基于负染－电镜的Aβ体外聚集表征测试要点分析

本文应用电镜负染色技术,对阿尔茨海默病（ Alzheimer′s disease, AD）中所涉及的β淀粉样肽（β?amyloid peptide,Aβ）的聚集规律进行了分析。通过对样品的浓度、pH值、温度和时间等设置系列梯度,以及调整负染试剂的种类、浓度和染色时间,优化了Aβ寡聚体样品制备以及电镜观察的最佳条件,获得了清晰的Aβ纤维图像并用以估算纤维长度。实验结果表明：经过六氟异丙醇给予单体化处理,并溶于无水二甲基亚砜（ DMSO）的Aβ（100μmol·L－1）,在pH7?2的PBS中4℃孵育24 h,Aβ寡聚体形态清晰,且Aβ42寡聚体比Aβ40寡聚体聚集趋势更明显。在pH 8?0的硼酸缓冲液中,Aβ42（40μmol·L－1）在37℃孵育72 h后,纤维形成明显;而Aβ纤维样品经过煮沸后再制备负染样品,所得电镜图像更为清晰,便于对纤维长度和结构进一步分析。因此电镜负染色技术,可作为一种快捷,直观的Aβ体外聚集形貌表征的质控方法。     

ILLLI对银屑病患者外周血CD4+T细胞Fas蛋白表达的影响

目的:探索ILLLI治疗对银屑病患者外周血CD4+T细胞Fas蛋白表达的影响。方法:取患者及正常对照组静脉血10ml,肝素抗凝,等份分别加入4支试管中,1支为未照射组,3支照射组分为30、60和120分钟,以输出功率5mW的氦氖激光照射,并进行荧光染色和流式细胞分析。结果:照射前银屑病组表达Fas蛋白的CD4+T细胞百分比为21.4±3.1％,较正常对照组的16.8±2.1％显著增加,差异有显著性,p<0.05。正常对照组在激光照射30分钟、60分钟和120分钟,表达Fas蛋白的CD4+T细胞百分比分别为18.0±5.3％、16.4±5.2％和19.8±6.7％,与照射前差异无显著性,p>0.05;而患者组在激光照射30分钟、60分钟和120分钟时,表达Fas蛋白的CD4+T细胞百分比分别为24.3±2.8％、28.3±5.3％和30.5±7.9％,可以看出,随着照射时间的延长,表达Fas蛋白的CD4+T细胞的数量不断增加,60分钟和120分钟,表达Fas蛋白的CD4+T细胞百分比较照射前增加显著,有统计学差异,p<0.05。结论:银屑病的发病机制可能与细胞凋亡失控等多种因素有关。激光治疗银屑病的机制可能与它下调IL—8水平、上调TNF—(表达、纠正患者的凋亡失控状态有关。     

不同制备条件对SpA分子印迹聚合微球聚合效果的影响

本文用金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)作为模板,以丙烯酰胺为功能单体,利用反相悬浮聚合法合成了SpA分子印迹聚合微球.通过扫描电镜观测不同条件下聚合微球的聚合效果,研究不同制备条件对SpA分子印迹聚合微球聚合效果的影响,从而筛选制备聚合微球最佳工艺;并检测了制备的分子印迹聚合物对SpA的吸附性能.结果表明,反相悬浮聚合法合成SpA分子印迹微球的最佳工艺条件为:分散剂乙基纤维素(EC)加入量0.20 g/100 mL(甲苯);甲苯与水的比例10:3;交联度10%;引发剂加入方式为缓慢滴加;反应温度50℃.反相悬浮聚合法制备的SpA分子印迹聚合微球对SpA的吸附量:6.956×10-3μmol/g.     

锌转运蛋白3在小鼠海马苔藓纤维的定位分布

锌转运蛋白(zinc transporter;ZnT)家族是一组具有六个跨膜区域并富含组氨酸的结构和功能相近的蛋白质,参与游离锌离子的跨膜转运。现已克隆出7个成员即ZnT1-7。其中ZnT3主要分布在神经系统并与含锌神经元突触小泡内锌离子的积聚关系密切。本研究应用免疫电镜技术对ZnT3在     

细胞可溶性蛋白准弹性激光散射分析与SDS-PAGE法比较研究

分别采用SDS-PAGE和准弹性激光散射检测柠檬醛作用白血病K562前后细胞可溶性蛋白变化情况。实验结果表明：SDS-PAGE与准弹性激光散射均能检测出可溶性蛋白种类、大小、含量及其变化：但准弹性激光散射法所获取的参数信息反映了可溶性蛋白天然构象下的真实状态及其动态变化,与传统的SDS-PAGE方法相比较,它是研究外界因素（包括药物）对细胞可溶性蛋白尤其是对蛋白聚合体影响的更好表征方法。     

笼型蛋白仿生纳米结构构建及抗病毒研究

本研究利用笼型铁蛋白亚基的解聚和自组装过程,在蛋白酶促活性位点上仿生合成1～3 nm尺径可控的金纳米团簇,构建了新型高生物活性抗病毒纳米药物Au@HFn,使用多种电镜学方法对其形貌、结构进行了表征;在抗病毒功效方面,Au@HFn具有抑制HepG 2.2.15细胞HBV s/e抗原分泌和降低HBV核酸复制的效果,抑制效果随金团簇尺径增加而提高并与纳米药物的浓度呈正相关;在细胞毒性实验测试中,Au@HFn未发现有细胞毒性,且增高了细胞活力,具有很高的生物安全性。本研究提出了一种新的抗病毒纳米药物构建策略,相对传统小分子抗病毒药物,在提高药物生物兼容性、降低毒副作用和抗耐药性等方面具有较大的潜力和应用前景。     

黄芪甲苷对镉致大鼠支持细胞损伤的保护作用

目的：探讨镉对原代培养大鼠睾丸支持细胞的毒性机制及黄芪甲苷的保护效果。方法：空白对照组、0.5%二甲基亚砜（DMSO）组、镉（50μmol/L）组、镉（50μmol/L）加黄芪甲苷（分别为5、10、20mg/L）组的培养支持细胞用于四甲基偶氮唑盐（MTT）细胞活性实验,DMSO组比较用于验证0.5%DMS0溶剂是否对细...     

测定蛋白质晶体结构的高分辨电子显微方法

用高分辨电镜方法研究不染色的蛋白质分子结构的主要困难有二:样品对电子损伤的高敏感性;样品在真空中三维结构的改变。我们采用性质与水相似而又不挥发的葡萄糖取代水介质,以防止真空损伤。用低剂量(<1e/A~2)电镜技术防止幅射损伤。然而由于样品固有低反差和低剂量成象,象的S/N非常低,以致不能直接观察。但如果样品是严格周期结构并具有足够多的分子或单胞,则重构分子或单胞所需的信息就可从计算机中萃取出来。为了重构需要测定Fourier函数的相位和振幅。两者分别由显微象的Fourier分析和电子衍射花样的测定而被确定。本文讨论测定Catalase和B.Subtilis α-Amylase晶体结构的实验方法。     

金属硫蛋白(MT)分离纯化技术进展

较全面地总结了近几年来金属硫蛋白最常见的分离纯化方法,并较详细地介绍了磁法分离纯化、芯片检测等新技术.     

基于功率型LED的在体整体荧光光学成像

用发光二极管（LED）替代常用的荧光激发光源汞灯,以实现基于LED的整体荧光光学成像（简称整体成像）。首先通过光谱计算分析,探讨了在不同波段与汞灯激发的荧光量相当时LED需要输出的光通量。以此为依据选择LED,构建了基于功率型LED的整体成像系统,用其动态监测绿色荧光蛋白（GFP）标记的肿瘤在裸鼠体内生长和药物治疗过程。实验表明,功率型LED可在类似于整体成像需要较大光功率的场合中应用。光源替代时,若两光源的光谱在选择的波段内分布不一样,则有必要考虑不同波长的光激发荧光效率差异的影响。