碱性蛋白酶抑制剂lupI-MSSS原核表达载体的构建及其蛋白表达、纯化

低温碱性金属蛋白酶MP是从菌株YS-80-122中提取纯化的,属于沙雷氏蛋白酶家族,与该家族报道的其他酶的结构类似,在MP基因下游有一抑制剂基因lup I,该抑制剂可以完全抑制蛋白酶MP的活性。在野生型抑制剂基因的基础上,通过定点突变将Lup I的N端增加Met-Ser-Ser-Ser,命名为Lup I-MSSS,通过构建p ET28alup I-MSSS原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳结果表明该蛋白的大小约11 kDa,与预测的蛋白分子量一致。对影响蛋白诱导表达的诱导剂添加时间、诱导温度、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、诱导时间4个因素进行优化,并经初步优化得到了其诱导表达的条件为:接种量2%,诱导剂添加时间3 h,诱导剂IPTG终浓度0.5 mmol/L,诱导温度为37℃,诱导时间为8 h。表达的蛋白依次通过超滤,Superdex 200凝胶过滤层析,Q-Sepharose离子交换层析进行纯化,结果显示目的蛋白纯化倍数为20,比活力为15 720U/mg,活性回收率达60.7%,纯化后的lup I通过高效液相色谱法进行纯度分析,其纯度可达99%以上。     

双酶法制备银杏抗氧化肽工艺研究

为获得制备银杏抗氧化肽的最佳工艺,采用2709碱性蛋白酶和胃蛋白酶分步水解银杏种仁蛋白,以总还原能力为指标,考察酶用量、酶解温度、pH值和酶解时间这4个因素对银杏种仁蛋白酶解效果的影响。通过响应面试验得出2709碱性蛋白酶的最佳酶解工艺为：酶用量为6976U/g、酶解温度为55℃、pH值为8.9、酶解时间为5h,此时银杏种仁蛋白酶解液的总还原能力(A700nm)为1.278;通过正交试验,得到胃蛋白酶的最佳酶解工艺为：酶用量为9000U/g、pH值为3.0、酶解温度为50℃、酶解时间为2h,此时银杏种仁蛋白酶解液的A700nm为1.636。     

酶解花生蛋白在面条加工中的应用

以脱脂花生蛋白粉为原料,用乙醇溶液浸制备花生浓缩蛋白,制得的花生浓缩蛋白再经菠萝蛋白酶解,得到的浓缩酶解蛋白与小麦粉混合,并添加一定比例的谷氨酰胺转移酶,通过正交试验及感官评定确定最佳的工艺条件。结果表明：浓缩酶解花生蛋白添加比例为8%时,谷氨酰胺转移酶量为900U/kg时,面条质感最好。添加酶解后花生浓缩蛋白能有效改善面条品质,提高其营养价值。     

响应曲面法优化碱性蛋白酶提取林蛙残体胶原蛋白

以提取林蛙油后的剩余林蛙干残体为原料,通过碱性蛋白酶法提取胶原蛋白。以胶原蛋白提取率为指标,对影响胶原蛋白提取pH 值、加酶量、酶解温度和酶解时间4 因素进行研究,在单因素试验基础上,采用响应曲面分析法,得出最优酶提取工艺条件,并根据实际生产优化为：pH10、加酶量1.5%、酶解温度50℃、酶解时间2.5h,在此工艺条件下,林蛙残体胶原蛋白提取率为55.38%,胶原蛋白成品的纯度64.15%。     

辣椒骨中芽孢杆菌的生理生化特性分析

以从辣椒骨分离出M-4-B1菌株为研究对象,对其进行形态鉴定和生理生化特性分析。结果表明,M-4-B1菌株在糖发酵实验中只产酸,不产气;在甲基红实验中产酸不产气,吲哚实验既不产酸也不产气。该菌株最适pH为8.0,最适温度为37℃,最适NaCl浓度为0.5%。在40℃,pH为7.0的条件下蛋白酶活力为28.36μ/g。     

发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

研究分离纯化发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶(cell envelope proteinase,CEP)的方法及其酶学性质。用50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH7.8)悬浮菌体,进行超声波破碎,细胞质量浓度为0.06g/mL,破碎功率330W,工作220次(工作时间3s,间隔时间5s),离心取上清液即为粗酶液。60%硫酸铵沉淀,Sephacryl S-300 HR凝胶层析,Native-PAGE割胶回收纯化发酵乳杆菌的CEP。用纯化的CEP 酶解脱脂乳,酶解液ACE(angiotensin I-converting enzyme)抑制率为50%。SDS-PAGE检测CEP分子质量为32.5kD,最适酶反应温度为41℃,最适酶反应pH值为8.0。Mg2+、Co2+、Ca2+对CEP活性有激活作用;Zn2+、Ni2+、PMSF、EDTA对CEP活性有抑制作用,说明CEP为丝氨酸蛋白酶且酶的活性中心结构的维持与金属离子有关。     

锂离子电池陶瓷复合全固态电解质的制备和性能研究

以负载Al₂O₃的无纺布为支撑膜, 浸涂PEO-LAGP-SN-LiTFSI的乙腈共混液干燥后制得新型复合固态电解质膜(CLASP)。该膜的热稳定性好, 即使在170℃的高温下依然不发生形变。当浸涂共混液中PEO: LAGP: SN: LiTFSI为3: 1: 1: 1, 固含量为10wt%时, 室温电导率可以达到3.66×10^-5 S/cm, 100℃时电导率可达2.52×10^-4 S/cm. CLASP膜的电化学窗口宽, 以该膜代替液态电解质装配的全固态LiFePO₄/CLASP/Li电池, 在55℃循环时表现出良好的循环稳定性, 高的库伦效率, 有望成为电化学性能优越的全固态电解质。     

响应面优化弹性蛋白酶酶解罗非鱼下脚料的工艺研究

以罗非鱼加工鱼片的下脚料鱼头、鱼骨、鱼尾等为原料,选用弹性蛋白酶对其水解,通过响应面进行分析并优化酶解条件.以水解度与多肽含量为指标,分别对酶浓度、温度、pH值、料液比、酶解时间等因素对弹性蛋白酶酶解罗非鱼下脚料水解效果的影响进行分析.结果表明,弹性蛋白酶水解罗非鱼加工下脚料的最佳条件为：酶浓度0.553 mg/g,料液比1:5、自然pH、温度41.94 ℃、酶解3.31 h,在此条件下得到的水解度为18.09%,多肽含量为0.9 mg/mL.     

氯化聚乙烯用量对三元乙丙橡胶/尼龙共混胶性能的影响

研究了增容剂氯化聚乙烯（CPE）的用量对三元乙丙橡胶/尼龙（EPDM/PA）硫化胶热空气老化前后和用非极性油处理后力学性能及耐磨性能、耐油性能的影响。结果表明,随着CPE用量的增大,EPDM/PA硫化胶热空气老化后拉伸强度和100%定伸应力呈上升趋势,扯断伸长率和永久变形均缓慢下降,邵尔A硬度保持不变。用非极性油处理后EPDM/PA硫化胶的拉伸强度和扯断伸长率随CPE用量的增大呈上升趋势,100%定伸应力基本不变。CPE的加入对硫化胶的拉伸强度、撕裂强度、扯断伸长率等性能有一定的提高,说明EPDM和PA两相的相容性改善,在用量为6份时硫化胶的力学性能较佳。随着CPE用量的增大,DIN磨耗呈下降趋势,耐磨性能提高;质量变化率和体积变化率略有降低,耐油性能有所提高。     

酶解法制备草鱼皮蛋白水解物增殖嗜热链球菌

嗜热链球菌被认为是一种多功能益生菌,将Neutrase 0.8L、Protease P “Amano”6、ProteAX、Alcalase 2.4LFG和风味中性蛋白酶5 种草鱼皮蛋白水解物作为培养嗜热链球菌的氮源,以水解物对嗜热链球菌的增殖效果为评价指标,选择最佳水解用酶,并利用正交试验优化酶解条件。结果表明,5 种微生物蛋白酶中,Neutrase 0.8L是水解草鱼皮蛋白的最佳用酶,最佳的酶解条件为：加酶量1%、酶解时间80 min、起始pH 6.5、料水比1∶2（m/V）。利用Neutrase 0.8L酶解法制备得到的富含胶原蛋白肽的草鱼皮蛋白水解物,是一种培养嗜热链球菌的理想氮源。