S-腺苷酰-L-甲硫氨酸对肝癌细胞HepG2增殖、迁移及癌基因C-myc表达的影响

目的探讨S-腺苷酰-L-甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAMe)对肝癌细胞HepG2增殖、迁移及癌基因C-myc表达的影响,为深入研究SAMe在肝癌治疗中的作用奠定基础。方法体外培养HepG2细胞,MTT法检测不同浓度SAMe作用不同时间对HepG2细胞增殖的影响;细胞划痕法检测最适浓度SAMe对HepG2细胞迁移能力的影响;RT-PCR、免疫细胞化学法及Westernblot法检测SAMe对HepG2细胞癌基因C-myc转录、蛋白定位及表达的影响。结果终浓度为15.0μmol/L的SAMe处理细胞5d,细胞抑制率达54.6%,且抑制作用呈时间与剂量依赖性;经15.0μmol/LSAMe处理的细胞迁移能力明显下降,愈合速率为对照组的76.78%;细胞中癌基因C-myc的转录和蛋白表达均明显下降,蛋白定位无明显变化。结论 SAMe可通过降低C-myc的表达,抑制HepG2细胞的增殖和迁移,为肝癌治疗性药物的研究提供了一个新的方向。     

神经纤毛蛋白1基因RNA干扰质粒对胃腺癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响

目的探讨神经纤毛蛋白1(Neuropilin1,NRP1)基因RNA干扰质粒对胃腺癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响。方法构建NRP1基因特异性shRNA表达质粒,经脂质体介导转染入人胃腺癌SGC7901细胞。采用Western blot法检测细胞中NRP1蛋白的表达水平,应用流式细胞术和Annexin-V-FITC/PI法检测细胞的增殖水平和凋亡率。结果经酶切及测序鉴定证明,shRNA-NRP1质粒构建正确,转染SGC7901细胞48h后,能有效抑制NRP1蛋白的表达,G0/G1期细胞百分比显著升高,S期细胞显著减少,细胞凋亡率增加。结论 shRNA-NRP1质粒能有效抑制胃腺癌SGC7901细胞株NRP1蛋白的表达,细胞周期阻滞在G0/G1期,从而降低细胞的增殖水平,诱导细胞进入凋亡期。     

地塞米松对血管内支架介入术后再狭窄作用的实验研究

目的观察地塞米松对体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞（SMC）增殖的作用，探讨其对血管内支架介入术后远期再狭窄的防治价值。方法组织贴块法体外原代培养大鼠胸主动脉SMC，取第６～１０代作实验用，MTT法检测地塞米松不同浓度和不同作用时间对SMC增殖的效果，并用RT-PCR法检测不同浓度地塞米松作用下大鼠胸主动脉SMC增殖细胞核抗原（PCNA）mRNA的表达情况。结果①地塞米松呈剂量依赖性抑制体外培养的大鼠SMC增殖，不同时间和不同浓度对其抑制程度不同。各浓度组之间总A值变化经方差分析差异有显著性，F＝３６．０２，P＜０．００１；两两比较较高浓度组１０ －６ 及１０ －５ mol／L抑制率相似，A值无显著性差异，P＝０．０６５；低浓度组１０ －１１ mol／L与对照组相比差异无显著性，P＝０．５６７；余各两两比较差异均有显著性，P＜０．００１；②地塞米松以浓度依赖模式抑制大鼠SMC的PCNA mRNA表达。方差分析F＝１５．４０７，P＜０．００１。较低浓度组（１０ －９ mol／L及１０ －１１ mol／L）与对照组相比，无显著性差异，P值分别为０．４８及０．５６。其余各组同对照组相比，差异有显著性，P＜０．０５。结论地塞米松呈剂量依赖性抑制大鼠SMC增殖，１０ －７ mol／L浓度以上可起效，并能持续抑制９６h以上，较低浓度地塞米松在作用时间延长时也有可能抑制SMC的增殖。     

氦氖激光照射对小鼠脾淋巴细胞增殖反应影响的试验研究

目的：研究氦氖激光照射对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响。方法：以BALB/c小鼠为研究对象，应用7.33，11.00,14.67,22.00和36.67j/cm^2五种剂量的氦氖激光器照射小鼠哈德腺，连续照射8d，并于照射开始后第3、6、9、13和第17d动脉监测实验鼠脾淋巴细胞增殖反反应：结果:7.33,11.00,14.67和22.00j/cm^2四个剂量组均可增强脾淋巴细胞增殖反应，但11.00，14.67和22.00j/cm^2三个剂量组在第3d就达到峰值，此后逐步下降，而7.33j/cm^2剂量组直到第9d才达到峰值，且维持时间最短。与此相反的是，36.67j/cm^2剂量组则在第3d就出现抑制效应，直至第13d才恢复至正常水平。结论：适当剂量的氦氖激光照射可对小鼠脾淋巴细胞增殖反应产生增强效应，而过大剂量He-Ne激光则对免疫机能产生抑制效应。     

脱脂乳的乳酸菌发酵和酶解产物对小鼠脾淋巴细胞增殖影响的比较

为探讨脱脂乳乳酸茵发酵产物和碱性蛋白酶水解产物对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,采用凝胶过滤法将各发酵和水解产物进行分离纯化,测定不同处理方法和不同分子量范围的肽段对小鼠脾淋巴细胞增殖作用的差别.结果显示,经乳酸菌发酵或酶水解后的脱脂乳蛋白,尤其是分子量范围<3kDa的小肽具有较强的免疫调节活性.因此,发酵或水解用于开发低致敏乳源蛋白基料是可行的.     

藏灵菇嗜热链球菌胞外多糖对人结肠癌细胞的增殖抑制

探讨从藏灵菇中筛选的嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)所产胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)对人结肠癌HCT-8细胞增殖的影响.采用CCK-8法测定EPS对HCT-8细胞生长的抑制率;形态学观察EPS对HCT-8细胞的杀伤作用;流式细胞术检测EPS对HCT-8细胞周期的影响.结果显示:EPS对HCT-8细胞增殖有明显的抑制作用,且呈时间.剂量依赖性;倒置显微镜下观察部分细胞脱壁、核碎裂、固缩,细胞悬浮坏死;细胞周期分析显示G1期细胞百分率增大.说明EPS通过直接杀伤人结肠癌HCT-8细胞,使细胞周期阻滞于G1期而抑制细胞增殖,从而发挥抗肿瘤作用.     

山楂原花青素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨山楂原花青素提取物、表儿茶素和原花青素B2对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响。方法：体外培养SMMC-7721细胞,噻唑蓝法检测不同质量浓度山楂原花青素对细胞增殖的影响;4’,6-二脒基-2-苯基吲哚染色法观察细胞凋亡,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白的表达;检测每组细胞中过氧化氢酶（catalase,CAT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、Na＋K＋-ATP酶活力和丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量。结果：山楂原花青素提取物、表儿茶素和原花青素B2呈时间和质量浓度依赖性地显著抑制SMMC-7721细胞的增殖（P＜0.05）,促进细胞凋亡;与对照组相比,SMMC-7721细胞中SOD、CAT、GSH-Px、Na＋K＋-ATP酶活力降低,MDA含量升高;细胞凋亡相关蛋白半胱天冬酶-8、半胱天冬酶-3、Bcl-2相关X蛋白表达量和多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶片段化增加,Bcl-2表达量降低。结论：山楂原花青素可通过影响抗氧化酶活力和细胞凋亡相关蛋白来抑制SMMC-7721细胞增殖,促进细胞凋亡。     

白藜芦醇对人髓母细胞瘤细胞Daoy增殖的影响及其作用机制

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对人髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)Daoy细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法体外培养Daoy细胞,用不同浓度的Res(10、20、40、80μmol/L)作用不同时间(24、48和72 h),CCK-8法检测Res对Daoy细胞的增殖抑制率;电镜观察Res对细胞内自噬溶酶体的形成情况;Cathepsin D活性检测试剂盒检测Cathepsin D活性;Western blot法检测Daoy细胞中Beclin 1、LC3、p62和溶酶体相关膜蛋白2(lysosomeassociated membrane proteins 2,LAMP2)的表达及3-甲基腺嘌呤(3-MA)和巴弗洛霉素A1(Bafilomycin A1)对Res作用的影响。结果 Res作用后,Daoy细胞的增殖抑制率随Res浓度的升高及作用时间的延长呈升高趋势;随着Res浓度的升高,Daoy细胞内自噬溶酶体形成数量、Cathepsin D酶活性、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值、Beclin 1、LAMP2蛋白的表达均呈上升趋势,p62蛋白表达下降。3-MA作用后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值、Beclin 1、LAMP2的蛋白表达水平明显下降(P <0. 05),p62的表达水平明显上调(P <0. 05);Bafilomycin A1处理后,Beclin 1、p62及LAMP2表达明显降低(P <0. 05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值明显增高(P <0. 05)。结论 Res可抑制髓母细胞瘤细胞Daoy的增殖,其机制可能与Res促进自噬形成与成熟过程有关。     

黑豆糖蛋白的结构分析及抗氧化和免疫活性

本实验从黑豆中分离得到两种糖蛋白，并对其结构组成、抗氧化活性和免疫活性进行研究，为糖蛋白的高效开发利用提供理论依据。采用碱提醇沉法提取黑豆糖蛋白粗品，命名为HDJ，通过DEAE-52纤维素柱层析和Sephadex G-100柱层析分离纯化获得两个均一组分，分别命名为HDJS2和HDJS5-2。利用物理化学方法和光谱法对其化学组成及结构进行分析，通过测定总还原力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，DPPH）清除率及总抗氧化能力研究两种糖蛋白的抗氧化活性，采用噻唑蓝比色法评价两种糖蛋白的免疫活性。结果表明：HDJS2（3.20×104 Da）和HDJS5-2（3.89×104 Da）主要是由中性糖和蛋白质组成的糖蛋白，其糖肽键类型均为O-型糖肽键。HDJS2主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、岩藻糖和96.1%氨基酸组成；HDJS5-2主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和71.3%氨基酸组成。抗氧化分析结果表明，HDJS2和HDJS5-2的还原能力、DPPH清除能力和抗氧化能力呈剂量依赖性关系。此外，HDJS2和HDJS5-2均能够促进脾淋巴细胞增殖。结论：HDJS2和HDJS5-2具有潜在的抗氧化作用和免疫调节作用。     

木瓜种子含抑制大肠癌成分

日本一项新研究显示,木瓜种子中的一种成分能对大肠癌增殖的蛋白质起到抑制作用。这一发现将有助于开发出治疗和预防大肠癌的有效药物。冈山大学教授中村宜督率领的研究小组发现木瓜种子中含有的异硫氰酸苄酯能促使抑制癌细胞增殖的蛋白质与过剩堆积的异常蛋白质结合,从而能对促进癌细胞