人SIAH2基因真核表达质粒的构建及其对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响

目的构建人SIAH2基因真核表达质粒,并检测其对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响。方法采用PCR技术从MDA-MB-231细胞中扩增SIAH2基因全长序列,克隆至表达载体pcDNA-3.1-hisB中,构建重组真核表达质粒pcDNA-3.1-hisB-SIAH2,转染MDA-MB-231细胞,Western blot法检测SIAH2蛋白在细胞中的表达;免疫荧光法检测SIAH2蛋白在细胞中的定位;流式细胞术检测细胞细胞周期的分布;MTT法检测细胞增殖活力的变化。结果重组真核表达质粒pcDNA-3.1-hisB-SIAH2经双酶切(EcoRⅠ/XhoⅠ)和测序证实构建正确;重组质粒转染细胞后,细胞中SIAH2蛋白的表达水平明显升高(P0.05),且在细胞核内表达,处于S期的细胞比例明显增加;重组质粒转染细胞后48、72和96 h,细胞的增殖活力明显增强。结论成功构建了SIAH2基因的真核表达质粒,并在MDAMB-231细胞中表达了SIAH2蛋白;SIAH2蛋白能明显促进乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,提示其在乳腺癌的发生和进展中发挥了重要作用,有望成为治疗乳腺癌药物开发的新靶点。     

大豆多肽对前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨大豆多肽对前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡的影响,为临床应用大豆多肽治疗前列腺癌提供实验依据。方法用不同浓度的大豆多肽(5、10、15、20μmol/L)处理前列腺癌PC-3细胞不同时间(24、48、72 h),采用MTT法检测细胞的增殖活力,倒置显微镜观察细胞的形态,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期。结果大豆多肽可抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖,将细胞周期阻滞在G2/M期,诱导细胞凋亡,中晚期细胞凋亡趋势明显,且呈明显的剂量与时间依赖性;随着大豆多肽浓度的增加,前列腺癌PC-3细胞密度逐渐降低,边缘趋于圆滑,细胞间隙逐渐增大,局部可见部分已固缩的细胞及死亡的细胞碎片。结论大豆多肽可抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,诱导细胞凋亡,在临床治疗前列腺癌方面具有广阔的应用前景。     

氨基葡萄糖对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

目的探讨氨基葡萄糖对小鼠腹腔巨噬细胞(PMФ)免疫功能的影响。方法用壳聚糖制备氨基葡萄糖纯品,通过体外实验测定其对小鼠PMФ增殖、吞噬中性红、产生NO和IL-1能力的影响。结果氨基葡萄糖能够显著增强PMФ对中性红的吞噬能力,提高NO和IL-1的生成量,而对PMФ的增殖能力无明显影响。结论氨基葡萄糖能够活化PMФ,增强小鼠的免疫功能。     

重楼提取液对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及其作用机制

目的观察重楼提取液对人结肠癌SW480细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法采用不同浓度(10、20、40、80μg/ml)的重楼提取液,分别作用于体外培养的SW480细胞12、24、36和48h,采用MTT法检测其对SW480细胞的抑制率;并以半数抑制浓度的重楼提取液与体外培养的SW480细胞作用24h后,显微镜下观察细胞形态,并通过流式细胞术分析其对SW480细胞细胞周期的影响,RT-PCR和Western blot法分别测定SW480细胞干细胞因子(SCF)mRNA和蛋白表达的变化。结果各浓度重楼提取液对SW480细胞均有不同程度的抑制作用,且存在剂量-效应和时间-效应关系,重楼提取液作用后的SW480细胞出现变性、坏死的形态改变;经重楼提取液处理24h后,SW480细胞在S期的分布比例下降,G0-G1期和G2/M期细胞分布增多(P<0.05);同时SCF表达增高(P<0.05)。结论重楼提取液可能通过抑制肿瘤细胞的蛋白质与DNA合成,抑制肿瘤细胞的有丝分裂,进而抑制SW480细胞增殖,且其作用机制可能与SCF无关。     

东宫泉对黑素细胞增殖及其酪氨酸酶活性的影响

目的探讨东宫泉对黑素细胞增殖及其酪氨酸酶活性的影响。方法体外培养小鼠B16黑素瘤细胞,倒置显微镜下观察不同浓度东宫泉(将50倍浓缩液0、2、4、8、16、32、64倍稀释)对B16黑素瘤细胞形态的影响,MTT法检测不同浓度东宫泉对细胞增殖的影响,蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法测定不同浓度东宫泉对B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性的影响。结果经16倍稀释的东宫泉处理48h的B16黑素瘤细胞生长旺盛;东宫泉对B16黑素瘤细胞具有高浓度抑制、中低浓度激活的作用,8倍和16倍稀释为最佳激活浓度(P<0.05);东宫泉对酪氨酸酶亦具有高浓度抑制、低浓度激活的作用。结论东宫泉对黑素细胞增殖和酪氨酸酶均具有双向调节作用。     

红豆越橘体外抗氧化和抗细胞增殖活性研究

本文以红豆越橘(Vaccinium Vitis-idaeaL.)为研究对象,在测定其总酚、黄酮和花色苷含量的基础上,研究了红豆越橘提取物对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基、脂质过氧化自由基的清除作用、铁离子螯合能力、铜离子还原能力,同时还测定了提取物的总还原力。并采用MTS法评价对人肠癌HT29细胞和人肝癌HepG2细胞体外增殖的抑制情况。实验结果表明,红豆越橘提取物含有较高的多酚、黄酮和花色苷,有显著的抗氧化性和抗细胞增殖活性,呈明显的剂量依赖关系。     

人肝再生增强因子对人外周血单个核细胞增殖的影响及其机制

目的探讨人肝再生增强因子(hALR)对人外周血单个核细胞(PBMC)增殖的影响及其机制。方法梯度离心分离PBMC,将细胞分为正常对照组、刀豆蛋白A(ConA)(5mg/L)组和ConA(5mg/L)+hALR(30mg/L)组,分别培养10min、30min、1h、2h、4h后,MTT法检测各组各时间点细胞增殖水平,钙荧光指示剂法检测细胞内游离Ca2+浓度的变化,Western blot法检测细胞内胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化程度。结果4h内,各组细胞的增殖水平差异无统计学意义,但ConA组细胞增殖水平已表现出逐渐升高的趋势。正常对照组细胞内Ca2+浓度在加入Fluo-3/AM后2h达高峰,ConA组1h达高峰,ConA+hALR组10min达高峰。正常对照组细胞内磷酸化的ERK随培养时间的延长而逐渐减少;ConA组细胞内磷酸化的ERK在30min达高峰,之后逐渐降低;ConA+hALR组细胞内磷酸化的ERK在2h前明显低于ConA组。结论hALR可能通过影响细胞内Ca2+浓度的变化峰值和磷酸化的ERK,来抑制人PBMC的免疫功能,从而影响其增殖。     

补中益气汤含药血清对Lewis肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察补中益气汤含药血清对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡的影响,探讨补中益气汤治疗肿瘤的机制。方法:以补中益气汤给大鼠灌胃,腹主动脉采血并制备血清。MTT法检测含药血清对肺癌细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪测定肺癌细胞细胞凋亡。结果:补中益气汤不同浓度含药血清组与空白对照组比较均可明显抑制肺癌细胞体外增殖,差异有统计学意义(P<0.05);补中益气汤不同浓度含药血清组Lewis肺癌细胞凋亡率与空白对照组比较,明显升高,且随着含药血清浓度的增加,细胞凋亡率明显上升,具有浓度依赖性。结论:补中益气汤含药血清对肺癌细胞体外增殖有明显的抑制作用,且可促进肿瘤细胞凋亡。     

加味香砂六君子汤抑制胃癌细胞增殖、侵袭及其机制的研究

目的:探讨加味香砂六君子汤含药血清对胃癌细胞SGC7901增殖、侵袭的影响及其机制。方法:20只Wistar大鼠随机分为空白组,加味香砂六君子汤低剂量组、中剂量组、高剂量组[(1.55、3.1、6.2 g·(kg·d)~(-1)]及5-FU组(0.5 g·L~(-1)),每组5只。对照组灌服等体积生理盐水,按常规方法动物等体积灌胃,每天2次,连续5 d。末次灌胃后1 h固定动物,按无菌操作进行动物颈动脉采血,分离血清,56℃,经0.22μm滤膜抽滤除菌,制备低剂量组、中剂量组、高剂量组含药血清干预人胃癌SGC7901细胞。CCK8法观察不同浓度含药血清对细胞增殖影响;Transwell细胞侵袭实验检测含药血清作用SGC7901后细胞侵袭能力;梯度PCR检测Smo、Ptch1、Gli1的mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测Smo、Ptch1、Gli1蛋白表达水平。结果:不同浓度含药血清对SGC7901增殖有明显抑制作用,随着浓度的增加,抑制率更加明显,且各实验组之间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,各浓度含药血清作用后SGC7901细胞穿膜细胞数降低(P<0.05);与对照组比较,不同浓度的含药血清可明显降低Smo、Ptch1、Gli1的mRNA表达(P<0.05);各实验组Smo、Ptch1、Gli1蛋白表达也明显减少(P<0.05)。结论:加味香砂六君子汤含药血清对胃癌细胞增殖有抑制作用,抑制细胞侵袭,其机制可能与抑制Hh信号通路活化有关。