基于案例的中国PPP项目特许权协议动态调节措施的研究

合理的特许权协议动态调节措施对减轻项目不确定性、保障风险在各参与方之间的公平分担有着重要意义。通过对1994~2013年间中国31个典型PPP项目的分析,识别和定义了7种具有代表性的特许权协议动态调节措施,并结合案例分析了其在项目中发挥的作用。结合PPP项目风险分担的原则,提出了特许权协议动态调节措施的选择框架,并就如何使其更好地发挥作用提出了相应的政策建议。研究结果为完善我国PPP项目风险管理,促进PPP项目特许权协议谈判提供了重要参考。     

探究暖通空调的水力平衡调节问题

当前随着经济的快速发展,人们生活水平的提高,使得人们对居家环境的重视程度也更加提高。暖通空调是家居重要基础设施,为人们生活提供了极大的便利。但是暖通空调常见的水力平衡调节问题,却成为了困扰人们的一个因素。本文通过分析,提出了解决措施,对于有效提高暖通空调的经济性发挥了积极的作用。     

亚热带传统民居生态节能技术探析

通过挖掘民居建筑精髓,意图以之促进传统生态节能技术的发展。应用图解分析和综合演绎的方法,探索亚热带传统民居朴实形态的背后隐含着的生态节能技术与建造方式的智慧。传统民居的环境设计因地制宜,师法自然,建筑技术顺应气候,结合地理,节能措施因势利导,绿色环保。通过分析认为亚热带民居建筑应结合传统建筑的优良方式并融入现代技术以推动传统节能技术的发展。     

太原市城市供水两虫检测研究

介绍了太原市城市供水的水源概况,采用免疫磁分离及荧光染色法对该市城市供水水源水和出厂水两虫进行了六年的连续检测,并对检测结果给予分析。研究表明:太原市地下水源被两虫污染的风险极小;地表水源中有存在两虫的可能性,应做好源头防护和监控,同时控制地表水厂出厂水浊度。     

儿童房学习区布置法则

9月开学啦!不少小朋友就要告别无忧无虑的生活己的一片学习小天地。如何布置学习区,让孩子爱上可是要动一番脑筋。对处于成长期的儿童来说,选择合适高矮的书桌椅非常重要。家长一定要经常关注孩子的桌椅是否合身,因为过高或过矮的桌椅很容易对脊柱发育造成不良影响。购买前最好让孩子亲自试坐,让孩子两大譬自然下垂．如果桌面正好托着孩子的两小臂．那么书桌的高度是合适的。座椅则要让孩子坐下后双脚能平放在地面上．小腿与大腿基本成90度夹角。当然可调节高度的可升降桌椅也不失为明智选择。另外书桌与墙之间最好整出些缝隙．否则时间久了．很容易在墙上留下一条黑印儿。     

PdAu纳米颗粒非标记免疫传感器测定牛奶中的黄曲霉素B_1

用溶剂热法合成Pd Au纳米颗粒,将其修饰在玻碳电极表面,然后根据抗体的自组装作用将黄曲霉素B1的抗体固定在Pd Au/GCE表面,制得免疫传感器。以[Fe(CN)6]3-作为探针对黄曲霉素B1实现灵敏的间接检测。优化了实验条件对传感器性能的影响。结果表明,在电位为0.2V条件下,该传感器检测黄曲霉素B1的线性范围为0.1~12μg/L;其检测限为0.033μg/L。该传感器选择性好、灵敏度高、具有良好的重现性。     

重组Toll样受体7真核表达质粒的构建及其对髓样树突状细胞免疫功能的影响

目的构建重组Toll样受体7(Toll-ike receptor 7,TLR7)真核表达质粒,并分析其对髓样树突状细胞(dendritic cell,DC)免疫功能的影响。方法用C57BL/6小鼠脾细胞制备原代DC,提取DC总RNA,以其逆转录合成的c DNA为模板扩增TLR7基因,克隆至载体pc DNA3.1(+)中,构建真核表达质粒pc DNA3.1-TLR7。经脂质体Lipofectamine2000将真核表达质粒转染至小鼠DC,经G418筛选阳性克隆。分别采用Real-time PCR及Western blot法检测转染细胞中TLR7基因m RNA转录及蛋白的表达水平;同时采用流式细胞术及细胞因子试剂盒检测转染细胞表面共刺激分子CD80、CD86和MHCⅡ的表达及分泌白细胞介素-6(interleukins-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平。结果经PCR及双酶切鉴定证明重组真核表达质粒pc DNA3.1-TLR7构建正确。转染12、24、48及72 h的DC中均可见TLR7基因的转录及蛋白的表达,且48 h时的转录及表达水平最高。转染48 h后,DC表面共刺激因子CD80、CD86和MHCⅡ的表达水平及其分泌IL-6和TNF-α的水平均显著提高(P0.05)。结论成功建立了重组TLR7真核表达质粒,且其可明显提高DC的免疫功能。     

人葡萄糖调节蛋白78shRNA真核表达质粒的构建及其稳定转染A549细胞系的建立

目的构建人葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 k D,GRP78)shRNA真核表达质粒,并建立其稳定转染A549细胞系。方法根据Gen Bank中登录的人GRP78基因序列(3309)设计3对互补寡聚单链DNA干扰序列(GRP78-mi R-1、GRP78-mi R-2、GRP78-mi R-3)及1对阴性对照,分别插入至载体pc DNA6.2TM-GW/Em GFP,构建shRNA真核表达质粒。在Lipofectamine 3000介导下将各shRNA真核表达质粒分别转染A549细胞,并经Blasticidin S HCl加压筛选稳定的转染细胞系。实时荧光定量PCR和Western blot法检测A549细胞中GRP78基因m RNA转录和蛋白表达水平。结果各shRNA真核表达质粒经测序鉴定证明均构建正确。稳定转染shRNA真核表达质粒的A549细胞,在荧光显微镜下可见均一表达绿色荧光。与空白对照组比较,A549细胞中GRP78基因m RNA转录和蛋白表达水平明显降低(P0.05),阴性对照组无统计学意义(P0.05)。结论成功构建了人GRP78的shRNA真核表达质粒,并建立了其稳定转染的A549细胞模型,为进一步研究GRP78在肺癌细胞的侵袭和转移中的作用机制奠定了基础。     

基于吲哚胺2,3-双加氧酶1活性评价人间充质干细胞免疫调控功能的吸光光度法的建立及优化

目的建立一种基于吲哚胺2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)的活性快速评价人间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,h MSCs)免疫调控功能的吸光光度法,并进行优化。方法以含干扰素γ(interferonγ,IFNγ)的完全培养基激活hMSCs,收集hMSCs培养上清,与三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)和对二甲氨基苯甲醛(paradimethylaminobenzaldehyde,PDAB)反应,检测A492值,通过标准曲线计算样品中色氨酸代谢产物犬尿氨酸(kynurenine)的含量,以反映h MSCs所分泌IDO1的酶代谢活性,并对方法中的培养体系(6、12、24、48、96孔板)、IFNγ处理时间(4、8、12、24 h)、培养基使用量(150、200、250、300、350、400、450及500μl)及IFNγ作用浓度(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、5.0及10.0 ng/ml)进行优化。同时验证方法的特异性,并检测样品保存条件及液氮冻存后不同复苏时间对kynurenine浓度的影响。采用优化后的方法分析不同来源、不同代次的hMSCs分泌IDO1的能力。结果确定最佳检测条件为:培养体系为48孔体系,IFNγ处理时间为24 h,培养基使用体积为200μl,IFNγ作用浓度为10.0 ng/ml。该方法可特异性检测IDO1的活性;除常温外,其他样品保存条件对检测结果影响较小;液氮冻存后复苏24 h可检测到与冻存前水平相当的kynurenine。该方法可有效判断不同供体来源的hMSCs在分泌IDO1功能上的差异。结论该方法可快速、特异、稳定地检测hMSCs分泌IDO1的水平,且操作简便,可用于快速评价h MSCs的免疫调控功能。     

W135群脑膜炎球菌结合物的制备及其在小鼠体内的免疫原性

目的比较不同活化试剂、不同载体蛋白质及不同免疫程序对W135群脑膜炎球菌结合物在小鼠体内的免疫原性的影响。方法分别采用溴化氰(CNBr)和1-氰基-4-二甲基氨基吡啶-四氟硼酸盐(CDAP)为活化试剂,以己二酸二酰肼(ADH)为连接臂制备W135群脑膜炎球菌多糖(group W135 meningococcal polysaccharide,PSW135)衍生物;以碳二亚胺(EDAC)作为缩合剂,将多糖衍生物分别与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)、白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)和重组铜绿假单胞菌外毒素A(recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,r EPA)3种蛋白质共价结合,制备6种PSW135蛋白质结合物;比较4针免疫程序(0、2、4、8周)和3针免疫程序(0、4、8周)对结合物在小鼠体内免疫原性的影响。结果两种活化试剂均能对多糖进行有效活化,且不会破坏多糖的抗原性;制备的6种结合物在小鼠体内均能产生良好的免疫原性,且具有显著的剂次加强效应;采用间隔2周的3针免疫程序和2.5μg/只的免疫剂量,不同类型的活化试剂和载体蛋白质对结合物的免疫原性无显著影响,但以DT为载体蛋白质的结合物的免疫加强效应要弱于以TT和r EPA为载体的结合物;延长免疫间隔时间可显著提高结合物在小鼠体内的免疫原性。结论初步建立了适用于W135群脑膜炎球菌结合疫苗的结合工艺,并为结合物在小鼠体内的免疫原性研究提供了一种新的候选免疫程序。