携带低氧诱导因子-1α及角质细胞生长因子的减毒沙门菌TPHK的构建及其在低氧应激大鼠胃肠组织中的表达

目的构建携带低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)的减毒沙门菌TPHK,并检测其在低氧应激大鼠胃肠组织中的表达。方法从质粒p IRES-KGF中PCR扩增获得KGF基因片段,经双酶切回收后,与p IRES-HIF质粒进行连接,获得双基因重组质粒p IRES-HIF-KGF,Ca Cl2法转化减毒沙门菌Ty21a,获得重组菌株TPHK。将TPHK菌液灌胃给予大鼠,10~9 cfu/(只·d),饲养7 d后,置模拟海拔6 000 m的高原低氧舱,舱内连续饲养7 d,采集大鼠胃及小肠组织,ELISA法检测HIF-1α及KGF的表达水平。结果重组质粒p IRES-HIF-KGF及重组菌株TPHK经双酶切及测序鉴定证明构建正确。给予TPHK菌液后可明显提高低氧应激大鼠胃及肠组织中HIF-1α及KGF的表达水平(P<0.001)。结论成功构建了携带HIF-1α及KGF的减毒沙门菌TPHK,且其可提高HIF-1α及KGF在低氧应激大鼠胃肠组织中的表达。     

植物甾醇酯对饮食性高脂血症治疗作用研究

研究植物甾醇酯对高脂血症小鼠的治疗作用。连续饲喂健康、雄性昆明SPF小鼠高脂饲料21d,建立高脂血症小鼠模型。然后在喂基础饲料的同时,高脂模型组经口灌胃生理盐水,药物组经口灌胃血脂康药物(20mg/kg·d),其余3组分别灌胃植物甾醇乙酸酯、油酸酯、硬脂酸酯等三种植物甾醇酯(100mg/kg·d),观察植物甾醇酯对小鼠脂质代谢的影响。3种植物甾醇可不同程度地降低高脂血症小鼠的血清总胆固醇(TC)、密度低脂蛋白(LDL-C)、动脉硬化指数(AI),降低高血脂小鼠的肝重、肝脏TC和TG。其中,甾醇乙酸酯与甾醇油酸酯对小鼠高脂血症的治疗效果比较理想,且明显好于甾醇硬脂酸酯。实验结果表明,植物甾醇酯具有调节血脂作用,对高脂血症小鼠有良好的治疗效果。     

复方心康口服液心肌保护作用的实验研究

目的: 探讨心康口服液对急性心肌损伤的保护作用。方法: (1) 将小鼠分为对照组、运动衰竭组(运衰组)、牛磺酸+运衰组(牛磺酸组)、丹参 +运衰组(丹参组), 采用不同比例配伍的心康口服液用于小鼠, 观察其游泳至衰竭时间。(2) 用 Wistar 大鼠建立离体心脏模型及心脏损伤模型, 分为对照组、缺血损伤(A R) 组、心康组, 分别观察各组大鼠心功能指标、CPK 活性、心肌组织 MDA 及 GSH-PX, SOD 活性、心肌细胞超微结构。(3) 以 1 ~ 3 d 的 SD 大鼠的心室肌细胞为基质, 建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型, 分为对照组(复氧组)、A R(缺氧/复氧) 组、心康组, 观察 3 组的心肌细胞存活率、培养液中 LDH 活性、心肌细胞超微结构。结果: (1) 牛磺酸组、丹参组较衰竭组小鼠的游泳时间显著延长(P<0.05), 血清中 CPK 活力低于运衰组(P<0.05)。心康口服液中牛磺酸对小鼠的游泳能力影响较大, 且高浓度好;丹参的影响次之, 中浓度较好。(2) 对照组整个灌流期间 LVSP、dp/dt_max、HR均无明显变化, 心肌细胞超微结构正常。A/R 组在复灌 5、10、20、30 min 时LVSP、dp/dt max、HR 下降(P<0.01), 心肌酶活力降低,MDA 含量及 CPK 活性升高(P<0.01), 心肌细胞超微结构破坏, 成不可逆损伤, 心康组在复灌 5、10、20、30 min 时 LVSP、dp/dt_max、HR 与 A/R 组相比均升高(P<0.01);心肌酶活力均升高, MDA 含量及CPK 活性降低(P<0.01);细胞超微结构大有改善。(3)A R 组与对照组相比其细胞存活率降低(P<0.01), LDH 活力升高(P<0.01), 心康组与 A R 组相比细胞存活率升高(P<0.01);LDH 活力降低(P<0.01);对照组心肌细胞超微结构正常, A/R 组心肌细胞超微结构破坏, 成不可逆损伤, 心康组细胞超微结构大有改善。结论: 牛磺酸和丹参配物而成的心康口服液, 对心肌缺血/再灌注损伤具有显著的保护作用, 心康口服液作为心肌缺血/再灌注损伤治疗的辅助性用药将具有较好的临床应用前景。     

缬沙坦对自发性高血压大鼠心肌抑癌基因PTEN 表达的影响

目的: 观察缬沙坦对自发性高血压大鼠(SHR) 心肌肥厚的影响, 以及对肿瘤抑制基因PTEN表达的影响。方法: 取20 只12 周龄自发性高血压大鼠, 随机分为2 组, 每组10 只:缬沙坦干预组, 给予缬沙坦30 mg·kg^-1·d^-1 溶于饮水灌胃治疗;SHR阳性对照组给予正常饮水。另有10 只同龄同源雄性正常血压Wistar-kyoto 大鼠(WKY 组) 作为正常对照组。实验周期8 周, 测量血压、左室重量 体重(LVW/BW), 应用免疫组化方法检测各组大鼠左心室心肌PTEN 的表达。结果: SHR 阳性对照组血压、LVW/BW 均高于正常对照组, 但低于缬沙坦组, SHR阳性对照组PTEN 的表达明显低于正常对照组, 而缬沙坦组PTEN 的表达显著高于SHR 阳性对照组。结论: 缬沙坦能抑制自发性高血压大鼠心肌肥厚, 并能提高PTEN 的表达, 提示PTEN 可能在心肌肥厚发展过程中起了一定的作用。     

BN大鼠致敏动物模型研究

目的 研究BN大鼠作为评价食物蛋白质过敏性动物模型的可行性.方法 通过经口和腹腔注射2种途径给予BN大鼠致敏原和非致敏原.(1)30只雌性BN大鼠,随机分为卵清蛋白(OVA)组、马铃薯酸性磷酸酶(PAP)组和阴性对照组,每组10只.OVA组和PAP组分别每日1次经口灌胃给予1 mg/ml OVA、PAP 1 ml,对照组灌同剂量的生理盐水,共42 d.(2)40只雌性BN大鼠,随机分为OVA组、OVA+AI(OH)3(佐剂)组、PAP组和阴性对照组,每组10只.OVA组、OVA+Al(OH)3组和PAP组在试验第1、5、10天分别经腹腔注射剂量0.1 mg/ml的OVA溶液、含Al(OH)3的OVA溶液(OVA+Al(OH)3=1+1)、PAP溶液1 ml,观察42 d.对照组腹腔注射同剂量的生理盐水.于第14、28和42天取血分离血清,测定特异性抗体IgG和IgE.于第21和35天取血分离血浆,测定组胺.测定各组动物的血压变化及胃肠道渗透性.结果 致敏原OVA可激发BN大鼠的过敏反应,包括部分大鼠血压的暂时性下降、特异性抗体(尤其是特异性IgE)升高、组胺升高和部分大鼠的胃肠道通透性增加,而非致敏原PAP反应阴性.结论 BN大鼠致敏动物模型是比较理想的评价食物蛋白质过敏性的动物模型.     

麦绿素对大鼠的降血脂作用实验研究

为研究麦绿素对大鼠的降血脂作用,以0.33、1.00、3.00 g/kg BW d^-1剂量的麦绿素灌胃给予Wistar雄性大鼠30 d,于试验开始及结束时测试TG、TC及HDL-C,观察不同剂量的麦绿素对高脂饲料喂养大鼠血脂的影响.大鼠连续灌胃给予麦绿素30 d后,1.00、3.00 g/kg BW d^-1剂量组的血清TC及3.00 g/kg BW d^-1剂量组的血清TG显著低于对照组（P〈0.05）,各剂量组的血清HDL-C无明显变化（P〉0.05）.在本试验条件下,麦绿素对大鼠具有降血脂作用。     

青钱柳多糖对高脂血症小鼠的降血脂作用及机制初探

为初步探究青钱柳多糖(CPP)对高脂血症小鼠降血脂作用和机制,将高脂血症小鼠随机分为模型对照组、辛伐他汀组、空白对照组以及青钱柳低、中、高剂量组,每组16组。模型对照组与空白对照组均喂以等量的无菌水,辛伐他汀组喂以4 mg/kg的辛伐他汀与CMC-Na(0.5%)的混悬液,青钱柳低、中、高剂量组分别喂以100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg的CPP水溶液,连续喂养4周。实验结束后,测定血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、FFA水平和LPS活力,取肝脏做病理形态学观察,用RT-PCR方法测定HSL m RNA的表达量。结果表明,与模型对照组相比,CPP组小鼠血清TC、TG、LDL-C的水平和LPS的活力(P0.01)均显著降低,HDL-C和FFA的水平(P0.01)则显著增加;CPP组小鼠肝脂变程度较模型组有不同程度的改善;相比于模型对照组,CPP组的HSL m RNA的表达量均显著上升(P0.05)。综上,CPP可以明显降低高脂血症小鼠血脂水平,改善其因摄入过多脂质而导致肝脏脂肪变性。     

不同宿主来源的α-环糊精葡萄糖基转移酶分离纯化及化学修饰提高其热稳定性

研究了不同宿主来源的α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGT)经化学修饰后的热稳定变化,首先通过阴离子交换和疏水色谱分离纯化了来源于Paenibacillus macerans的天然α-CGT酶以及来源于Escherichia coli和Bacillus subtilis的重组α-CGT酶,再将α-CGT酶置于50℃水浴30min测残酶活,发现α-CGT酶残酶活分别为28%,30%和25%。首次采用戊二醛交联的方法研究了化学修饰对提高重组α-CGT酶稳定性的影响,E.coli重组表达的α-CGT酶经戊二醛交联成大分子聚合物后,与对照相比50℃水浴30 min后酶的热稳定性明显提高,水浴后仍有78%的酶活,酶活保有率相对未交联的酶提高了2.9倍。     

不同取血方法和动静脉血对Wistar大鼠生化指标的影响

目的观察断头取血与腹主动脉取血及腹主动脉血与腹主静脉血对Wistar大鼠生化指标的影响,为毒理学试验中的取血方法和取血部位的选择提供依据和参考。方法选择Wistar大鼠80只(雌/雄各40只),按体质量随机分为断头取血组和腹主动/静脉取血组,用全自动生化分析仪测定血清TP、ALB、A/G、ALT、AST、BUN、CRE、CHO、TG、GLU等指标。结果两种取血方法在两种性别大鼠中,上述测定指标均存在不同程度的差异:两种性别大鼠断头取血组A/G、CRE、TP、ALB、ALT、AST、CHO、TG都高于腹主动脉组,差异有统计学意义(P0.05);GLU为断头组偏低,雌性大鼠断头取血组BUN高于腹主动脉组,两项指标均差异有统计学意义(P0.05)。动静脉取血产生的影响主要体现在TG、GLU等生化指标中,两种性别大鼠腹主动脉组TG含量较低,而GLU含量只有雄性大鼠腹主动脉组高于腹主静脉组,两项指标均差异有统计学意义(P0.05)。结论不同的取血方法及动静脉血对Wistar大鼠的生化指标会产生明显的影响。     

桑椹籽油的降脂作用研究注

目的研究桑椹籽油的降脂作用;方法普通基础饲料加10%猪油、l%胆固醇,0.5%胆酸钠组成高脂饲料,高脂饲料中添加6%的桑椹籽油饲喂Wistar大鼠(桑籽油组)4周后与单饲高脂饲料的大鼠(高脂组)对比血脂和肝脂水平.结果与高脂组比较,桑籽油组大鼠血清和肝脏的胆固醇、甘油三酯含量均显著降低(P＜0.01),血清低密度脂蛋白胆固醇和致动脉硬化指数也明显下降(P＜0.01),而高密度脂蛋白胆固醇和抗动脉硬化指数显著升高(P＜0.01);结论桑椹籽油具有显著的降脂、抗动脉粥样硬化作用.