脂多糖对奶牛乳腺成纤维细胞增殖速率、胞内Toll样受体及其信号通路相关基因mRNA表达水平的影响

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对奶牛乳腺成纤维细胞(bovine mammary fibroblast,BMFB)增殖速率、胞内Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)及其信号通路相关基因m RNA表达水平的影响。方法原代培养BMFB,用LPS(终浓度10μg/mL)刺激BMFB不同时间后,经CCK-8法检测BMFB的增殖速率,实时荧光定量PCR法检测BMFB胞内TLR及其信号通路相关分子m RNA的表达水平。结果 LPS刺激BMFB 0、1、3 h后,BMFB增殖速率差异无统计学意义(P0.05),LPS刺激BMFB 6 h开始,试验组BMFB的增殖速率明显快于对照组(P0.05)。与对照组比较,LPS刺激BMFB 12 h后,TLR2、TLR4、信号转导通路激活核转录因子κB(nuclear factor of kappa B,NF-κB)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha-α,TNF-α)和白细胞介素-1受体相关激酶1(interleukin-1 receptor associated kinase 1,IRAK1)基因m RNA表达水平显著升高(P0.05),髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)基因m RNA的表达水平差异无统计学意义(P0.05)。结论 BMFB可能通过TLR2和TLR4识别LPS,并与NF-κB信号通路级联诱导炎性细胞因子和趋化因子的释放,参与奶牛乳腺先天性免疫应答。     

水通道蛋白4在脂多糖致大鼠感染性脑水肿模型中的表达变化

目的:观察脂多糖(LPS)致大鼠感染性脑水肿后水通道蛋白4的表达情况.探讨其在脑水肿形成发展中的作用.方法:84只雄性SD大鼠,随机分为3组:空白对照组(C组,n=12):生理盐水对照组(S组,n=12):水肿组(L组,n=60).水肿组又按注射脂多精后6h、12h、24h、48h、72h分为5个亚组(n=12).向颈...     

白藜芦醇衍生物TMS对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞中一氧化氮、血管细胞间黏附分子-1及核转录因子-κB表达的影响

目的探讨白藜芦醇衍生物TMS(trans-3,5,4′-trimethoxystilbene)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中一氧化氮(nitric oxide,NO)、血管细胞间黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)及核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)表达的影响。方法取P3代HUVECs,采用CCK-8法检测不同TMS浓度(0、5、10、20、50、100μmol/L)对HUVECs细胞存活率的影响。将P6代HUVECs分为正常对照组、LPS组、TMS(高、中、低浓度)+LPS组及PDTC+LPS组,Griess法检测各组细胞产生NO浓度;Real-time PCR法检测各组细胞中VCAM-1、NF-κB p65基因m RNA的转录水平;Western blot法检测各组细胞中VCAM-1、NF-κB p65和IκBα蛋白的表达水平;免疫细胞化学染色法检测各组细胞中VCAM-1和NF-κB p65蛋白的表达水平。结果 5、10μmol/L浓度组TMS对细胞存活率影响较小,50、100μmol/L浓度组中细胞生存率明显下降(P0.05),且呈时间、剂量依赖性。低、中、高浓度TMS+LPS组与PDTC+LPS组细胞中NO浓度显著下降(P0.05);中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组细胞中VCAM-1、NF-κB p65基因m RNA转录和蛋白表达水平均明显低于LPS组(P0.05),IκBα蛋白表达水平明显高于LPS组(P0.05);正常对照组细胞胞质中有弱VCAM-1蛋白荧光表达,未见NF-κB p65蛋白荧光表达,LPS组可见VCAM-1和NF-κB p65蛋白的强荧光表达,中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组中VCAM-1和NF-κB p65蛋白荧光表达均弱于LPS组。结论白藜芦醇衍生物TMS可抑制LPS诱导HUVECs表达NO、VCAM-1和NF-κB p65,且其抑制VCAM-1效应可能是通过NF-κB细胞信号通路而发挥作用的,本研究为临床治疗血管内皮功能紊乱相关疾病提供了实验依据。     

谷物中生物活性脂多糖的定量分析研究

研究发现被谷物脂多糖激活的东方鲎变形细胞溶解物，具有水解Ｂｚ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－ＰＮＡ，Ｂｏｃ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－ＰＮＡ和Ｂｏｃ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－ＰＮＡ等对硝基苯胺肽类底物的酰胺酶活性，这些肽类底物的羧基端都为Ｇｌｙ－Ａｒｇ顺序。利用东方鲎变形细胞溶解物和Ｂｚ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－ＰＮＡ底物，建立了定量分析谷物及其产品中脂多糖的方法。分析结果表明，米粉和米糠的脂多糖含量高于面粉和麸皮的含量。     

头孢曲松钠对小鼠肠道菌群组成及代谢的影响

采用头孢曲松钠灌胃诱导小鼠肠道菌群失调,研究抗生素对小鼠肠道菌群组成及代谢的影响。通过宏基因组分析小鼠肠道菌群组成;气相色谱法测定小鼠粪便中短链脂肪酸的质量分数;ELISA试剂盒测定小鼠血清中脂多糖浓度。抗生素灌胃后可引起小鼠粪便中厚壁菌门增加,拟杆菌门减少;乙酸、丙酸和丁酸等短链脂肪酸质量分数下降;血清中脂多糖浓度升高。抗生素造成的小鼠肠道菌群紊乱,可导致有害菌的丰度增加并抑制益生菌生长;肠道菌群紊乱可导致短链脂肪酸质量分数下降及脂多糖浓度升高,促进炎症的发生。     

新型Kdo2-lipid A合成菌株构建及其免疫生化活性研究

脂多糖(LPS)是革兰氏阴性细菌外膜的主要组成部分,由疏水的Kdo2-lipid A和亲水的多糖长链组成,能激活先天性免疫系统。Kdo2-lipid A是LPS的生物活性中心,能被开发为新型疫苗佐剂。本研究在前期菌株基础上敲除与LPS庚糖合成相关waaC-waaF基因,构建了直接合成特殊结构Kdo2-lipid A、不含多糖长链的突变株BW003。通过薄层层析和电喷雾电离质谱技术鉴定了BW003合成的Kdo2-lipid A结构;HEK-Blue h TLR4细胞和THP-1细胞刺激实验证实突变株及其合成的Kdo2-lipid A的细胞毒性均明显减弱;生化表型分析结果表明BW003较野生型呈现出更高的外膜渗透性、抗生素敏感性、疏水性及自凝集能力。本研究为后续新型疫苗佐剂开发和产业化利用奠定了理论基础。     

铁观音茶提取物对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及机制

研究铁观音茶提取物对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及机制。用脂多糖作用于RAW264.7细胞,建立炎症模型,并用吲哚美辛和不同浓度铁观音提取物处理,检测NO和IL-6的分泌情况,qPCR检测一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)mRNA相对表达,Western Blot检测炎症相关蛋白激酶(IKKβ),核转录因子κB抑制因子(IκB)、核转录因子κB p65(NF κB p65)及其磷酸化产物的相对表达。结果显示,铁观音茶提取物能显著抑制炎症介质NO分泌和IL-6蛋白表达量(p<0.05),抑制炎症相关基因iNOS、COX-2、TNF-α和MCP-1等表达,并极显著抑制NF-κB信号通路相关蛋白IKKβ、IkB和p65的磷酸化(p<0.01)。以上结果表明,铁观音茶提取物可明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

澳洲坚果油脂对脂多糖诱导小鼠肠道损伤的改善作用研究

澳洲坚果油（MO）富含单不多饱和脂肪酸，尤其是棕榈油酸，具有多种生物活性。本研究采用脂多糖（LPS）构建小鼠肠道损伤模型，研究澳洲坚果油脂对肠道损伤的改善作用及其机理。将小鼠随机分为4组：对照组（CON）、MO组（2.5 mL/（kg·d））、LPS组（5 mg/kg）、LPS+MO组，检测小鼠空肠组织病理变化、抗氧化指标、Toll样受体4/细胞核转录因子（TLR4/NF-κB）基因炎性因子、空肠组织病理学变化、细胞凋亡及炎症通路关键因子表达水平。结果表明：澳洲坚果油改善了LPS诱导的小鼠肠道病理形态；与LPS组相比，LPS+MO组显著增强了总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平（P<0.01），降低了丙二醛（MDA）水平（P<0.01）；LPS+MO组TLR4和NF-κB mRNA转录水平以及NF-κB蛋白表达水平显著低于LPS组；MO显著抑制了LPS诱导的肠道促炎因子肿瘤坏死因子-α（TNF-a）和白细胞介素-6（IL-6）表达水平（P<0.01）。因此，澳洲坚果油具有改善LPS诱导的小鼠急性肠道损伤作用，与提高肠道抗氧化水平和抑制TLR4/NF-κB通路有关。     

大肠杆菌内毒素的固态纳米孔单分子检测

细菌内毒素又称脂多糖，是革兰氏阴性菌细胞外壁的主要成分之一。微量的内毒素就可以引起生物体发热，是炎症反应、脓毒症、败血症等疾病的主要诱发因子。本文提出了一种基于固态氮化硅纳米孔检测单分子脂多糖的技术，利用电介质击穿法制备目标孔径，通过膜片钳监测脂多糖单分子的易位信息，分析得到在不同电压、不同孔径下脂多糖的构象变化，最终得到4.5 nm的最适检测孔径。本研究可用于临床医学检测、环境生物标志物的测定等。