LPS诱导小鼠急性肺损伤TLR4及TNF-α表达

目的:研究脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤机制。方法:实验分为正常对照组、模型组及抗体组;正常对照组小鼠腹腔腔内注射等量0.9%Na Cl。模型组腹腔内注射LPS(4 mg/kg)。抗体组在造模前8~10 h,应用小鼠Toll样受体4/髓样分化蛋白2(TLR4/MD2)复合物抗体腹腔内注射50μg。各组均在造模5 h后留取血和肺组织,采用细菌内毒动态浊度法检测血浆LPS的含量,HE染色判定小鼠肺组织病理变化,RT-PCR测定小鼠肺组织TLR4基因表达,Western-blot测定TLR4蛋白表达;ELISA检测小鼠血清中TNF-α的水平。结果:和正常对照组比较,模型组及抗体组小鼠血浆内毒素含量显著升高(P<0.05),模型组小鼠肺组织HE染色呈ALI表现;和模型组比较,抗体组TLR4 m RNA、蛋白及TNF-α的表达明显下调(P<0.05)。结论:急性肺损伤机制可能与LPS和TLR4受体结合介导TNF-α信号途径相关。     

膜分离技术提取米糠脂多糖的研究

米糠是富含植物脂多糖的植物资源。本文就米糠脂多糖制备过程中 ,采用超滤和纳滤进行了分离浓缩米糠脂多糖提取液的尝试。结果表明 ,超滤后米糠脂多糖提取液中蛋白和多糖杂质含量分别降低 85 .5 %和 89.6 %。采用不加水循环纳滤的方式 ,浓缩倍数可达 8倍 ,同时米糠脂多糖浓缩液中的 87.4%的无机盐可除去。     

霍乱弧菌细胞壁抗原菌苗的研究

霍乱弧菌经过 SephadexG-200凝胶柱层析提纯得到2个细胞壁抗原,称为Ⅰ抗原和Ⅱ抗原,分子量分别为110,000 Dal 和60,000Dal。Ⅰ抗原为脂多糖成份;Ⅱ抗原主要为蛋白成份。二者无论经口服或非肠遭途径免疫家免或小鼠都能产生特异性抗体,即其免疫血清在琼脂双扩散试验中有特异性抗原抗体沉淀线形成,杀弧菌抗体和凝集抗体的水平升高,并可使免疫动物耐受一定量霍乱弧菌或霍乱毒素的攻击。当Ⅰ、Ⅱ两抗原混台(称为Ⅰ+Ⅱ抗原),产生的免疫反应较单一种抗原更强。若将Ⅰ+Ⅱ抗原再加入霍乱毒素 B 亚单位,或加热毒素或灭活的霍乱弧菌菌体,免疫家兔或小鼠后,则三者产生的免疫反应也不相同,即在小鼠肠结扎试验中耐受肠毒素攻击的反应性不同,以Ⅰ+Ⅱ抗原加菌体保护效果最好。本研究还用免疫缺陷型裸鼠证明Ⅰ、Ⅱ抗原在体内主要依赖 B 淋巴细胞引起免疫应答,而霍乱毒素主要依赖 T 淋巴细胞引起免疫应答,这是两种不同免疫反应性抗原。     

脂多糖刺激对小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1表达的影响

目的观察脂多糖(LPS)刺激对小鼠腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响。方法取正常Swiss小鼠腹腔巨噬细胞,以LPS分别刺激4、8、12、18、24和36h后,RT-PCR法检测小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1基因mRNA的转录水平,Western blot法检测HMGB1蛋白的表达水平,观察LPS刺激与HMGB1释放的时效关系。结果LPS刺激后4～18h,细胞内HMGB1基因mRNA的转录水平无明显变化,24h开始明显增强,刺激24h和36h与对照组相比,差异有统计学意义,HMGB1蛋白在LPS刺激后18h开始表达明显增加,并一直持续至36h。结论LPS可促进小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1的表达,并具有时间依赖性。     

蟛蜞菊内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞环氧化酶2、NO及TNF-α的影响

目的: 研究蟛蜞菊内酯对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞环氧化酶2(COX-2)、NO及TNF-α的作用。方法: ELISA方法检测 0.2、2、20 μmol/L 不同浓度蟛蜞菊内酯对终浓度为10 μg/mL LPS诱导RAW264.7细胞产生TNF-α、NO及前列腺素E₂(PGE₂)的影响,Western blot方法检测蟛蜞菊内酯对LPS诱导COX-2 酶蛋白表达的影响。结果: LPS能够明显诱导小鼠RAW264.7细胞产生的COX-2酶蛋白,蟛蜞菊内酯低中高3个浓度均能抑制LPS诱导产生的COX-2酶蛋白表达。PGE₂可以被 LPS诱导增加,与空白组比有显著差异。蟛蜞菊内酯低中高3个浓度均能抑制LPS诱导产生的PGE₂、NO和TNF-α,呈现剂量依赖性。结论: 蟛蜞菊内酯抗炎的作用机制可能为抑制COX-2的蛋白表达,进而抑制PGE₂的生成,也可能与抑制NO和TNF-α生成有关。     

细菌内毒素

<正>众所周知,在临床上使用注射剂常易发生不良反应(发冷、寒战、发热、头痛、恶心、呕吐、昏迷、休克等症状)而加重病情,甚至导致病人重要器官功能衰竭而死亡。1875年,Brrodon-Sanderson从腐肉中分离出能引起上述一系列症状的不带活菌的物质,称其为热原,并将上述一系列症状定为热原反应。1923年,Seibert肯定了热原来自于细菌,并指出它能通过一般的除菌过滤器,不能被截     

白芍多糖对D-半乳糖胺/脂多糖诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的: 研究白芍多糖(Paeoniae Radix Alba polysaccharide,PRPY)对D-半乳糖胺/脂多糖诱导小鼠急性肝损伤的保护作用。方法: 使用PRPY预先口服给药21 d,采用D-半乳糖胺/脂多糖诱导小鼠急性肝损伤,检测小鼠血清中谷丙转氨酶（ALT）及谷草转氨酶（AST）、肝组织中超氧岐化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性并结合肝组织病理学检查评价药效。结果: 白芍多糖高剂量组能显著降低肝损伤小鼠血清中ALT、AST水平（P＜0.01）,提高肝组织中SOD、GSH-Px水平同时降低MDA水平（P＜0.01）,低剂量组则无统计学意义（P>0.05）。肝组织切片病理学检查提示,PRPY可以减轻肝脏组织病理性变化。结论: 白芍多糖预先给药对D-半乳糖胺/脂多糖所致的小鼠肝损伤具有一定的预防保护作用,其机制与提高体内氧自由基清除能力相关。     

巨噬细胞移动抑制因子siRNA对肺泡上皮细胞Toll样受体及其下游信号转导通路的影响

目的: 研究巨噬细胞移动抑制因子siRNA对脂多糖刺激的肺泡上皮细胞Toll样受体(TLR)及其下游信号转导通路的影响和作用机制。方法: 用LPS刺激A549细胞,脂质体法分别将巨噬细胞移动抑制因子(MIF) siRNA和非特异性siRNA加入A549细胞进行干预。RT-PCR法检测MIF和TLR2、TLR4 mRNA的表达,Western Blot法分析TLR下游信号转导通路元件髓样分化因子88(MyD88)和干扰素调节因子3(IRF3)蛋白表达,细胞免疫荧光法观察NF-κB核迁移,ELISA法测定细胞培养上清炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6,免疫介质IFN-β分泌水平。结果: MIF siRNA对LPS刺激诱导的MIF和TLR2、TLR4 mRNA高表达有显著的下调作用和部分阻断NF-κB(p65)核迁移。LPS刺激诱导后,MIF siRNA显著降低MyD88蛋白表达和炎症介质TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平,但MIF siRNA对IRF3蛋白表达和免疫介质IFN-β分泌水平无影响。结论: MIF siRNA能抑制A549细胞的炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6过度分泌,其机制可能是MIF siRNA降低了LPS刺激A549细胞诱导的MIF和TLR2、TLR4高表达,及阻断TLR下游信号转导通路元件MyD88和NF-κB核迁移。     

米糠脂多糖提取物中分离蛋白质的研究

米糖是富含植物脂多糖的植物资源。本文就米糖脂多糖制备过程中,蛋白与脂多糖的分离方法进行了研究。结果表明,等电点沉淀法和超滤法的串联应用可充分发挥两者的分离特点,是众多分离蛋白方法中较有效的方法。     

99Tcm-HSA在监测脂多糖诱导大鼠急性肺损伤中的价值

为评价99Tcm标记人血清白蛋白(99Tcm-HSA)在监测脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI)中的价值,将20只尾静脉注射99Tcm-HSA 30 min后的成年Wistar大鼠随机分为4组正常对照组和LPS组分别由静脉注射生理盐水和8 mg/kg LPS ;氯胺酮组和氨基胍组在静脉注射LPS 8 mg/kg后30 min,分别腹腔注射氯胺酮(注射剂量为4 mg/kg)和氨基胍(注射剂量为20 mg/kg).于注射99Tcm-HSA后3 h将大鼠放血处死,测定肺通透指数(PPI)和肺湿重与干重比值(W/D).LPS组大鼠PPI和W/D分别为95.58±11.32和5.38±0.24,均较正常对照组(6.61±0.18和4.19±0.11)显著增高(P<0.01);氯胺酮组和氨基胍组PPI分别为36.80±7.22和33.54±6.22,均显著高于正常对照组(P<0.01),但低于LPS组(P<0.01);氯胺酮组和氨基胍组间的PPI无显著性差异(P>0.05).99Tcm-HSA是监测LPS诱导大鼠ALI肺通透性改变的有效方法.