真核重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN的构建及其在HEK 293-6E细胞中的表达

目的构建真核重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN,并在HEK 293-6E细胞中进行表达。方法合成融合基因CTP-PTEN,定向克隆至真核表达载体pTT5中,构建重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒,进行双酶切及测序鉴定。在Lipofectamine 2000的介导下,将鉴定正确的重组表达质粒转染至HEK 293-6E细胞,Western blot法检测细胞中融合蛋白CTP-PTEN的表达。结果经双酶切及测序鉴定,证明重组表达质粒pTT5-CTPPTEN构建正确。转染48 h后,HEK 293-6E细胞中可见相对分子质量约49 700的CTP-PTEN融合蛋白条带。结论成功构建了重组质粒pTT5-CTP-PTEN,并于HEK 293-6E细胞中表达了CTP-PTEN融合蛋白。     

库斯塔克素（Kurstakins）—一类自Bt中分离出的具杀菌活性的新型脂肽

生物农药因其副作用小,对环境兼容性好而日益成为全球农药发展的一种趋势和方向。1992年“世界环境和发展大会”的第21条决议提出“到2000年要在全球范围内控制化学农药的销售和使用,生物农药的产量达到60％”。90年代以来,全世界化学农药的销售量下降,代之而起的是生物农药中的微生物农药。在微生物杀虫剂中,以苏云金芽孢村菌（简称Bt）制剂为代表。以伴孢晶体为主要成份的Bt制剂,具有高效、低毒、杀虫谱专一等优点,是目前世界上应用最广泛,商业开发最成功的生物农药,取得了显著的经济效益、社会效益和生态效益。在微生物杀菌剂中,井冈霉素是成功的代表。能够用于制备微生物杀菌剂的微生物类群,主要是链霉菌和放线菌,近几年也有芽孢村菌的报道。我国已有对黄瓜霜霉病具有较好防效的芽苞杆菌菌株和可防治多种水稻病害的芽孢杆菌的分泌物。和Bt能产生伴孢晶体相似,近来有文献报道,许多芽胞杆菌可以产生脂肽,并且这些肽还可作为每种芽孢杆菌的生化特征。目前,芽胞杆菌的脂肽在生物医学、农业中已有应用。     

水解蛋白的苦味及消除方法

经酶法制备的水解蛋白往往带有苦味,其主要原因是蛋白质本身的一些疏水基团的作用:水解过程中影响苦味程度的主要因素是疏水基团的位置、水解度、pH用酸、原料的品质等.本文介绍了通过流水性吸附、掩蔽、专一性酶的应用以及选择性沉淀的方法消除或减轻水解蛋白的苦味.     

AIMP1衍生肽的护肤功效研究

皮肤糖化反应是导致肤色暗黄、色斑、老化的一个重要因素,针对皮肤糖化问题,开发了一种生物活性多肽并进行护肤功效验证。AIMP1衍生肽（AdP）是由氨基酰tRNA合成酶相互作用多功能蛋白质1(AIMP1)衍生而来的寡肽,具有类AIMP1的多种生物活性。采用牛血清白蛋白（BSA）糖化和羰基化体系研究AdP的抗糖化效果,并对含AdP的样品进行了临床功效测试。结果表明：AdP可减缓BSA与葡萄糖的糖基化反应,减少蛋白质羰基的生成,具有浓度依赖性;皮肤角质层含水量显著提高27.32%,TEWL降低12.77%,R2值提高10.34%,ITA°值提高14.25%,皱纹面积减少12.14%,AdP可有效抑制蛋白糖化,具有提升屏障功能、祛黄提亮抗皱的功效。     

乙酰基四肽-11防脱发作用的研究

将乙酰基四肽-11应用于小鼠进行脱发研究。通过对C57BL/6雌性小鼠背部进行脱毛处理,实验组连续涂抹3个质量浓度梯度（10,20和30μg/mL）的乙酰基四肽-11水溶液18天,对照组涂抹生理盐水,观察小鼠背部毛发生长情况,HE染色进行组织学分析,并初步进行了志愿者试用评估。结果表明,一定质量浓度的乙酰基四肽-11可以预防小鼠脱发,避免毛囊微型化,同时可以维持小鼠表皮紧致。志愿者试用评估表明测试样品对所有志愿者都有防脱发效果,85%志愿者反馈头发密度变大。     

新抗生素B-3543的研究

对新抗生素B-3543进行了系统的研究,关键指标已达到工业化生产水平。确立了产生菌的分类地位,测定了抗生素的抗菌谱,获得效价达10000μg/ml的高产菌株,阐明了B-3543的化学结构,提出3种效价检定方法,制定了产品质量标准,完善了生产工艺,使产品总收率达60％。该项目还存在产品成本过高,产品稳定性不好等问题,有待研究解决。     

抗衰老生物活性物ARGIRELINE

肉毒杆菌神经毒素(BoNTs)是一种非常有效的抗皱去皱生物活性物，它通常通过对人体的局部注射来实现其抗衰老性能，它的发明代表着化妆品的一次技术性革命，但由于它的剧毒性限制了其应用。所以有必要开发一种无毒、又有BoNTs功能的生物活性物，Lipotee、S.A公司开发的ARGIRELINE正符合了这种需求。ARGIRELINE是一种乙酰己肽物，通过志愿者人体实验，使用10％ARGIRELINE O／W乳液30天后，眼部皱纹减浅了30％，它的作用机理类似于BoNTs，即通过抑制钙依赖性接受体SNARE的形成，阻止神经递质素起作用，虽然ARGIRELINE不及BoNTs强，但实验证明，ARGIRELINE是一种无毒、无任何刺激性，甚至大剂量用量，且有很好的抗衰老效果，可以说，ARGIRELINE是BoNTs一种生物安全性的替代品。     

肽在化妆品中的应用

抗衰老化妆品已成为新世纪化妆品发展的重要主题。20世纪90年代,使用脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)、天然蛋白质的抗衰老化妆品风靡一时。研究表明,这些高分子量的活性成分很难透过表     

国内外氨基酸市场分析(二)

(接上期 )2 2　氨基酸饮料在国外 ,不少果汁等软饮料 ,使用L 天门冬氨酸钠或DL 丙氨酸调节酸度和赋予美味 ;而甘氨酸常被用做清凉饮料和合成酒的矫味剂。氨基酸饮料作为一种新型大众化饮料近来在日本市场异军突起 ,日渐兴盛。2 0 0 3年 3月 31日 ,Ajinomoto公司东京本部与西亚     

致炎血管内皮细胞特异性靶向肽Nts-1的融合表达及其靶向性验证

目的构建致炎血管内皮细胞特异性靶向肽Nts-1的表达载体,表达、纯化融合蛋白,并对其靶向性进行初步验证。方法根据大肠埃希菌密码子偏好性,对Nts-1天然基因序列进行同义突变,并在Nts-1序列两端分别插入一个半胱氨酸使其环化后,克隆至p ET14b-EGFP载体中EGFP序列的C-末端,构建重组原核表达质粒p ET14b-EGFPNts-1,转化大肠埃希菌,IPTG诱导表达,表达的融合蛋白his-EGFP-Nts-1经纯化和SDS-PAGE鉴定后,用LPS致炎人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)体外验证其在细胞表面的亲和力。结果成功构建了p ET-14b-EGFP-Nts-1表达载体,纯化后的融合蛋白相对分子质量约32 000,纯度达95%以上。融合蛋白hisEGFP-Nts-1可特异性地靶向于致炎血管内皮细胞表面,其亲和力是由短肽Nts-1介导的。结论成功表达了融合蛋白his-EGFP-Nts-1,并初步验证了其对致炎血管内皮细胞的亲和力,为其生物化学活性及功能的研究奠定了基础。