板栗花粉雌二醇提取及分离纯化工艺研究

对板栗花粉雌二醇提取条件进行优化,雌二醇的最佳提取条件为:提取温度70℃、提取时间2.5h、乙醇浓度80%、液固比10:1(V/V),用HPLC定量雌二醇的含量为9.72μg/g。AB-8大孔树脂柱层析分离纯化雌二醇,薄板层析和HPLC表征分离纯化情况,其理想分离纯化体系为:洗脱液60%乙醇4BV、丙酮4BV依次洗脱。     

17β-雌二醇乙酸纤维分子印迹复合膜的制备及性能研究

以多孔乙酸纤维膜为载体,17β-雌二醇为模板,采用紫外光引发制备了17β-雌二醇乙酸纤维分子印迹复合膜。试验对膜的选择吸附性和分离透过性进行了探讨。实验结果表明,所合成的乙酸纤维分子印迹复合膜对模板分子17β-雌二醇具有较好的选择吸附性,吸附量达10.2μmol/g;17β-雌二醇/17α-炔雌醇的分离因子为4.7。膜透过实验表明,该分子印迹复合膜能将17β-雌二醇与17α-炔雌醇分离开,表明17α-炔雌醇作为结构类似物在复合膜上的结合牢固性不如模板分子。     

E2弱化双酚A雌激素活性机制

前期研究发现天然雌激素E2可以弱化一种常见雌激素类污染物双酚A的活性,为探讨这一现象的机制,利用人体乳腺癌细胞MCF7,从细胞周期、雌激素受体途径、MAPKs信号途径进行实验．结果表明:E2可诱导DNA合成期细胞显著增高,抑制受体蛋白表达,提高ERK蛋白的表达,进而激活多种转录因子;双酚A显著抑制受体蛋白表达,对MAPKs信号通路基本没有影响,可同时提高DNA分裂期与间歇期细胞比例;两者联合后活化了受体途径和ERK途径,促进Cfos的转录表达,激活cyclin D1蛋白,增加S期及G2期细胞比例．E2弱化双酚A的可能机制为Cmyc蛋白表达下降．     

16α取代雌二醇衍生物的三维定量构效关系和分子对接研究

采用比较分子力场方法(CoMFA)及分子对接方法对一系列雌二醇衍生物的3D-QSAR及其与受体作用方式进行研究,建立了3D-QSAR的CoMFA模型,获得了化合物的相对亲合力RBA(Relative Binding Affinity)与静电场及立体场分布之间的关系;CoMFA模型的统计学参数为:q2=0.667,r2=0.939,sD=0.280,F=49.033,立体场与静电场的贡献分别为56.8%和41.6%.相对亲合力小的化合物一般带有较大的取代基,其对接能量得分较低;相对亲合力大的化合物一般带有较小的取代基,其对接能量得分较高.化合物的对接能量得分和相对亲合力之间有良好的线性关系,其线性相关系数R为0.890.活性口袋周围的环境也与3D-QSAR的立体场分布相匹配.对接结果还显示这类化合物和雌激素的结合主要是通过氢键作用来实现,即3-OH与R394上的氨基以及17-OH与受体残基H524咪唑环上的氮形成的氢键.     

大补阴丸加减联合克龄蒙对卵巢早衰患者卵巢储备功能和免疫功能的影响

目的:观察大补阴丸加减联合克龄蒙(戊酸雌二醇片、雌二醇环丙孕酮片)治疗卵巢早衰肾阴虚证的临床疗效及对巢储备功能和免疫功能的影响。方法:将120例患者随机分为对照组和观察组,每组60例。对照组采用克龄蒙(戊酸雌二醇片、雌二醇环丙孕酮片)治疗,观察组在对照组治疗基础上加用大补阴丸加减汤(熟地黄30 g,知母15 g,黄柏10 g,龟板30 g,女贞子20 g,北沙参20 g,淫羊藿15 g,丹参20 g,桑葚子20 g,夜交藤30 g,山萸肉10 g,黄精30 g)治疗。两组患者均以2个月经周期为1个疗程,共治疗2个疗程。两组患者均进行治疗前后Kupperman评分和肾阴虚证评分,检测治疗前后促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)、促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、雌二醇(estradiol,E2)水平;进行治疗前后妇科彩超检查,记录卵巢最大平面的平均卵巢直径(mean ovarian diameter,MOD)、卵巢动脉收缩期峰值流速(peak systolic velocity,PSV)和子宫内膜厚度;检测治疗前后CD3+、CD4+和CD8+水平,并进行安全性评价。结果:治疗后两组患者Kupperman评分和肾阴虚证评分均显著下降,差异有统计学意义(P<0.01),治疗后观察组Kupperman评分和肾阴虚证评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);治疗后观察组FSH和LH水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),E2水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);治疗后两组患者MOD和子宫内膜厚度均较治疗前增加,观察组增加更为显著,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01),治疗后两组患者PSV较治疗前增多,治疗后观察组PSV多于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);治疗后观察组CD3+和CD4+水平高于对照组,CD8+水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);未发现与中药相关不良反应,两组均没有严重不良事件发生。结论:大补阴丸加减方联合克龄蒙治疗卵巢早衰肾阴虚证患者,能改善症状,纠正性激素的紊乱,促进卵巢功能恢复,调节机体免疫机能,且安全性好。     

17β雌二醇对异丙酚诱导发育期大鼠海马神经细胞凋亡时p38MAPK信号传导通路的作用机制

目的: 探讨17β雌二醇对异丙酚诱导的发育期大鼠海马神经细胞凋亡的作用机制。方法: 将60只发育期SD大鼠随机分为5组：空白对照组（NS组）、异丙酚组（P组）、17β雌二醇组（D1、D2及D3组），每组12只。NS组腹腔注射等体积脂肪乳，P组仅腹腔注射异丙酚；D1、D2及D3组腹腔注射300、600及900 μg/kg 17β雌二醇，30 min后腹腔注射异丙酚。观察大鼠的呼吸频率（R0、R30、R60、R90）、逃避潜伏期时间（TD1、TD2、TD3、TD4、TD5）、海马神经细胞凋亡指数（AI）及cleaved caspase-3、p-p38及p-NF-κB蛋白表达水平。结果: 同NS组比较，P组大鼠注射异丙酚后呼吸频率加快；同P组比较，D1组、D2组、D3组呼吸频率减慢（P＜0.05）。P组大鼠逃避潜伏期显著长于NS组，D1组、D2组、D3组逃避潜伏期显著低于P组(P＜0.05)。P组大鼠AI显著高于NS组，D1组、D2组、D3组显著低于P组(P＜0.01)。同NS组比较，P组cleaved caspase-3、p-p38 及其下游p-NF-κB表达增加(P＜0.01)；同P组比较，D1组及D2、D3组cleaved caspase-3、p-p38 及其下游p-NF-κB表达下调(P＜0.01)。结论: 17β雌二醇可减轻异丙酚诱导的大鼠海马神经细胞凋亡，其作用机制可能与抑制p38MAPK信号传导通路有关。     

湖泊沉积物对17β雌二醇的降解效能

沿湖泊沉积物垂直高度取表层(SL,0～2 cm)、中层(ML,14～16 cm)、底层(BL,28～30 cm)3层底泥微生物为对象,研究了湖泊沉积物对17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)的生物降解效能.结果表明:无论在好氧还是厌氧条件下,E2及其副产物雌激素酮(estrone,E1)的降解行为与沉积物沉积深度和环境温度有密切关系:底泥沉积深度愈深,E2降解速率愈低;在微生物活性温度范围内,环境温度愈高,E2降解速率愈高.好氧条件下,湖泊沉积物中E2降解反应的k值为0.002～0.120 h-1·g-1·L;厌氧条件下,k值为0.002～0.057 h-1·g-1·L.由于诱导驯化及有机物竞争关系减小等原因,向反应体系中再次添加E2后,其k值增大约34％.湖泊沉积物中硝化细菌的存在对E2降解具有促进作用.     

超快速液相色谱-串联质谱法检测人血清中雌酮、雌二醇及雌三醇的方法学研究

建立灵敏、可靠、稳定的柱前衍生化超快速液相色谱-串联质谱(ultra-fast liquid chromatography-mass spectrometry,UFLC-MS/MS)方法检测人血清中超微量雌酮、雌二醇和雌三醇。方法:取200μL血清样品,采用两步液萃取法,通过丹磺酰氯衍生化后进行样品分析,以雌二醇-d3作为内标。采用Welch Ultimate UHPLC XB-C18色谱柱(2.1mm×50mm,1.8μm),乙腈-水(含0.1%甲酸)为流动相,梯度洗脱,流速0.20mL/min,柱温40℃,进样量10μL。在电喷雾离子(electrospray ionization,ESI)源正离子模式下,选择多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式。经检测,雌酮、雌二醇、雌三醇及内标的检测离子对分别为:m/z为504.0→171.0、m/z为506.0→171.0、m/z为522.0→171.0和m/z为509.0→171.0。结果:丹磺酰氯衍生法可大幅度提高雌酮、雌二醇、雌三醇在ESI源下的离子化效率,血清中3种成分的线性范围均为0.01~5.00μg/L,定量下限均达到10ng/L,样品回收率50%以上,批内、批间准确度与精密度均小于15%,满足生物样品的分析要求。结论:该方法灵敏度高、重现性好,可以用于临床血清样品中雌激素水平的定量分析。     

用于检测牛奶中雌二醇的酶热传感技术研究

目的建立一种用于检测牛奶中雌二醇的酶热传感技术。方法羧基化雌二醇经1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC)与β-内酰胺酶偶联。酶热传感器中装SPG酶柱,通过ELISA原理使游离雌二醇与结合雌二醇竞争结合雌二醇抗体,从而检测基质中的雌二醇浓度。优化酶热传感检测体系中的反应底物、系统流速、抗原抗体稀释比例等实验因素。结果磷酸盐缓冲液(PBS)基质中测定IC50值为10.2 ng/m L,线性检测范围:5.1~19.4 ng/m L,最低检测限2.8 ng/m L,变异系数为3.4%,与多种雌激素类结构类似物之间均无交叉反应,特异性良好。牛奶样品中测定IC50值:0.45 ng/m L,线性检测范围:0.24~0.79 ng/m L,最低检测限0.12ng/m L。结论酶热传感技术可以快速检测牛奶中的雌二醇残留,操作便捷、样品前处理简单,是一种高效、经济的适用于食品安全工作现场检测的方法。     

HPLC法测定鸭胚蛋中游离性激素的研究

研究确立了樱桃谷SM3型鸭胚蛋中的游离性激素17β-雌二醇、丙酸睾酮的测定方法。用甲醇提取鸭胚蛋匀浆液中的17β-雌二醇、丙酸睾酮,再经高效液相色谱仪进行定性、定量分析。该方法线性范围为0.05～3.50μg/mL,标准曲线线性关系良好,其回归方程和相关系数分别为17β-雌二醇y=2278.8x+31.46,R~2= 0.999 9,丙酸睾酮y=925.32x-14.812,R~2=0.9996;检测限为17β-雌二醇2.7ng,丙酸睾酮3.4ng;回收率在89.1%～94.6%之间,相对标准偏差<2.3%。该方法操作简便快捷,有较好的回收率和准确度,适合大量的检测胚胎类保健食品中的游离性激素。