红藻条斑紫菜R－藻红蛋白中的能量传递过程

本文通过对条斑紫菜Ｒ－ＰＥ（藻红蛋白）及其α－β－γ亚基的吸收光谱和荧光光谱进行计算机解叠，研究了Ｒ－ＰＥ内发色团之间的能量传递过程，并对Ｒ－ＰＥ及亚基内的各发色团进行了“ｓ”和“ｆ”型的指认。发现在亚基中为“ｆ”型的发色团在Ｒ－ｐＥ（αβ）＿６γ中起着“ｓ”型发色团的作用，且将能量传递给最后的“ｆ”型发色团。荧光激发偏振光谱进一步证明了Ｒ－ＰＥ内的能量转移过程与计算机解叠的结果一致。     

绿脓杆菌外膜蛋白对感染的保护作用

目的 寻找一种防治绿脓杆菌感染的有效方法。方法 用绿脓杆菌外膜蛋白免疫的兔抗血清对4种不同血清型的菌株和1株临床绿脓杆菌进行体内外交叉保护性试验。结果 家兔免疫1周后即产生抗体,并逐渐升高,至第6周抗体滴度达到1:163 840,并维持高水平;抗血清能与4种不同血清型菌株和1株临床菌株产生直接凝集反应。第8周的血清(1:8以上)与其外胰蛋白的ELISA抗体效价相近,小鼠的半保护剂量均在0.05～0.11ml之间。结论 外膜蛋白疫苗具有较强的抗原性,而且具有良好的交叉保护作用。     

重组人促红细胞生成素的HPLC与UPLC肽图谱分析

重组人促红细胞生成素(rHuEPO)是一种糖蛋白,相对分子质量约为30000,目前多用于治疗贫血,其活性主要由蛋白部分决定,因此反映EPO一级结构的肽谱图通常是控制制品质量的重要标准。目前《中国药典》三部(2005年版)规定的方法是在特定条件下,以胰蛋白酶水解rHuEPO,用HPLC分离酶解后的肽段,与对照品进行对比,应保持一致。但HPLC分析rHuEPO酶解肽段存在分析时间较长和响应值相对较低的不足。UPLC(超高效液相色谱系统)与HPLC相比,具有更高的分离能力和灵敏度,采用UPLC分析蛋白质肽图谱,可缩短分析时间,获得更好的结果,从而实现准确…     

重组杆状病毒高效表达猪圆环病毒2型Cap蛋白及其免疫特性分析

目的利用重组杆状病毒高效表达猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)Cap蛋白,并分析该蛋白的免疫特性。方法将PCV2 Cap基因克隆至转移载体pFastBacⅠ,转化感受态E.coli DH10Bac细胞,获得重组杆粒r Bacmid-Cap,转染Sf9细胞,SDS-PAGE和Western blot法检测重组杆状病毒,并于High Five(H5)细胞中进行高效表达。将小鼠随机分为PBS对照组、杆状病毒组、重组杆状病毒组及疫苗对照组,均经小鼠肌内注射,100μL/只,分别于第0和14天进行免疫,于首免后第21、28、35及42天经小鼠眼眶静脉丛采血,分离血清,ELISA法进行检测。结果 PCR和测序分析结果表明,重组转移质粒和重组杆粒构建正确。重组PCV2 Cap蛋白的相对分子质量约28 000,可与抗His标签单克隆抗体及抗PCV2 Cap多克隆抗体发生特异性结合。重组杆状病毒按MOI=5及1感染H5细胞约72 h,PCV2 Cap蛋白表达量最高,表达产量约150μg/mL。首免后第21、28、35及42天,重组杆状病毒组小鼠血清抗体水平明显高于PBS对照组及杆状病毒组(P 0. 001);首免后第21、28、35天,重组杆状病毒组小鼠血清抗体水平明显高于疫苗对照组(P 0. 05),首免后第42天,两组差异无统计学意义(P 0. 05)。结论成功利用杆状病毒表达系统高效表达了PCV2 Cap,重组蛋白可诱导小鼠产生较高水平抗体,本研究为PCV疫苗的研制奠定了基础。     

肌醇生产中蛋白质的危害及去除

本文从肌醇工业生产的实际出发，阐述了蛋白质等杂质对肌醇质量、得率以及原辅材料消耗造成的影响，针对肌醇中蛋白质等杂质的特点，作者在不改变原生产流程，不增添设备的前提下，采用锡山市新宇化工厂生产的净化剂ＦＮＯ－１０，在去除蛋白质方面取得了明显的效果，不但提高了肌醇的质量，而且提高了肌醇得率，减少了辅助材料的消耗，降低了生产成本。     

芴甲氧羰基酪氨酸苄醚的合成研究

研究了硫酸铜存在下溴苄与酪氨酸反应生成酪氨酸苄醚,收率45%。反应中,铜盐先与酪氨酸的羧基作用,生成4∶1的酪氨酸铜配合物,从而有效地保护了酪氨酸的羧基,使苄基化反应选择性地发生在侧链酚基氧原子上。酪氨酸苄醚与芴甲氧羰酰氯在THF中反应得标题化合物,收率98%。     

改性蛋白土填充线型低密度聚乙烯的研究

对超细加工并经硅烷偶联剂处理的蛋白土填充线型低密度聚乙烯进行了研究,结果表明:采用适当的偶联剂及恰当的添加量,改性蛋白土可以降低塑料的成本。     

结核分枝杆菌RD1区重组11 kD蛋白的克隆表达及效力

目的在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD1区11kD蛋白,并检测表达产物的效力。方法构建11kD蛋白编码基因原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)IPTG诱导表达,离子层析柱分离纯化重组蛋白。以结核分枝杆菌致敏豚鼠进行皮肤变态反应(DTH)测定。结果结核分枝杆菌11kD蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,表达蛋白占总菌体蛋白的33%以上,纯化后纯度达95%以上,并可诱导结核分枝杆菌致敏豚鼠产生迟发型超敏反应,5μg/ml11kD蛋白的效力与50IU/ml TB-PPD相当。结论重组11kD蛋白已在大肠杆菌中成功表达,并有望成为结核病皮试鉴别诊断用新试剂。     

人热休克蛋白70基因的克隆、表达及鉴定

目的克隆人热休克蛋白70(HSP70)基因,构建其原核高效表达载体。方法将PCR扩增的HSP70基因克隆到原核高效表达载体pET-28b中,转化大肠杆菌JM109。挑选阳性克隆,提取质粒pE28b70F,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达目标蛋白。结果在大肠杆菌中成功表达了HSP70,表达量约占细菌总蛋白的22·3%,其中可溶性目标蛋白占上清总蛋白的12%。Westernblot表明该目标蛋白具有与鼠抗人HSP70单抗特异结合的抗原活性。通过Ni2+-NTA亲和柱,从1L诱导产物中纯化出约1520mg重组蛋白,纯度在80%以上。结论已成功表达HSP70,为进一步研究其生物学功能和作用机制奠定了基础。     

免疫磁性微球的制备及对IgG的分离

采用反相悬浮包埋法制备SPA-Sepharose免疫磁性微球,并对产物的结构、粒径、磁性能进行了表征,所得产物粒径大约为5μm,表面包裹葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal Protein A,简称SPA),分散性较好,具有超顺磁性。利用SPA对免疫球蛋白G(IgG)的特异性吸附反应及磁性微球的超顺磁性,从猪血清中分离IgG,试验结果表明:SPA免疫磁性微球对猪血清的最大吸附效率是70.12%,可反复使用29次。