纳豆激酶高活性菌株的筛选及其发酵条件的优化

为开发具有特定生理活性的新型纳豆保健品,从24种豆制品中分离和筛选出3株有明显纤溶活性的芽孢杆菌菌株,其中BN-6菌株活性最高,达到900U/ml。通过单因素试验和正交实验确定了液体发酵纳豆激酶最佳条件培养液中豆粕粉2%,玉米粉1%,初始pH=6.5,温度37℃。     

纳豆激酶的研究进展

纳豆激酶是由纳豆芽孢杆菌 (Bacillusnatto)分泌的一种具有强烈纤溶作用的丝氨酸蛋白酶。文章中对纳豆菌产生的纳豆激酶的分离纯化、基因结构、蛋白质结构、生物学功能及其在医疗上的溶纤特性进行了综述     

缫丝蚕蛹与黄豆的纳豆菌发酵上清液功能活性的比较

蚕蛹是我国"食品新资源"的一种,也是仅有的昆虫类原料。该文以缫丝副产物—新鲜蚕蛹为研究对象,接种纳豆菌(Bacillus natto)发酵并探讨其发酵产物的生物活性,期望发掘蚕蛹的新功能和新价值。研究表明,蚕蛹蛋白质、脂肪含量极高,氨基酸组成与黄豆相似,纳豆菌在蚕蛹培养基和黄豆培养基中的生长曲线相似。煮熟蚕蛹发酵液的抗氧化性高于新鲜蚕蛹,在发酵32 h时ABTS自由基清除率达到96. 8%,降血脂和抗凝血活性及纳豆激酶活力比鲜蛹发酵液低。2种蚕蛹发酵液在抗氧化活性、降血脂活性和抗凝血活性上的表现均优于黄豆发酵液,其中,蚕蛹发酵液在32 h时3种胆酸盐结合率都在75%以上。综上,蚕蛹纳豆菌发酵产物具有显著的优势,该研究是实现缫丝蚕蛹高价值利用的重要途径。     

富硒阿胶-菊粉咀嚼片的制备及降血糖活性研究

以阿胶、菊粉、富硒卡拉胶等为原料,依次经过原料的干燥、混匀、制软材、干燥、过筛、压片后制得富硒阿胶-菊粉咀嚼片。本文概述了富硒阿胶-菊粉咀嚼片的制备工艺流程并对优化过程进行描述,研究了其降血糖活性功能。研究结果表明:阿胶、菊粉、富硒卡拉胶、硬脂酸镁的添加量分别为24.5%、73.5%、1%、1%,以95%的乙醇溶液为黏合剂,可制得表面光滑、色泽均匀,独特风味的富硒阿胶咀嚼片。小鼠降血糖实验结果表明,样品组小鼠在灌胃处理30 d后随机血糖有显著降低,与二甲双胍作用相当,因而该产品具有显著降低血糖水平功效。      

纳豆固态发酵条件优化

目的:为提高纳豆中纳豆激酶含量,本文对纳豆固态发酵条件进行优化。方法:以纳豆激酶活性为指标,采用纤维蛋白平板法测定纳豆激酶酶活;采用Plackett-Burman方法对影响纳豆发酵的几个因素（大豆破碎度、接种量和发酵温度等）进行研究并筛选具有显著效应的影响因素;通过最陡坡实验逼近最大响应区域,应用Box-Behnken实验设计及响应面分析确定主要影响因素的最佳条件。结果:大豆破碎度、接种量和发酵温度是影响纳豆激酶酶活的主要因素;优化后最佳发酵条件为:大豆破碎度4、接种量7.9%、发酵温度32℃,在此条件下,纳豆激酶酶活为（2140.5±83.2）U/g。      

市售纳豆产品中菌株的分离、鉴定及纳豆激酶活力比较

为考察不同品牌纳豆中纳豆芽孢杆菌的异同,本研究选取了三个产地六个品牌的纳豆产品作为试材,分别是日本的北海道、御城、竹炭、木场水户纳豆,北京的燕京纳豆和大连的美屋纳豆。从这六种品牌的纳豆中分离纯化得到了15个具有纳豆芽孢杆菌典型菌落特征的单菌落,并且与模式菌株1.1086株分别从菌落形态、菌株的细胞形态和生理生化实验以及16S rRNA序列分析四个方面进行对比鉴定。结果表明,这15株芽孢杆菌都为纳豆芽孢杆菌,其中10株与模式菌株的16S rRNA序列有99%的同源性,3株是98%,2株是97.5%。并且对挑选出的15株纳豆芽孢杆菌采用琼脂糖-纤维蛋白平板的方法测定纳豆激酶的活性,结果表明NB-8和NB-12具有较高的纳豆激酶活性,酶活力分别达到了1076.663 U/m L和1073.85 U/mL。      

纳豆芽孢杆菌发酵液中嘌呤碱基的检测

采用反相离子对色谱法对纳豆芽孢杆菌发酵液中的嘌呤碱基进行检测,优化后的检测条件为:色谱柱,Hitachi La Chrom C18(4.6mm×250mm,5μm);紫外检测波长254nm;流动相:甲醇∶四丁基氢氧化氨∶乙酸∶水=10∶1.485∶1.485∶987.03(v/v/v/v);流速:0.7mL/min;柱温:25℃。检测结果表明该方法标准曲线良好:A、G、H、X四种嘌呤碱基的线性范围分别为0.5~20.0、1.0~50.0、1.0~50.0、0.5~20.0mg/L,相关系数均大于0.9991,方法回收率为96.9%~102.4%。基于优化后的检测方法,检测得出纳豆发酵前后发酵液中总嘌呤含量分别为41.33、84.99mg/L,说明嘌呤碱基含量在发酵过程中有所增加。      

纳豆芽孢杆菌蛋白酶水解大豆蛋白的研究

探讨了纳豆芽孢杆菌蛋白酶对大豆蛋白的水解作用,采用单因素实验、部分析因、中心组合及响应面分析的方法考察了底物浓度、起始pH、温度、酶浓度、酶解时间对大豆蛋白水解的影响,并由此确定了最佳的酶解工艺条件:大豆蛋白浓度4%、酶与底物蛋白比为3460u/g蛋白、温度58℃、起始pH10.0、水解时间为8h。在优化的条件下大豆蛋白的水解度可达到42.385mg/100g,多肽得率为66.5%。      

纳豆激酶分离纯化技术的研究

纳豆激酶具有很强的体内外溶栓作用,并具口服吸收溶栓的优点,是一具有开发潜力的食源性溶栓药物.对纳豆激酶分离纯化技术的研究现状和发展趋势进行了综述,讨论了传统的柱层析与新型的超顺磁性聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)微球、膨胀床吸附和反胶团萃取等分离方法,提出了将新型分离技术应用于纳豆激酶的分离以提高其纯度和产率,对大规模生产的分离纯化有一定的指导意义.     

传统大豆发酵食品中纳豆芽孢杆菌的分离及纳豆发酵

以我国传统大豆发酵食品和稻草样品为来源,根据蛋白酶和纳豆激酶活性、产聚谷氨酸(poly-L-glutamic acid,γ-PGA)性能和生物素依赖特性进行筛选,分离获得了8株具有纳豆芽孢杆菌特性的枯草芽孢杆菌菌株。利用16S～23S rRNA内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列对分离菌株进行系统发育分析,结果显示其与已报道的纳豆芽孢杆菌菌株以较高的相似性(93%～97%)聚类一簇,独立于同种内的其他枯草芽孢杆菌。其中TC100和TC103菌株制作的纳豆粗酶液中的纳豆激酶活性最高,分别为550 U/mL和519 U/mL。HN48和TC100菌株发酵纳豆的感官效果最好,评价分数均为19分。综上所述,本研究根据纳豆芽孢杆菌特有的性状,有效分离获得了具有纳豆芽孢杆菌特性的8株菌株,通过菌株形态和ITS基因序列的系统发育分析确定分离菌株均属纳豆芽孢杆菌,8株分离菌株均能产纳豆激酶,发酵生产纳豆的感官效果良好,有望作为纳豆生产的工业菌株。