不同地域阪崎肠杆菌基因型的研究和亲缘分析

对实验室分离的34株来自10个国家,5大洲的阪崎肠杆菌进行基因分型。利用BioNumerics软件对这34株菌分国家和大洲进行了亲缘关系的分析。亲缘分析的结果显示来自不同国家和不同大洲的阪崎肠杆菌有可能是基因型相似的菌株,而来自同一个国家的同一份样品中分离得到的两株阪崎肠杆菌则可能亲缘关系很远。     

环介导等温扩增技术在肠杆菌科致病菌检测中的研究进展

环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术是近年来新发展起来的一种恒温核酸扩增技术,该技术具有设备简单、检测速度快、灵敏度高、特异性强以及扩增效率高等优点,已被广泛地应用于食源性致病菌的检测研究。本文重点阐述近年来国内外学者应用LAMP技术在肠杆菌科中常见致病菌的检测研究进展。     

奶粉中阴沟肠杆菌的检测方法研究

本研究发现对奶粉中低含量阴沟肠杆菌的检测,可以采用灭菌蒸馏水36℃增菌24h后,选用自主设计的阴沟肠杆菌分离琼脂进行选择性分离,再用赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶这一组生化实验进行进一步筛选,最后选择ID 32E或VITEK GNI+进行生化鉴定.     

高效捕获阪崎肠杆菌免疫磁珠的制备研究

制备以链霉亲和素——生物素介导偶联的免疫磁珠,通过偶联条件和捕获条件的优化,建立高效、特异富集阪崎肠杆菌的方法。结果表明,按照100μg SA/mg磁珠制备链霉亲和素磁珠,以抗体与磁珠表面链霉亲和素物质的量比为3∶1,37℃偶联30 min,可获得抗体结合量为386.6μg/mg免疫磁珠。在1 mL体系中添加粒径为80 nm的链霉亲和素免疫磁珠0.3 mg室温孵育30 min,纯培养条件下对阪崎肠杆菌捕获效率在80.5%以上,人工污染样品条件下捕获效率可达61.1%以上,非特异性低于5.0%。该免疫磁珠为富集阪崎肠杆菌提供了一种操作简单、捕获效率高、特异性好的方法,可广泛应用于食品中阪崎肠杆菌的检测。     

阪崎肠杆菌脉冲场凝胶电泳分型及耐药研究

目的：研究北京、新疆、广东、辽宁等地和新西兰、美国、印度进口食品中分离的阪崎肠杆菌(ES)分子型别和耐药情况。方法：用限制性内切酶Xba Ⅰ酶切ES 染色体DNA 进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)实验,用BioNumerics 软件对不同地区分离的ES 进行比对,分析菌株之间的相似度。用Vitek 2 进行药敏实验,分析ES 耐药情况。结果：38 株ES(其中ES12 为标准菌株)分成37 个PFGE 型,相似度在25%～100%,未表现出优势带型和地区特异性,而部分食品被遗传紧密相关的ES 克隆株污染。药敏实验结果显示37 株ES 共有9 种耐药谱,部分菌株对呋喃类、头孢类、β- 内酰胺类耐药。结论：建立的PFGE 方法可应用于ES 的分子分型和溯源。     

环介导等温扩增法快速检测阪崎肠杆菌

目的：研究阪崎肠杆菌的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,简称LAMP)方法,实现对食品中阪崎肠杆菌的快速检测。方法：针对阪崎肠杆菌16S rRNA 基因(16S rDNA)及外膜蛋白A(OmpA)基因设计LAMP 引物,扩增后通过电泳或加入显色剂SYBR-GREEN Ⅰ检测。结果：LAMP 法能有效特异地检测出阪崎肠杆菌;以16S rRNA 引物检测阪崎肠杆菌的最低检出限为32CFU/mL,用OmpA 引物检测阪崎肠杆菌的最低检出限达3CFU/mL,扩增产物加入SYBR-GREEN Ⅰ在紫外条件下可见荧光,与电泳检测具有同样的灵敏度。结论：LAMP 法可实现对阪崎肠杆菌的快速检测,在食品检测中具有广阔的应用前景。     

基于宏基因组学的霍氏肠杆菌发酵解析及其烟叶品质提升机制研究

利用宏基因组学技术分析霍氏肠杆菌F8-1(Enterobacter hormaechei F8-1)发酵烟叶期间表面微生物的动态变化,结合烟叶中性香味成分分析及感官分析,探究霍氏肠杆菌F8-1提升发酵烟叶品质的机制。结果表明：发酵后烟叶香气质提高、润甜感突出、杂气和刺激性降低;巨豆三烯酮、茄酮、(E)-β-大马酮和二氢大马酮含量较发酵前分别提高37.40%、59.87%、53.02%和46.61%;烟叶发酵过程中霍氏肠杆菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌为优势菌;糖苷水解酶类数量最多,占发酵期间烟叶表面微生物碳水化合物活性酶的78.3%;肠杆菌属的相对丰度与茄酮、巨豆三烯酮、(E)-β-大马酮、二氢大马酮等中性香味成分含量呈正相关,糖苷水解酶1(GH1)家族的相对丰度与茄酮、法尼基丙酮、巨豆三烯酮等含量呈正相关;GH1家族中的糖苷水解酶可能是烟叶发酵后感官品质提升的关键因素。     

烟叶中β-胡萝卜素高效降解菌株的筛选鉴定及发酵条件优化

从新鲜的豫烟13烟叶中筛选能高效降解β-胡萝卜素的菌株,用GC-MS对其主要降解产物进行检测,利用形态学和16S rDNA进化树对菌株进行鉴定,通过单因素试验和正交试验对菌株的发酵条件进行优化。结果表明：分离到的YT-3菌株为霍氏肠杆菌亚种(Enterobacter hormanii subsp.),该菌株能高效降解β-胡萝卜素,其降解的主要产物为β-紫罗酮、二氢猕猴桃内酯、β-环柠檬醛等香味物质;YT-3菌株的最佳发酵条件为蔗糖质量浓度30 g/L、硝酸钠质量浓度4 g/L、酵母粉质量浓度3 g/L、初始pH值7.0,在该发酵条件下β-胡萝卜素降解率达到97.05%。     

乳粉中坂崎肠杆菌的检测

阐述了坂崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii)的由来、致病性及其检测史，重点介绍FDA的婴儿配方奶粉中坂崎肠杆菌的分离与计数检测程序，同时提供定量结果表示方式，并探讨了坂崎肠杆菌鉴别要点及检测发展趋势。     

产气肠杆菌磷酸酶基因克隆表达及其特性

产气肠杆菌(E.aerogenes IAM1183)的酸性磷酸酶,具有特异转移磷酸基团到核苷5′-位的功能,是极具应用价值的酶。本研究以产气肠杆菌(E.aerogenes IAM1183)的酸性磷酸酶(PhoC)为研究对象,采用基因工程手段,克隆了phoC基因,构建成酸性磷酸酶(PhoC)与麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合表达载体pMKL-c2x-phoC,把其转化到不同的宿主,进行催化研究。结果发现构建成的基因工程菌具有高于原始菌催化5′-IMP生成的能力、水解5′-IMP的活性降低、酶促反应的最适pH值近中性等特点。