重组人成骨蛋白-1基因在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达

目的　研究重组人成骨蛋白 -1(rhOP -1)在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达。方法　利用RT -PCR技术 ,从正常胎儿肾组织总cDNA中扩增得到rhOP- 1成熟肽基因片段 ,再将rhOP- 1成熟肽基因克隆于原核融合表达载体pGEX- 4T- 2中 ,构建表达质粒pCCBC- OP- 1,并转化到大肠杆菌JM10 9(DE3)中 ,在发酵过程中不添加任何诱导剂。表达产物经SDS -PAGE分析。结果　扩增的目的基因序列与文献报道一致。表达的目的蛋白相对分子质量为 14 0 0 0 ,表达量达到菌体蛋白的 4 0 %。结论　克隆了人OP -1成熟肽基因 ,并实现了rhOP- 1的非诱导高效表达。     

微小隐孢子虫CP15/60基因在Hela细胞中的表达

目的 构建隐孢子虫CP15/60真核表达载体pcDNA3.1-15/60,观察其在Hela细胞中的表达。方法用Xho I和EcoR　I从pMD18-T-15/60中酶切得到CP 15/60基因,将其插入真核表达载体pCR3.1（+）的 XhoI和EcoRI位点,构建CP15/60真核表达载体pcDNA3.1-15/60,用脂质体介导法将其转染Hela细胞,并用G418加压筛选,用RT-PCR方法检测外源CP15/60基因的转录,ELISA法和间接免疫荧光法检测其活性。结果 酶切鉴定表明已成功构建了重组真核表达载体pcDNA3.1-15/60,外源CP15/60基因能在转染细胞中有效转录,经检测表达产物具有良好的生物活性。结论 已成功地构建了pcDNA3.1-15/60真核表达载体,并在Hela细胞中具有良好的表达。     

纤溶酶原饼环区5蛋白重组大肠杆菌高效表达体系的建立

目的　建立纤溶酶原饼环区 5 (Humanplasminogenkringle 5 ,hPK 5 )蛋白重组大肠杆菌高效表达体系 ,为高密度发酵创造条件。方法　观察一级、二级种子的生长状态 ,比较表达hPK 5蛋白的 4种重组工程菌株在相同条件下的表达情况 ,选出首选发酵种子 ;对其培养时间、诱导时间、培养基种类、pH等条件进行优化 ;并用凝胶成像分析系统对SDS PAGE结果进行分析。结果　经过筛选 ,JM10 9 pBV2 2 0 hPK 5 (简称JP5 )是获取hPK 5蛋白的首选工程菌株 ,其最佳表达条件是LB培养基 (pH 7.4、溶解氧充足 )、30℃培养 3h、4 2℃诱导 6h。在此条件下 ,JP5表达目的蛋白占菌体总蛋白的 38%左右。结论　为高密度发酵获取hPK 5蛋白奠定了实验基础     

重组杆状病毒高效表达猪圆环病毒2型Cap蛋白及其免疫特性分析

目的利用重组杆状病毒高效表达猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)Cap蛋白,并分析该蛋白的免疫特性。方法将PCV2 Cap基因克隆至转移载体pFastBacⅠ,转化感受态E.coli DH10Bac细胞,获得重组杆粒r Bacmid-Cap,转染Sf9细胞,SDS-PAGE和Western blot法检测重组杆状病毒,并于High Five(H5)细胞中进行高效表达。将小鼠随机分为PBS对照组、杆状病毒组、重组杆状病毒组及疫苗对照组,均经小鼠肌内注射,100μL/只,分别于第0和14天进行免疫,于首免后第21、28、35及42天经小鼠眼眶静脉丛采血,分离血清,ELISA法进行检测。结果 PCR和测序分析结果表明,重组转移质粒和重组杆粒构建正确。重组PCV2 Cap蛋白的相对分子质量约28 000,可与抗His标签单克隆抗体及抗PCV2 Cap多克隆抗体发生特异性结合。重组杆状病毒按MOI=5及1感染H5细胞约72 h,PCV2 Cap蛋白表达量最高,表达产量约150μg/mL。首免后第21、28、35及42天,重组杆状病毒组小鼠血清抗体水平明显高于PBS对照组及杆状病毒组(P 0. 001);首免后第21、28、35天,重组杆状病毒组小鼠血清抗体水平明显高于疫苗对照组(P 0. 05),首免后第42天,两组差异无统计学意义(P 0. 05)。结论成功利用杆状病毒表达系统高效表达了PCV2 Cap,重组蛋白可诱导小鼠产生较高水平抗体,本研究为PCV疫苗的研制奠定了基础。     

当代艺术设计中“中国元素”表达与融合问题的研究

在当代中西方艺术设计领域中,＂中国元素＂已经作为了一种相当普遍的现象和形式出现在了众多艺术作品和设计之中,并且展现了其独特的文化特色和历史底蕴,为当代设计艺术的发展及其推陈出新提供了丰富的创作素材和灵感。本文首先解析了＂中国元素＂的内涵,接着就当代艺术设计中所体现出来的＂中国元素＂的特征进行了分析,并剖析了其与中国传统文化艺术的渊源关系,最后论述和研究了当代艺术设计与＂中国元素＂的表达和融合的机制。     

狗心脏中I_(to)相关钾离子通道表达分析

目的探讨钾离子通道Kv4·3和Kv1·4在正常与心衰的心肌组织中的表达差别,为进一步阐明心衰的发病机理奠定基础。方法建立狗的心衰模型,用Western blot方法对正常与心衰的狗心肌组织中Kv4·3、Kv1·4及辅助亚基Mink的表达进行分析。结果在心衰时,Kv4·3表达有明显下降;Kv1·4表达有所上升,在心肌组织的不同部位,即外层和内层Kv1·4的表达明显不同;同时Mink的表达在心肌外层也有明显下降。结论心衰时,心肌组织中形成Ito的钾离子通道Kv4·3和Kv1·4以及辅助亚基Mink的蛋白表达变化之间可能存在着一些相关性。     

水肠杆菌肉碱脱水酶基因的克隆、测序与高效表达

目的 克隆并表达大肠杆菌肉碱脱水酶基因。方法 用聚合酶链反应（PCR）从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB，测定其DNA序列，将caiB基因重组到T7启动子控制下的表达载体pET-28a( ）中，构建表达质粒pETCaiB，转化大肠杆菌BI21（DE3），用1mmol/L异丙基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导表达。结果 克隆得到的肉碱脱水酶编码基因caiB长度为1221bp，与文献报道值相比，DNA充列有26个不同，氨基序序列只有一个不同，即302位的丙氨酸变为苏氨酸，重组菌经IPTG诱导，可高效表达，SDS-PAGE分析表达蛋白相对分子质量约43000，表达产物含量占菌体总蛋白45%以上。结论 得到了高效表达肉碱脱水酶的重组菌，为制备L-肉碱创造了条件。     

浅论食品添加剂的安全性

介绍了食品添加剂的定义、分类和作用 ,分析了国内外食品添加剂的现状、发展前景及存在的问题 ,综述了食品添加剂的安全性问题及监督管理办法。     

翻译症的关联阐释

翻译症主要指译文对原文的过度依赖而表现出的不地道、不规范现象。从关联视角审视该现象,可以发现,翻译过程中的理解和表达都有可能产生翻译症。     

浅析语言学理论知识对消除汉化英语的作用

在非英语环境下学习英语的现状导致了中国学生英语表达中汉化英语的频繁出现.结合指示语、主位述位结构以及语义关系等语言学知识,探讨大学生英语写作或翻译中存在的汉化英语问题,指出在语法知识基础之上辅以必要的语言学理论知识便能有效解决这个问题.