青养蛋白抗氧化肽的制备及其胃肠道消化性的研究

采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰酶、风味酶四种酶水解青养蛋白,探讨了各种酶对青养蛋白的酶解特性、清除DPPH·能力和ORAC值的差异。结果表明,木瓜蛋白酶和风味酶复配酶解青养蛋白可以得到较好的抗氧化活性肽,且水解度、蛋白回收率均较好;酶解产物的氨基酸组成中EAA/TAA为45.06%,EAA/NEAA为82.01%均高于FAO/WHO的推荐值,表明青养蛋白酶解物是较优的营养补充剂,且富含抗氧化性氨基酸;分子量分布表明,大于10ku的组分含量为3%,5~10ku肽段的含量为9%,低于3ku的组分含量达到73%。构建模拟了胃肠道消化,青养多肽的抗氧化活性在0~0.5h之间都有一个显著增加的过程(p<0.05),在2.5~4.0h消化的过程中得到的肽的抗氧化活性均较低,且不同时间段之间的活性差异不显著。      

两种来源于牛皮胶原蛋白的新型ACE抑制肽

从牛皮胶原蛋白中鉴定分离出抑制血管紧张素Ⅰ转换酶（ACE）的多肽片段。首先优化牛皮胶原蛋白水解方法,应用胃蛋白酶和碱性蛋白酶获得活性最高的水解产物（抑制ACE的IC50为0.168 mg/m L）。经MW 5000超滤分离后,得到水解液中活性最高的部分（IC50为0.079 mg/m L）。对分离后低于MW 5000的部分经RP-HPLC进一步分离,发现含有大量ACE抑制肽,并应用RP-HPLC-MS/MS鉴定出两种新型ACE抑制肽,氨基酸序列分别为ISVPGPM和LGPVGNPGPA,IC50值分别为0.017 mg/m L（24.3μmol/L）和0.077 mg/m L（87.8μmol/L）。最后,本文模拟了两种抑制肽在体内生理环境下的消化,发现均可被部分降解,且消化产物具有与原始多肽相近的ACE抑制活性。      

酶解水牛奶制备抗凝血肽的工艺研究

目的:本文以新鲜水牛奶为原料,研究木瓜蛋白酶、中性蛋白酶及碱性蛋白酶复合酶解、混合酶解水牛奶的作用,比较不同水解方式的作用效果;并采用凝血酶滴定改进法测定水解液抗凝血活性。方法:分别进行三种蛋白酶单因素水解实验,确定各种酶的最适水解条件;在此基础上进行复合酶解与混合酶解实验,测定水解度和抗凝血活性。结果:木瓜蛋白酶的最适水解条件为:水解温度60℃、水解时间2.0 h、p H5.0、料水比1∶2（v/v）、酶用量6000 U/（m L底物）;中性蛋白酶的最适条件为:水解温度40℃、水解时间3.0 h、料水比1∶2（v/v）、p H6.0、酶用量6000 U/（m L底物）;碱性蛋白酶的最适条件为:水解温度50℃、水解时间4.0 h、料水比1∶2（v/v）、p H8.0、酶用量6000 U/（m L底物）。复合酶解法制备的水解液其抗凝血活性均高于混合酶解,最高抗凝血活性为52.0 ATU/m L。结论:本实验条件下,加酶组合为\     

脱盐咸鸭蛋清肽-亚铁螯合物的制备及表征

本文以脱盐咸鸭蛋清肽为原料,Fe Cl₂·4H₂O为铁源,以亚铁的螯合率和螯合物的得率为跟踪指标,对鸭蛋清肽-亚铁螯合物的制备条件进行优化;并采用红外光谱、动态光散射仪、荧光光谱、圆二色谱手段,对肽-亚铁螯合物进行了结构表征。单因素及正交实验结果表明,鸭蛋清肽-亚铁螯合物的最佳螯合反应条件:抗坏血酸（VC）与亚铁盐的质量比为0.2∶1,鸭蛋清肽溶液的浓度为4%,肽与亚铁盐的质量比为3∶1,p H 5.5,反应温度为40℃,反应时间为40 min,乙醇的添加量为反应液体积的7倍,在此条件下亚铁的螯合率为65.15%,螯合物得率为44.46%。红外光谱显示Fe²⁺与肽的氨基端与羧基端相结合;荧光光谱表明随着Fe²⁺的增加,荧光吸收带从3822 nm显著下降为3124.44 nm（p<0.05）;激光粒度仪显示肽与肽-亚铁螯合物的半径分别为（144.23±5.86）nm和（453.66±8.74）nm;圆二色谱显示肽中α螺旋、β折叠的含量为28.66%±1.54%、10.02%±1.04%,而肽-亚铁螯合物中α螺旋、β折叠的含量为16.10%±1.96%、27.33%±1.08%,两者均发生显著变化（p<0.05）。从结构层面证实了肽-亚铁螯合物的形成。      

鱿鱼肌肉蛋白肽的制备工艺优化及其抗氧化活性

以鱿鱼肌肉为原料,先考察了酶解时间、温度和加酶量对鱿鱼蛋白肽清除羟自由基的影响,再采用BoxBehnken实验设计和响应面分析对鱿鱼肌肉酶解工艺条件进行优化。同时采用清除自由基和小鼠体内抗氧化活性对抗氧化肽的抗氧化活性进行了研究。结果表明:酶解时间、加酶量对羟自由基清除率影响最为显著（p<0.01）,最佳工艺条件为:酶解时间6 h,加酶量0.07 g/10 g,酶解温度55℃。在该条件下,羟自由基清除率的验证值为90.31%±0.54%。鱿鱼抗氧化肽对DPPH·、OH·和O-2·的EC50分别为8.8、16.5和10.3 mg/m L。鱿鱼抗氧化肽高低剂量组的小鼠体内SOD活性分别比空白组高19.2%和14.2%。抗氧化肽高低剂量组小鼠体内的GSH比空白组提高了23.4%和14%。鱿鱼抗氧化肽具有较强的抗氧化活性。      

响应面法优化酶解鸢乌贼制备抗氧化肽的工艺研究

利用响应面分析法对酶法水解鸢乌贼蛋白制备抗氧化肽的工艺条件进行优化。首先通过单因素实验最终确定木瓜蛋白酶为水解鸢乌贼蛋白制备抗氧化肽的最佳用酶,然后在单因素的基础上以加酶量、液料比、酶解时间为自变量,DPPH自由基清除率为响应值,建立二次回归设计模型,经修正后得到最佳酶解条件为:加酶量为0.66%(w/w),液料比为10.2(v/w),酶解时间为380 min,在此条件下DPPH自由基清除率为89.80%,与模型预测值相吻合。另外,氨基酸分析表明与鸢乌贼蛋白相比,优化后的酶解产物中必需氨基酸含量提高至原蛋白的2.2倍,蛋氨酸、色氨酸等抗氧化性氨基酸分别提高至7.2、25.6倍。      

瑞士乳杆菌的益生功能及应用研究进展

瑞士乳杆菌具有强大的蛋白水解能力和诸多的益生活性,是当前益生菌研究的热点。本文对瑞士乳杆菌发酵牛乳产生的水解肽的益生活性及相关的蛋白水解系统,瑞士乳杆菌产生的胞外多糖益生活性和瑞士乳杆菌自身的益生活性进行了综述,并总结了瑞士乳杆菌在奶酪发酵中研究进展和新型应用的探索研究。诸多的研究表明,瑞士乳杆菌是一种具有广阔应用前景的益生菌。      

海蜇生殖腺酶解肽的抗氧化活性和ACE抑制活性研究

为实现海蜇加工副产物生殖腺的高值化利用,以海蜇性腺脱脂粉为原料,选用中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和碱性蛋白酶分别对海蜇生殖腺进行水解,以酶解产物（JGHP）的水解度、DPPH清除活性和ACE抑制活性为指标,选择制备海蜇生殖腺活性肽的工具酶。经超滤膜将酶解产物分成JGPH-P1（大于3000 u）、P2（1000³000 u）、P3（小于1000 u）三个部分,分别测定三部分的DPPH清除活性和ACE抑制活性。结果表明,中性蛋白酶水解所得产物的水解度、DPPH清除率和ACE抑制活性均优于其他三种蛋白酶;JGHP超滤后,其中组分JGHP-P3的活性较高。利用电子自旋共振（ESR）技术检测JGHP-P3对DPPH·、·OH、O-2·的清除活性。其ACE抑制活性IC50为1.06 mg/m L,DPPH·、·OH、O-2·的清除活性IC50分别为0.38、0.63、0.59 mg/m L。由此可见,经中性蛋白酶水解得到的JGPH中小于1000 u的组分具有较高的抗氧化和ACE抑制活性。      

利用鲨鱼软骨制备钙螯合胶原肽及其性质的研究

以鲨鱼软骨为原料,通过单因素实验和正交实验优化胶原肽螯合钙的酶解制备工艺。结果发现,当酶解时间、酶添加量、底物浓度分别为1 h,0.25%,25 mg/m L时,制备的鲨鱼软骨胶原肽的钙螯合能力可达1087.01 mg/100 g蛋白。制备的钙螯合胶原肽小于5000 u的组分约占84%,天冬氨酸和谷氨酸占总氨基酸的比例为17.07%,疏水性氨基酸占总氨基酸的比例为41.24%,而必需氨基酸占总氨基酸的比例只有22.81%。根据红外光谱和扫描电镜结果,发现鲨鱼软骨胶原肽螯合钙的微观结构均匀致密,不仅具有胶原蛋白的特征,还含有硫酸软骨素的特征。      

谷朊粉鲜味肽的呈味规律研究

采用了超滤离心、阴离子交换色谱分离和端解酶水解的方法研究了谷朊粉肽的呈鲜规律。实验发现,分子量Mw<1000 u的肽鲜味较强,进一步采用阴离子交换树脂分离和端解酶水解Mw<1000 u的肽,发现肽的鲜味与谷氨酸含量并不成正相关关系,碱性氨基酸和酸性氨基酸的共同作用使肽呈现鲜味,以Glu为N端会使肽的鲜味增强。