全文获取类型
收费全文 | 5643篇 |
免费 | 424篇 |
国内免费 | 171篇 |
专业分类
电工技术 | 97篇 |
综合类 | 613篇 |
化学工业 | 806篇 |
金属工艺 | 73篇 |
机械仪表 | 252篇 |
建筑科学 | 1188篇 |
矿业工程 | 37篇 |
能源动力 | 22篇 |
轻工业 | 1564篇 |
水利工程 | 54篇 |
石油天然气 | 29篇 |
武器工业 | 16篇 |
无线电 | 236篇 |
一般工业技术 | 366篇 |
冶金工业 | 98篇 |
原子能技术 | 45篇 |
自动化技术 | 742篇 |
出版年
2024年 | 64篇 |
2023年 | 217篇 |
2022年 | 293篇 |
2021年 | 220篇 |
2020年 | 226篇 |
2019年 | 241篇 |
2018年 | 132篇 |
2017年 | 203篇 |
2016年 | 221篇 |
2015年 | 258篇 |
2014年 | 438篇 |
2013年 | 409篇 |
2012年 | 317篇 |
2011年 | 407篇 |
2010年 | 295篇 |
2009年 | 296篇 |
2008年 | 429篇 |
2007年 | 319篇 |
2006年 | 199篇 |
2005年 | 220篇 |
2004年 | 171篇 |
2003年 | 139篇 |
2002年 | 119篇 |
2001年 | 78篇 |
2000年 | 62篇 |
1999年 | 51篇 |
1998年 | 36篇 |
1997年 | 42篇 |
1996年 | 39篇 |
1995年 | 23篇 |
1994年 | 18篇 |
1993年 | 10篇 |
1992年 | 15篇 |
1991年 | 6篇 |
1990年 | 8篇 |
1989年 | 14篇 |
1988年 | 2篇 |
1986年 | 1篇 |
排序方式: 共有6238条查询结果,搜索用时 0 毫秒
31.
基于块段模型的三维GIS混合数据结构模型研究* 总被引:1,自引:0,他引:1
为了有效地表示三维GIS空间实体,在地质块段模型的基础上,提出了基于八叉树和四面体格网的混合数据结构模型(block octree tetrahedron,BOT模型).采用BOT模型生成算法对块段模型进行重新分割,八叉树作整体描述,四面体格网作局部精确描述,并以不同的灰度值表示不同的单元块属性.同时,为节省存储空间,提出了线性BOT编码技术.实验结果表明,BOT模型充分发挥了八叉树和四面体格网的优点,可以在不增加存储空间的前提下实现对三维目标更高效、更精确的表达. 相似文献
32.
利用Pro/E三维模型与二维图形双向关联功能可以快速生成工程图,但由于在视图表达上有些方面不符合我国制图标准而影响其有效使用.本文针对Pro/E制作工程剖视图时所存在的与制图国标不相符合的问题,提出了解决这些问题的方法和技巧. 相似文献
33.
人Leptin基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的克隆Leptin基因,构建其重组表达菌株,并对表达产物进行免疫学鉴定。方法利用RT-PCR方法从脂肪细胞RNA中扩增出人瘦素前体(pre-Leptin)的cDNA片段和去信号肽序列的Leptin成熟基因片段,并插入pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达重组人瘦素(rh-Leptin)的菌株。结果DNA序列分析显示获得的pre-Leptin和成熟基因片段的序列与预计序列一致,菌株诱导后经SDS-PAGE检测,rh-Leptin表达量达菌体总蛋白的40%以上。Western blot分析显示重组Lep-tin具有免疫学活性。结论已获得高效表达Leptin的重组菌株。 相似文献
34.
[摘 要]目的 克隆并表达大肠杆菌肉碱脱水酶基因。方法 用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB,测定其DNA序列,将caiB基因重组到T7启动子控制下的表达载体pET-28a(+)中,构建表达质粒pETCaiB,转化大肠杆菌BL21(DE3),用1mmol/L异两基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果 克隆得到的肉碱脱水酶编码基因 caiB长度为 1221bp,与文献报道值相比,DNA序列有26个不同,氨基酸序列只有一个不同,即302位的丙氨酸变为苏氨酸。重组菌经IPTG诱导,可高效表达,SDS-PAGE分析表达蛋白相对分子质量约43000,表达产物含量占菌体总蛋白45%以上。结论 得到了高效表达肉碱脱水酶的重组菌,为制备L-肉碱创造了条件。 相似文献
35.
目的构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Vasostatin并检测其在真核细胞内的表达水平。方法将带有信号肽的Vasostatin基因片段克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体上,经酶切鉴定及测序分析证明构建成功后,以脂质体介导法转染293T细胞,通过Westernblot法,检测其在293T细胞内的表达水平。结果所构建的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Va-sostatin转染293T细胞后,在其裂解的上清液中,检测到目的基因的表达。结论已成功构建了pcDNA3.1(+)-Vasostatin表达载体,并在真核细胞中表达了目的蛋白。 相似文献
36.
3-甾酮-△^1-脱氢酶是甾体母核降解的关键酶。能催化3-甾酮化合物在C1.2位处脱氢,提高原有底物的生物活性。利用表达载体pET-30a,实现了简单节杆菌3-甾酮-△^-脱氢酶在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达。利用SDS-PAGE分别对超声破碎后的上清和沉淀进行分析.并用分光先度法检测酶的活力。结果表明,表达出的蛋白主要以无活性的包涵体形式存在。利用Ni离子螯合层析的方法纯化融合蛋白,复性后的酶活比简单节杆菌提高了近10倍。 相似文献
37.
Ⅱ型B族链球菌表面免疫相关蛋白基因的克隆和原核表达 总被引:1,自引:1,他引:1
目的重组表达Ⅱ型B族链球菌表面免疫相关蛋白(Surfaceimmunogenicprotein,SIP)基因,为进一步免疫学研究提供目标蛋白。方法用PCR的方法从GBSⅡ型标准株的基因组DNA中扩增出SIP基因,用T/A克隆法将其插入pMD18T载体,构建原核表达载体pET32aSIP,用BL21(DE3)/pET系统表达TrixSIP融合蛋白,SDSPAGE和质谱分析鉴定表达产物,并对表达蛋白进行初步纯化。结果PCR扩增产物经测序,证实与GenBank中Ⅰa/c型GBS的SIP的基因序列同源性为99%。SDSPAGE显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET32aSIP总蛋白中出现一条相对分子质量为66000的新蛋白带。质谱分析和蛋白质库的比较证实其为B族链球菌表面免疫相关蛋白(SIP)的可能性分数为74。结论已成功表达并初步纯化SIP,为SIP在细菌致病中的作用研究以及相关疫苗的制备奠定了基础。 相似文献
38.
39.
主要分析了材质肌理在雕塑创作中的运用,通过我对泥、木、石、金属及其肌理表现的深层次的认识与分析,结合许多实例,来说明材质肌理在雕塑创作中的重要性。 相似文献
40.
白细胞介素-10基因多拷贝表达盒的构建及在毕赤酵母中的表达 总被引:1,自引:1,他引:1
目的构建白细胞介素-10(IL-10)基因多拷贝表达盒,提高IL-10在毕赤酵母中的表达水平。方法体外构建重组表达载体αIL-10/pAO815,BamHⅠ和BglⅡ双酶切获得目的基因表达盒(AOX-αIL-10),再连接到BglⅡ酶切位点处,依次构建多拷贝重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815。从质粒pPIC9K上用NdeⅠ和SalⅠ双酶切获得Kan抗性基因,重组到多拷贝表达载体n(AOX-αIL-10)/pAO815上。重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815电转化毕赤酵母,PCR筛选含有IL-10基因的酵母转化子,甲醇诱导表达,对表达量高的转化子再次经重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan电转化,高浓度G418抗性筛选二次酵母转化子,使用甲醇诱导表达。ELISA测定IL-10含量,MC/9细胞测定IL-10活性。结果所构建的8拷贝表达盒的重组载体8(AOX-αIL-10)/pAO815和4拷贝表达盒4(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan,转化子分泌表达IL-10水平最高,为(8.25±1.65)mg/L,比活性为1.465×105U/mg。结论已成功构建了高拷贝表达盒,并提高了IL-10在毕赤酵母中的表达水平。 相似文献