γ-氨基丁酸受体基因的系统性调控网络

提出一种多学科交叉结合的策略,试图初步获得系统性调控γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)受体基因的转录因子线索.利用基于功能基因组学方法的DNA元件百科全书计划已发表的数据,系统性地获得GABA受体基因的开放染色质序列,并以此作为固相化探针,捕获与其特异性相互作用的蛋白质分子,并利用质谱分析鉴定蛋白.结果发现,对不同脑区获得的核蛋白,探针都能捕获到同样的特异性条带,然而,作为对照的天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体基因相关的开放染色质探针,在不同脑区中并未检获上述特异信号,说明结合蛋白是特异的.质谱分析表明,与GABA受体基因相关的开放染色质特异相互作用的蛋白是核膜血影重复蛋白-1(nuclear envelop spectrin repeatprotein-1,Nesprin-1),又称synaptic nuclear envelope-1(SYNE-1).进一步的调控网络生物信息学分析表明,Nesprin-1可能与MAFA、IRX2、BCL6、CEBPA以及RP58等转录因子形成复合物,并与GABA受体基因GABRA5、GABRA6、GABBR1和GABBR2等共表达.表明GABA受体基因在不同脑区是通过相同的转录调控机制进行表达的,Nesprin-1可能与MAFA、IRX2、BCL6、CEBPA以及RP58等转录因子形成复合物进而调控GABA受体基因表达,该特异的转录因子调控网络有望用于诱导多能干细胞或是前体细胞直接分化为GABA能神经元.     

黄粉虫纤溶活性蛋白免疫原性与抗血栓作用的研究

为了研究黄粉虫纤溶活性蛋白（ Tenebrio Fibrinolytic Proteins,TFP）的免疫原性及其抗血栓作用,本研究将纯化的TFP经皮下注射免疫小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中的抗体含量及抗体效价;小鼠灌胃TFP后,取血浆检测凝血酶时间（thrombin time,TT）、凝血酶原时间（prothrombin time,PT）、活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time ,APTT）、组织型纤溶酶原激活剂（ tissue-type plasminogen activator ,t-PA）和其抑制物（ plasminogen activator inhibitor ,PAI）,角叉菜胶使小鼠尾部形成血栓,测量血栓形成长度。结果显示,TFP免疫小鼠后产生特异性抗体且随着免疫次数的增加,抗体含量逐渐升高,末次免疫后产生的抗体效价为1∶640;TFP可以显著延长TT,增强t-PA的活性,抑制PAI的活性,同时显著抑制由角叉菜胶引起的小鼠尾部血栓的形成。这说明TFP具有良好的免疫原性且具有一定的抗血栓作用。     

神经生长因子及其前体蛋白在晚期胰腺癌组织中的表达研究

采用2011年1月-2014年6月在云南省第一人民医院确诊并行手术治疗的58例胰腺癌患者,切除部分肿瘤组织作为实验标本,癌旁组织作为对照,利用免疫组化及Western blot检测晚期胰腺癌组织内神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及神经生长因子前体(precursor of nerve growth factor,pro NGF)的表达,Gel-Pro analyzer 4图像分析系统分析Western条带密度.试验重复3次,取3次IOD值行统计学分析.免疫组化及Western blot结果显示肿瘤组织NGF的表达较癌旁组织明显增高,而pro NGF的表达较癌旁组织明显降低.半定量Western blot显示癌旁组织和肿瘤组织NGF表达的IOD值分别为113.33±8.54和285.00±15.13,pro NGF表达的IOD值分别为245.00±7.55和86.33±7.37,差异有统计学意义(P0.05).因此,晚期胰腺癌患者肿瘤组织内NGF/pro NGF的比例发生改变,组织内NGF蓄积,而pro NGF减少,这可能是导致胰腺癌肿瘤细胞凋亡减少,生长、浸润和迁徙功能增强的重要机制之一.     

紫外分光光度法研究谷氨酰胺转氨酶交联醇溶蛋白的特性

采用不同浓度谷氨酰胺转氨酶(TG)、不同作用温度和时间,设计三因素三水平的正交试验处理小麦醇溶蛋白,研究醇溶蛋白经TG交联后对紫外吸收的特性.结果表明:对处理后醇溶蛋白的紫外吸收影响大小的因素依次为TG浓度温度时间.TG处理之后醇溶蛋白溶液在255nm处有一个吸收低谷,在275 nm处有一个吸收峰.9个处理组的ζUT值存在差异,但组间差异均未达到显著水平(P0.05).此外,利用蛋白质凝胶电泳和HPLC技术进行分析,也显示出不同处理之间存在一定的差异.     

槐豆总黄酮提取工艺及其抗氧化活性研究

采用乙醇回流热提取,依据单因素及正交试验研究了槐豆总黄酮的提取工艺及抗氧化活性.结果表明:当乙醇体积分数为70%,提取温度为80℃,时间为2.0 h,料液比(g/m L)为1∶20时,总黄酮得率为12.61 mg/g.槐豆黄酮对3种自由基均具有较好的清除能力,清除能力的强弱依次为1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基[DPPH·]、羟自由基[·OH]和超氧阴离子自由基[O2-·],且其抗氧化活性与黄酮浓度呈显著的量效关系.     

玉米醇溶蛋白膜的机械性能与膜厚度的相关性研究

研究了玉米醇溶蛋白膜的机械性能与膜厚度的相关性.结果表明:在一定的厚度范围内,玉米醇溶蛋白膜的厚度对机械性能有显著影响,蛋白膜的厚度越大,测定的抗拉强度越小,断裂延伸率越大;随着蛋白膜厚度的增加,膜厚度对膜的机械性能的影响逐渐减弱,当制备的玉米醇溶蛋白膜厚度大于0.10 mm时,蛋白膜厚度对膜机械性能的影响很小.因此,在评价玉米醇溶蛋白膜的机械性能时,选择合适的膜厚度,可以减少膜厚度对机械性能评价结果的影响.     

超微粉碎处理对花生蛋白功能特性的影响

以花生蛋白为原料,研究超微粉碎处理对花生蛋白功能特性的影响,主要研究内容包括溶解度、起泡性、乳化性、持水持油性等特性.通过超微粉碎处理得到4种花生蛋白粒度,中位径(D50)分别为21.1μm、17.4μm、14.4μm和8.3μm(分别记为A、B、C和D).随着花生蛋白粒度减小,溶解度呈现出先增加后降低的趋势,在C处达到最大溶解度为63.6%,较A增加了16.2%.起泡能力先随粒度减小而增加,而后基本保持不变;泡沫稳定性则是整体呈现出增加的趋势,从A的41.3%增加到D处51.2%.乳化活性和乳化稳定性均随着粒度的减小而增加,分别在C和D处达到最大值(分别为0.579和0.517),较A处分别增加了0.141和0.103.超微粉碎处理对花生蛋白持油能力没有显著影响,而持水能力有随粒度减小而降低的趋势.研究结果表明,超微粉碎技术适合花生蛋白的深加工,得到的花生蛋白微粉具有优良的功能特性,是一种极具开发潜力的植物蛋白原料.     

花生乳状液界面吸附蛋白提取工艺及其乳化性质的研究

研究水剂法提花生油形成的乳状液中界面吸附蛋白的提取工艺,并对其溶解性和乳化性进行了研究.结果表明:水洗后花生乳状液的最佳破乳工艺为Tween-20添加量1.5%、搅拌时间60 min、离心力20 500 g,此时乳状液破乳率达(75.21±0.15)%.采用酸沉方式回收界面吸附蛋白,得到蛋白质的纯度为(64.68±0.21)%.与花生分离蛋白、菜籽分离蛋白以及大豆分离蛋白相比,花生界面吸附蛋白的溶解性最差,但乳化性质最好,其降低界面张力的速度也最快.     

苦参碱与人血浆蛋白结合率的分析测定

采用超滤法结合高效液相色谱法测定苦参碱与人血浆蛋白的结合率.血浆超滤波经二氯甲烷溶剂萃取后,以0.1％磷酸溶液(含0.1％三乙胺)-乙腈(体积比为93∶7)为流动相,槐定碱为内标,检测波长220 nm下测定苦参碱.苦参碱在0.2～15.0 μg/mL范围内线性关系良好,平均回收率为86.2％,日内、日间精密度均小于10％.超滤法结果表明,苦参碱在不同浓度下的血浆蛋白结合卒为17.2％～23.1％,蛋白结合常数为(8.838±0.964)× 103 L/mo1.苦参碱与人血浆蛋白结合较弱,结合率在测定浓度范围呈浓度依赖性.