双酶水解法制备鹿胎盘活性多肽

采用双酶水解的方法制备鹿胎盘生物活性肽。以水解度和酸溶性肽得率为指标,确定了木瓜蛋白酶与胰蛋白酶为最优酶系组合。通过正交实验得出酶解工艺条件为:pH 7.0、温度52℃、酶活添加量6 000u/g(料)、底物浓度10%、酶比为1∶1,水解时间3 h,在此条件下对鹿胎盘进行水解,水解度为34.5%,酸溶性多肽得率为81.56%。     

胶原蛋白多肽-铬(Ⅲ)螯合物的降血糖机理探讨

观察胶原蛋白多肽-铬（Ⅲ）螯合物的降血糖作用,探讨它降血糖的可能机理.通过腹腔注射四氧嘧啶造小鼠糖尿病模型,观察血糖、肝糖原、葡萄糖激酶等指标.胶原蛋白多肽-铬（Ⅲ）螯合物可以显著地降低血糖,增加肝糖原的合成及葡萄糖激酶的活性.胶原蛋白多肽-铬（Ⅲ）螯合物可降低糖尿病小鼠血糖,促进肝糖原的合成和糖尿病小鼠体内的葡萄糖磷酸化.     

辣木籽粕多肽亚铁螯合物的制备及结构分析

为探究辣木籽粕多肽亚铁螯合物的制备工艺及其结构特性。本实验以辣木籽粕多肽和氯化亚铁为原料制备多肽亚铁螯合物,同时以亚铁螯合率为指标对辣木籽粕多肽-亚铁螯合物的制备条件进行优化,得到了最佳螯合反应条件：肽铁质量比为4.1:1,多肽浓度为7.9 mg/mL,pH=4.70,反应温度为40 ℃,反应时间为20 min,在此条件下亚铁离子螯合率为（88.27±1.49）%。紫外、红外、荧光光谱以及扫描电镜和能谱分析等方法对螯合物进行结构分析表明,亚铁离子能够与多肽氨基酸上C=O 、N-H、—COO-等官能团结合生成多肽亚铁螯合物,表面疏水性与氨基酸组成分析表明极性氨基酸能够在螯合反应中起到重要作用。     

蛋白酶对黄酒中苦味多肽pGlu-LFNPSTNPWHSP的降解作用

苦味多肽pGlu-LFNPSTNPWHSP(PGP)是黄酒中的关键苦味物质之一。本文利用6种蛋白酶降解PGP,以PGP降解率和对黄酒品质的影响为评价指标,考察不同蛋白酶在黄酒降苦方面的应用潜能。结果表明,在模拟黄酒溶液中,不同蛋白酶降解PGP的差异较大,其中风味蛋白酶、木谷蛋白酶和酸性蛋白酶的降解效果较好,PGP降解率分别为95.7%,79.8%和24.7%。将其应用于成品黄酒中,3种蛋白酶处理对黄酒的理化指标和挥发性风味物质无明显影响,以风味蛋白酶的降苦效果最佳,PGP降解率为25.2%,苦味强度由7.2降至5.8。利用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术（UPLC-QTOF-MS）分析不同蛋白酶酶解产物,结果显示风味蛋白酶作用PGP的多个位点,得到苦味强度较低的色氨酸（W）、焦谷氨酰亮氨酸（pGlu-L）等小分子氨基酸和多肽片段,达到降低黄酒苦味的效果。     

烟草幼苗应答低温胁迫的转录组和蛋白质组分析

【背景和目的】低温是烟草育苗过程中遇到的主要逆境之一,对培育适龄健壮的幼苗具有不利影响,为探究烟草应答低温胁迫的分子机理。【方法】将烟草幼苗进行低温胁迫处理不同时间,通过转录组、蛋白组联合分析低温胁迫下的应答事件。【结果】随着低温处理时间的增加,应答低温胁迫的基因数目不断增加。低温处理下,差异表达基因主要富集到与磷酸化、乙烯途径以及光合作用相关的信号通路,而差异表达蛋白也同时富集到与光合作用相关通路。此外,本研究鉴定到5种参与低温应答的多肽,其中低温处理12 h后的Nitab4.5＿0000037g0360多肽在转录组与蛋白组中同时被鉴定到,可能在低温应答过程中起重要作用。【结论】本研究挖掘了烟草幼苗应答低温的基因和蛋白,并为后续挖掘多肽在低温应答过程中的功能提供了理论基础。     

中国被毛孢分离鉴定及其PKS、NRPS功能基因的多样性

探究中国被毛孢(Ophiocordyceps sinensis)遗传、聚酮合成酶(Polyketide synthase,PKS)、非核糖体多肽合成酶(Non-ribosomal peptide synthase,NRPS)的多样性,为寻找合成生物活性物质的潜在菌株奠定基础。采用组织分离法从冬虫夏草中分离获得一株具有较强抑菌活性的真菌ZG4-23,采用多基因系统分析的方法对该菌株进行鉴定;利用兼并性引物对菌株ZG4-23的PKS基因和NRPS基因进行PCR扩增及序列测定分析,构建系统发育树,明确菌株ZG4-23的PKS基因序列和NRPS基因序列的系统进化地位。结果表明,多基因序列分析显示,菌株ZG4-23与多个中国被毛孢菌株同源性高达99%,因此确定该菌株为中国被毛孢(O. sinensis)。菌株基因组含有PKS I、NRPS 基因,经比对,PKS I片段与已知Ophiocordyceps sinensis PKS序列相似度为99%,NRPS片段与Trichophyton rubrum NRPS序列相似度为76%。中国被毛孢具有较强合成生物活性次生代谢产物的潜在能力,值得进一步开发研究和应用。     

银白色葡萄球菌实时荧光PCR快速检测方法的建立

本文旨在建立一种银白色葡萄球菌实时荧光PCR检测方法。根据对NCBI数据库中银白色葡萄球菌非核糖体多肽合成酶(NRPS)基因序列的比对分析,设计引物及探针,并基于所设计的引物及探针建立Taq-man 实时荧光PCR的检测方法。结果表明,本实验所建立的方法特异性较强,只能扩增出银白色葡萄球菌,而其他常见菌株的检测结果呈阴性;该方法的灵敏度为 10 pg/uL;在对实验室通过传统方法分离的金黄色葡萄球菌的检测中,发现有两个分离菌株呈阳性,其结果与普通PCR方法完全一致。     

双酶法制备梅花鹿鹿茸胶原多肽的工艺研究

目的:研究双酶水解鹿茸胶原蛋白制备鹿茸胶原多肽。方法:以梅花鹿鹿茸为原料,采用热水提取鹿茸胶原蛋白,先后加入2种酶酶解,测定酶解后鹿茸胶原多肽相对分子质量分布,根据单因素试验和正交试验确定两种酶的用量和酶解时间。结果:鹿茸胶原多肽的最佳工艺条件为:胃蛋白酶与鹿茸比(g:g)为1:100,酶解12 h,胰蛋白酶与鹿茸比(g:g)为1:100,酶解1 h,酶解得到的鹿茸胶原多肽相对分子质量小于3000约占60.65%,相对分子质量小于5000的约占88.16%,提取率为11.16%,蛋白质含量为89.07%。结论:采用双酶法提取制备鹿茸胶原多肽,相对分子质量小,易被人体消化吸收,该研究为鹿茸胶原多肽产品的开发和应用奠定了基础。     

绿茶抗氧化肽的分离纯化与抗氧化活性研究

通过饱和硫酸铵盐析的方法从干绿茶中提取得到绿茶粗蛋白,粗蛋白透析除盐后用葡聚糖凝胶Sephadex G-75层析柱进行凝胶色谱法分离纯化,收集具有抗氧化活性的蛋白样品,并冷冻干燥,同时利用SDS-PAGE的方法对凝胶分离后收集的活性样品进行纯度的鉴定及相对分子质量的测定,并采用·OH清除法及O-2·清除法研究绿茶抗氧化多肽纯品的抗氧化活性。结果表明,绿茶抗氧化多肽经葡聚糖凝胶sephadex G-75层析柱后,得到很好的分离和纯化,在SDS-PAGE电泳图谱上只有1条条带,其相对分子质量为2~15ku;绿茶抗氧化多肽对·OH具有很强的清除作用,其半清除浓度(IC50)为0.069μg/mL;对O-2·也具有较强的清除作用,其半清除浓度(IC50)为18.462μg/mL,与VC的清除作用(IC50为11.186μg/mL)相当。     

加压素细菌内毒素分析方法学

目的：建立加压素细菌内毒素检测方法。方法：采用灵敏度为0.25EU/ml的鲎试剂,以凝胶法定性测定xxx的细菌内毒素水平,通过干扰初筛试验和干扰试验对其检测方法进行验证;结论：凝胶法适用于xxx的内毒素定性检测。