黄鳍鲷骨骼肌α-辅肌动蛋白的分离纯化及抗体制备

目的黄鳍鲷骨骼肌α-辅肌动蛋白的分离纯化及多克隆抗体制备.方法采用低温抽提、硫酸铵分级沉淀及两次DEAE-Sepharose离子交换等方法获得α-辅肌动蛋白,并通过免疫大鼠制备了抗α-辅肌动蛋白多克隆抗体.结果经SDS-PAGE检测得到高纯度的α-辅肌动蛋白,分子质量约为100kDa.Western blot检测结果显示,制备的多克隆抗体具有较高的效价和良好的特异性.结论从海水黄鳍鲷骨骼肌中得到高度纯化的α-辅肌动蛋白,并制备了滴度高、特异性好的多克隆抗体,为研究鱼类保鲜储藏过程中α-辅肌动蛋白的分解变化提供了重要的手段.     

梅山猪与三元杂交猪肌内脂肪含量、μ-钙蛋白酶和蛋白降解对嫩度的影响

目的:比较梅山猪与三元杂交猪(杜洛克猪×长白猪×大白猪)的剪切力、肌内脂肪含量、μ-钙蛋白酶及蛋白降解的差异,分析影响梅山猪肉嫩度的因素。方法:选取6头纯种梅山猪和6头三元杂交猪,取背最长肌为实验材料,采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫印迹技术测定μ-钙蛋白酶在宰后45 min的降解和整联蛋白、伴肌动蛋白在宰后成熟1、3、7 d的降解情况。结果:梅山猪肉在宰后成熟1、3、7 d的剪切力值均显著低于三元杂交猪(P0.05),在宰后成熟1 d的肌内脂肪含量显著高于三元杂交猪(P0.05)。在宰后45 min,梅山猪的μ-钙蛋白酶的80 kD百分含量显著高于三元杂交猪,78 k D和76 kD百分含量显著低于三元杂交猪(P0.05),梅山猪的μ-钙蛋白酶的自我降解程度较低,这与梅山猪的蛋白降解情况相一致。梅山猪的整联蛋白在成熟3d的相对光密度值显著高于三元杂交猪(P0.05),宰后成熟3 d和7 d的降解率显著低于三元杂交猪(P0.05),伴肌动蛋白在成熟1 d和3 d的相对光密度值显著高于三元杂交猪(P0.05)。结论:梅山猪的整联蛋白和伴肌动蛋白降解较少,这与μ-钙蛋白酶的降解有关,而μ-钙蛋白酶和蛋白降解对梅山猪肉的嫩度影响不大,梅山猪肉相对较高的肌内脂肪含量解释了其较高的嫩度。     

肉的成熟研究

<正>肉的成熟过程是指牲畜屠宰后在肌肉组织内发生的一系列物理化学和生物化学变化,这些变化大体可分为两个阶段:     

肾系康方及其拆方亚组对系膜增生性肾炎模型大鼠肾组织α-SMA、HGF的影响

目的:观察肾系康全方及其益气活血组、滋阴清热组2个拆方组对系膜增生性肾小球肾炎(mesangial proliferative glomerulonephritis,Ms PGN)大鼠肾组织α平滑肌肌动蛋白(Alpha smooth muscle actin,α-SMA)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的影响,以明确该方及2个组成部分发挥的作用强弱,并探讨其部分作用机理。方法:以雄性SD大鼠为研究对象,采用隔日口服牛血清白蛋白并尾静脉注射葡萄球菌肠毒素B及皮下分点注射完全氟氏佐剂和不完全氟氏佐剂的方法复制Ms PGN模型,应用免疫组化法检测各组大鼠肾组织中α-SMA、HGF表达水平并进行半定量分析。结果:肾系康方与2个拆方组均可降低肾组织中α-SMA表达,上调肾组织中HGF表达,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);拆方组中,益气活血组明显优于滋阴清热组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);各治疗组作用强度为全方组>益气活血组>滋阴清热组。结论:肾系康方能够抑制肾组织α-SMA的表达,上调HGF的表达,可能是其防治肾小球硬化和肾脏纤维化的作用机制之一;肾系康方及其拆方均有明显作用,益气活血组明显优于滋阴清热组,而全方组更为显著。     

双水相法制备鳜鱼（Siniperca chuatsi）肌动蛋白及定量分析

以鳜鱼肌原纤维蛋白为研究对象,通过高分子与低分子醇-盐双水相体系成相能力分析,建立双水相分离纯化鳜鱼肌动蛋白的方法,基于高效毛细管胶束电动色谱(micellar electrokinetic capillary chromatography,MECC)耦合二极管阵列检测器(diodearraydetector,DAD)探索MECC-DAD法定量检测鳜鱼肌动蛋白的新方法。结果表明,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳纯度鉴定和肌动蛋白提取率计算确定异丙醇-硫酸铵双水相体系为最佳分离体系,在单因素试验的基础上,利用响应面法分析确定了双水相提取鳜鱼肌动蛋白的最佳工艺条件:当异丙醇质量分数26%、硫酸铵质量分数11%、pH 9.0时,鳜鱼样品肌动蛋白提取率为11.04%,与模型预测值接近。MECC-DAD分析结果显示,肌动蛋白的定量出峰时间约为10 min,毛细管电泳图谱基线平稳无杂峰。本实验为名贵鱼类质量品质属性的鉴定及鱼类肌动蛋白标准品的研制奠定基础,为鱼类蛋白功能开发利用及快速定量检测提供理论依据。     

鸭胸肌肉加热过程中肌动球蛋白解离研究

为了解鸭胸肌肉加热过程中肌动球蛋白变化情况,本实验以鸭胸肉为材料,研究了加热温度（45、50、55、60、65、70 ℃）和加热时间（0、1、10、20、30、60 min）对肉中肌动球蛋白解离的影响。采用蛋白质免疫印迹技术测定肌动蛋白的含量。结果表明：在45 ℃加热条件下,肌动球蛋白几乎未发生解离（P＞0.05）;而在50、55 ℃或60 ℃加热条件下,随着加热时间的延长,肌动蛋白含量先增加后降低,但均较对照组显著性增加（P＜0.05）;65 ℃加热60 min,肌动蛋白含量降至对照组水平;70 ℃加热条件下,加热时间为30 min或60 min,检测不到肌动蛋白的存在。因此,加热温度为50～60 ℃,加热时间为10～30 min时能显著促进肌动球蛋白解离。     

肌球蛋白的解离研究进展

肌球蛋白是肌肉中含量最高的蛋白质,占肌原纤维总蛋白质的60%。肌球蛋白能提高肉制品的保水性和嫩度、增强脂肪乳化稳定性、改善凝胶肉制品品质,对肉制品的加工具有重要意义。然而,肌球蛋白通常被束缚在肌原纤维粗肌丝中,若要充分发挥其作用,需将其从肌原纤维中解离出来。该研究综述了肌动球蛋白的解离对加工肉制品品质的影响,并在此基础上进一步讨论了肌动球蛋白的解离机制,同时对加工过程中温度、pH值、食盐与焦磷酸盐等影响肌动球蛋白解离的因子进行研究和总结,为肉制品加工提供新思路,为提高加工肉制品品质奠定基础。     

扁果枸杞肌动蛋白基因片段的克隆及其表达特征分析

为克隆扁果枸杞(Lycium barbarum Bianguo)肌动蛋白基因作为基因表达模式分析的内参基因,根据几种茄科植物肌动蛋白氨基酸序列保守区设计引物,以扁果枸杞3周龄叶总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增肌动蛋白基因片段并连接到p MD18-T载体上,阳性克隆经PCR检测后测序。结果表明,该基因片段长598 bp,编码198个氨基酸,与枸杞(Lycium chinense)核苷酸序列的相似度和同源性分别达97%和100%,说明是肌动蛋白基因片段,命名为Lb ACT。荧光定量PCR分析表明,盐处理下Lb ACT基因在各器官中的Ct值稳定,可作为内参基因用于研究扁果枸杞功能基因的表达模式分析。     

冰藏罗非鱼片能量代谢酶与品质的相关性分析

目的:探究罗非鱼片在冰藏期间能量代谢部分酶活性与品质的相关性;方法:采用分光光度法测定罗非鱼片冰藏期间的Ca2+-ATP酶、Mg2+-ATP酶与乳酸脱氢酶的活性变化,同时测定p H、肌球蛋白与肌动蛋白含量随冰藏时间的变化趋势,通过SPASS软件进行相关性分析。结果:罗非鱼片冰藏期间的p H呈先下降后上升的变化趋势,肌球蛋白发生明显降解,肌动蛋白含量与冰藏时间呈显著负相关(p≤0.05,r=-0.836)。Ca2+-ATP酶活性在冰藏第4d活性已降低至初始值的42.9%;Mg2+-ATP酶在冰藏第2d显著升高,后期仍有持续上升的趋势;乳酸脱氢酶活性与冰藏时间呈显著正相关(p≤0.05,r=0.625)。结论:冰藏罗非鱼片Ca2+-ATP酶、乳酸脱氢酶活力同p H均符合Karl Pearson直线关系式,呈显著相关性(p≤0.01),ATP酶与乳酸脱氢酶在一定程度上与肌原纤维蛋白的降解有关。     

精密肝切片中乙醛活化肝星状细胞模型的建立

目的: 在精密肝切片中利用乙醛激活肝星状细胞,建立一种星状细胞激活的体外模型,为研究和筛选阻抑肝纤维化发生的药物奠定基础。方法: 利用振荡切片机制备精密肝切片,建立培养系统。以700μmol·L^-1乙醛孵育切片,培养0、2、4、6h,测定培养基和组织匀浆中谷胱甘肽S-转移酶(GST)、乳酸脱氢酶(LDH)和羟脯氨酸(Hyp)含量,观察病理切片中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果: 与0h相比,乙醛培养2、4、6h培养基的GST、LDH漏出量均显著升高(P<0.05)。切片组织Hyp含量6h较0h相比明显升高(P<0.05)。免疫组化片镜下可见4、6h有α-SMA阳性细胞表达,图像分析显示面积和阳性率较0h明显增加(P<0.05)。结论: 精密肝切片与终浓度为700μmol·L^-1乙醛共孵育6h可活化切片中星状细胞,该技术可作为良好的体外肝星状细胞激活模型。α-SMA免疫组化是一鉴定体外星状细胞激活的可靠指标。