Catesbeiania-1在毕赤酵母中的表达及其体外生物活性

目的在毕赤酵母中表达抗菌肽Catesbeiania-1,并检测其体外生物活性。方法将从牛蛙皮肤上新分离的一条抗菌肽基因Catesbeiania-1克隆至真核表达载体pPICZaA,构建重组真核表达质粒pPICZaA-Catesbeiania-1。在毕赤酵母GS115中表达重组Catesbeiania-1蛋白,并进行体外生物活性测定。结果所构建的重组表达质粒pPICZaA-Catesbeiania-1序列完整,经Tricine-SDS-PAGE分析,表达的重组Catesbeiania-1蛋白相对分子质量约为5800,分泌性蛋白的表达量为36.3mg/ml。重组蛋白对几种常见的革兰阳性菌和阴性菌均具有较好的抑菌活性,无胰蛋白酶水解活性和抑制剂活性,具有很强的抗氧化能力。结论已成功表达了抗菌肽Catesbeiania-1,表达的重组蛋白具有一定的抑菌活性。     

乙酰肝素酶大亚基在毕赤酵母中的表达

目的构建乙酰肝素酶(HPA)大亚基片段真核表达质粒,并在毕赤酵母中表达重组蛋白。方法根据GenBank中登录的HPA大亚基基因序列设计引物,PCR方法扩增肝素酶基因,构建毕赤酵母真核表达质粒pPICZαA-HPA。电击穿孔法转化感受态毕赤酵母SDM1168,斑点免疫印迹法筛选重组菌株,PCR法鉴定阳性克隆。甲醇诱导表达重组蛋白,Western blot鉴定表达产物。结果构建的重组真核表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确;斑点免疫印迹法筛选出的9个单菌落经PCR扩增,均可见1161bp的目的基因条带;表达产物经Western blot分析,具有良好的反应原性,表达量约为5μg/L。结论已成功构建了HPA大亚基片段真核表达质粒pPICZαA-HPA,并在毕赤酵母SDM1168中分泌表达了HPA大亚基。     

絮凝颗粒酵母悬浮液流变特性比较分析

絮凝酵母细胞流变特性是影响发酵过程重要的基础数据之一。利用旋转黏度计测定自絮凝颗粒酵母悬浮液和其亲本游离酵母悬浮液的流变特性,分别建立流变本构方程并进行模型比较分析。低质量浓度絮凝酵母悬浮液近似为牛顿性流体,随着菌体质量浓度的增加流动行为指数降低,悬浮液为非牛顿性流体。絮凝酵母悬浮液表观黏度随剪切速率增加而降低,表明剪切使絮凝酵母颗粒聚合力降低从而产生剪切稀化现象。利用柠檬酸对絮凝酵母解絮凝从而改变颗粒聚集分布状态,进一步测定流变行为。结果证明,不同絮凝酵母颗粒聚集状态的分布是决定絮凝酵母流变行为的主要因素。     

糖蜜乙醇新菌种助生物燃料升级

<正>5月5日,国家非粮生物质能源工程技术研究中心负责人向记者表示,该中心用比较组学方法培育的高产、高效糖蜜乙醇专用酵母菌种,在甘蔗燃料乙醇新技术产业化示范基地——广西丰浩酒精有限公司实现工业化应用。新菌种能使发酵醪液酒精浓度由目前的10%上升到13.7%以上,酒分提高30%,废液减少30%,能耗降低15%。     

聚合物接枝对脂肪酶活性及稳定性的影响

酶的稳定性和活性一直是困扰其工业应用的主要瓶颈，因此改造酶分子以提升其催化性能是当前研究的重要课题。本工作引入甲基丙烯酸异丁酯(IBMA)和甲基丙烯酸乙酯(EMA)两种疏水性不同的单体分子，通过原子转移自由基聚合分别接枝于褶皱假丝酵母脂肪酶(CRL)表面，合成聚合物接枝脂肪酶pIBMA-g-CRL和pEMA-g-CRL。酶学实验结果显示，聚合物接枝脂肪酶的催化活性和稳定性显著提升。pIBMA-g-CRL和pEMA-g-CRL的催化效率分别达到了野生型CRL的4.39倍和4.68倍。在50℃条件下孵育6 h后，pIBMA-g-CRL和pEMA-g-CRL仍分别保留51%和92%的活性，而野生型CRL的活性则仅剩14%。同样，在pH=9条件下孵育3 h后pIBMA-g-CRL和pEMA-g-CRL能够分别保留52%和83%的活性，并在pH=4~9范围内显示出更好的耐受性。光谱学实验进一步证实了聚合物接枝脂肪酶催化性能的提升与其二级结构和三级结构的变化密切相关。本研究表明，IBMA和EMA的接枝对脂肪酶的稳定性和活性的提升效果显著，是改造脂肪酶的优良材料。     

酿酒酵母对铜离子的吸附

采用啤酒生产过程中产生的废酿酒酵母,对影响菌体对Ｃｕ＾２＋吸附的主要因素进行了探讨,对经不同方法处理的菌体进行了Ｃｕ＾２＋吸附性能的比较分析,并得出了吸附等温曲线,研究了吸附后菌体的法脱和再生。     

响应面优化褶皱假丝酵母脂肪酶催化合成木质甾醇油酸酯

以木质甾醇转化率为指标,考察了10种常见商业化脂肪酶催化合成木质甾醇油酸酯的效果,确定褶皱假丝酵母脂肪酶(CRL)为优选生物催化剂,进一步筛选出正己烷为优选反应介质.在脂肪酶用量、油酸和木质甾醇的物质的量比、反应温度和反应时间这4个单因素考察基础上,通过响应面分析法对酶催化木质甾醇油酸酯合成工艺条件进行优化,并对优化条件进行验证和放大实验.CRL催化合成木质甾醇油酸酯的优化工艺参数为:CRL添加量为木质甾醇质量的10％,油酸与木质甾醇的物质的量比为3.8:1,反应温度为46℃,反应时间为28 h,木质甾醇的转化率为91.56％±0.25％.     

利用假丝酵母进行棉籽饼脱毒的研究

本课题以假丝酵母ZAU－1菌株，研究其对游离棉酚的降解作用。结果表明：假丝酵母ZAU－1降解游离棉酚达90％以上;含游离棉酚368ppm的棉仁饼经该菌株发酵后未检出游离棉粉；Horner′s法急性毒性试验证明为无毒。试验还分析了假丝酵母ZAU－1利用棉仁饼固态发酵过程，以及其固态发酵的动力学特性。     

大曲固态发酵的特性研究

本文着重研究了曩大曲酒精发酵的因子：有机酸、酵母菌数和酶含量等三种因素，得出了在固态配糟条件下有机酸抑制酒精发酵的初始酸度值范围；不同初始酵母数；单位酶含量的变化对酒精发酵的影响；提出了并阐明了发酵环境条件可调控大曲固态配糟酒发酵并依托提出了在现行大生产中降低大曲用量的可能性。