五种金属离子对Rhodosporidium toruloides Y2产油的影响

研究Fe3+、Cu2+、Mg2+、Ca2+和Zn2+等五种金属离子对Rhodosporidium toruloides Y2产油的影响;采用单因素实验设计法,生物量测定采用重量法,油脂含量测定采用氯仿甲醇法,葡萄糖浓度采用DNS法测定;发酵培养基中添加适当浓度的Fe3+(10 mg/L)、Cu2+(10 mg/L)、Mg2+(0.5 g/L)、Ca2+(1 g/L)和Zn2+(5 mg/L)可提高酵母生物量和油脂含量。其中Cu2+、Ca2+和Zn2+添加对酵母生长和产油的影响较为显著,生物量得率达到0.35 g/g以上,油脂得率达0.20 g/g,分别比空白组增加了16.7%和33.3%;本研究通过优化金属离子浓度提高了R.toruloides Y2生物量和油脂积累效率,为提高微生物油脂生产效率提供了有用的参考。     

赤藓糖醇发酵工艺优化

以解脂假丝酵母CGMCC2．2088为出发菌株,经过菌种选育得生产菌株为研究对象,对该菌株的发酵培养基和培养条件进行优化,其发酵最适温度为32％,对数生产期溶氧控制在30％,发酵期溶氧控制在20％,发酵结果糖醇含量达到181．6g／L。     

“太空人参酵母”在化妆品中潜在应用研究

通过体外细胞平台,从多角度对应用太空育种技术和现代发酵技术而获得的太空人参酵母提取物进行功效验证,为其在化妆品中的应用提供理论依据和科学指导。结果揭示太空人参酵母可以明显促进人原代角质细胞的增殖能力、克隆形成能力及划痕修复能力,并且可以促进基底层基底源生蛋白(Perlecan)的表达;此外太空人参酵母还有助于重离子辐照后的人原代成纤维细胞恢复细胞形态,恢复基底源生蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和弹性蛋白表达的能力。以上结果表明,太空人参酵母具有提高细胞再生能力的活性,具有应用于促肌肤再生类化妆品的潜力。     

全细胞生物催化合成(R)-2-羟基-4-苯基 丁酸乙酯

以2-羰基-4-苯基丁酸乙酯(OPBE)为碳源,从葡萄园土壤中筛选分离得到一株高选择性不对称还原OPBE为(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯[(R)-HPBE]的粘质红酵母(Rhodotorula mucilaginosa CCZU-G5),利用1HNMR、GC-MS、液相色谱(LC)对产物结构进行了表征。构建了Rhodotorula mucilaginosa CCZU-G5全细胞催化还原OPBE合成(R)-HPBE的反应体系并对反应条件进行了优化。结果表明,最适催化反应条件为:在20 mL磷酸盐缓冲液(PBS)反应体系中,反应温度为35℃,pH=7.5,菌体质量浓度200 g/L,葡萄糖质量浓度30.0 g/L,金属离子Ca~(2+)浓度3 mmol/L,底物OPBE浓度为20 mmol/L,反应时间12h,在此条件下,(R)-HPBE产率达82%,对映体过量值(e.e.)为99.9%。     

人松弛素H2类似物在毕赤酵母中的高效表达及其活性

目的利用毕赤酵母表达系统高效分泌表达人松弛素H2类似物(Human relaxin-2 analogue,HR2),并检测其生物活性。方法通过密码子优化合成HR2基因,构建重组表达质粒pPICZαA-HR2,转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析。表达产物经超滤和柱层析纯化后,切除人工C肽,检测其生物活性。结果经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pPICZαA-HR2构建正确;Tricine-SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白相对分子质量约6 500,表达量占菌体总蛋白的47.6%,为451μg/ml,且为分泌表达;Western blot分析显示,重组蛋白具有良好的反应原性;纯化的重组蛋白纯度达96%;经检测C肽切除的重组HR2对THP-1细胞具有刺激活性。结论成功在毕赤酵母GS115中高效分泌表达了重组松弛素H2类似物,并具有一定的生物活性。     

毕赤酵母产重组木聚糖酶发酵条件的优化及其酶学性质

目的优化毕赤酵母工程菌GS115/xyn11A产重组木聚糖酶的发酵条件,并检测其酶学性质。方法采用单因素试验和L(934)正交试验考察摇瓶发酵条件下培养基起始pH值、诱导剂甲醇添加量、诱导温度及诱导时间对产酶活性的影响;并分析重组木聚糖酶的酶学性质。结果影响重组毕赤酵母产酶的因素重要性依次为:培养基起始pH值>诱导时间>诱导温度>甲醇添加量,重组酵母产酶最佳条件为:起始pH值7.5,甲醇添加量1.5%,32℃诱导96 h,在此条件下进行诱导表达重组木聚糖酶的酶活性可达228.35 IU/ml;酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH值为5.5,在低于40℃和pH 4.5～7.5的范围内较稳定。结论优化了毕赤酵母产重组木聚糖酶的发酵条件,为木聚糖酶的工业化生产及应用提供了依据。     

具有非对映选择性还原6-氰基-（5R）-羟基-3-羰基己酸叔丁酯活性的微生物菌株筛选与鉴定

6-氰基-（3R,5R）-二羟基已酸叔丁酯是合成阿托伐他汀钙的关键手性前体。从自然环境中筛选得到-株具有非对映选择性还原6·氰基-（5R）-羟基-3-羰基已酸叔丁酯活性的茵株X25,结合表型特征、生理生化特征和分子遗传学鉴定,确定茵株X25属于季也蒙毕赤酵母（Pichiaguilliermondii）。研究了P．guilliermondliX25静息细胞非对映选择性还原6-氰基-（5R）-羟基-3-羰基己酸叔丁酯制备6-氰基-（3R,5R）-二羟基己酸叔丁酯过程。结果表明,最佳催化条件为35℃、pH值7．0;在低底物转化率时,能够制备光学纯6-氰基-（3R,5R）-二羟基己酸叔丁酯。     

木糖利用融合子D2的制备与乙醇发酵特性

以树干毕赤酵母（Pichia stipitis）1960（Ps1960）与酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）AADY（ScAADY）为亲本菌株,采用双亲灭活原生质体技术制备木糖利用融合子,并对其制备条件进行了优化。优化后的原生质体制备条件为Ps1960采用2%蜗牛酶和1%纤维素酶在28℃酶解45 min,20W紫外灯距离10 cm照射3 min灭活;ScAADY采用1.5%蜗牛酶和1%纤维素酶28℃酶解50 min,55℃水浴50 min灭活;均采用0.6 mol/L山梨醇为渗透压稳定剂。在该条件下,共得到22株融合子。通过测定各融合子在不同培养基条件下的生物量来评价其木糖代谢和乙醇耐受能力,最终获得能利用木糖高效发酵产乙醇、遗传性状稳定的融合子D2,并进行乙醇发酵条件优化。结果表明,在混合糖质量分数8%、木糖和葡萄糖质量比6：1、5%接种量、30℃、160 r/min、培养72 h条件下,融合子D2发酵产乙醇的产量为40.58 g/L。     

聚合物接枝脂肪酶的合成及其对酶活的影响

利用原子转移自由基聚合方法将含C₂～C₄烷基链的单体化合物分别接枝到皱褶假丝酵母脂肪酶（CRL）表面合成了HEMA-g-CRL、GMA-g-CRL、nPMA-g-CRL和BMA-g-CRL四种聚合物接枝CRL。CD和荧光光谱学分析显示,聚合物接枝导致HEMA-g-CRL、nPMA-g-CRL和BMA-g-CRL分子的α-螺旋和β-折叠含量增加。与此同时,聚合物接枝CRL分子荧光发射光谱也发生了蓝移,意味着其具有更加紧密的分子构象。酶活测定结果进一步显示,聚合物接枝增强CRL酶活227%～278%。随着单体化合物烷基链长增加,聚合物接枝CRL的K _m值由0.17 mmol·L^-1降至0.09 mmol·L^-1。与此同时,聚合物接枝CRL的k _cat值则提高至106～182 s^-1。BMA-g-CRL的催化效率达到了野生型CRL的3.28倍。这反映出聚合物接枝助力了CRL“盖子”结构开启和CRL活性中心暴露,促进底物的转化。稳定性测试表明,聚合物接枝提升了CRL的热稳定性并拓宽了其pH操作范围。     

酿酒酵母对铜离子的吸附

采用啤酒生产过程中产生的废酿酒酵母,对影响菌体对Ｃｕ＾２＋吸附的主要因素进行了探讨,对经不同方法处理的菌体进行了Ｃｕ＾２＋吸附性能的比较分析,并得出了吸附等温曲线,研究了吸附后菌体的法脱和再生。