噬菌体展示技术与肽疫苗的设计

近年来,噬菌体肽库的构建及筛选技术得到迅速发展和推广,现已广泛应用于基因定位、分子识别、疫苗设计等相关领域,尤其在非常规疫苗设计方面具有巨大的潜力。该疫苗设计策略是在分子免疫学抗原呈递的机制研究基础上提出的,具有安全、分子小、周期短、特异性高、易于大规模制备等特点,可以代替传统疫苗。本文就噬菌体展示技术用于肽疫苗设计的原理及前景作一综述。     

GST-AEP融合蛋白的表达、纯化和鉴定

目的利用GST融合基因表达系统表达GST-AEP融合蛋白,并进行纯化及鉴定。方法IPTG诱导重组质粒pGEX-4T-1/AEP在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,溶菌酶裂解后,采用GST蛋白纯化系统进行纯化,所得产物进行12%SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果大肠杆菌经诱导,高效表达出相对分子质量约34000的蛋白,与GST-AEP融合蛋白相符。Western blot结果显示该蛋白能够被兔抗GST多克隆抗体识别。结论已成功表达并纯化了融合蛋白,为更深入研究AEP的结构和功能奠定了基础。     

蛋黄非磷肽相对分子质量分布及其营养价值评价

采用蛋白酶水解鲜鸡蛋蛋黄,分离得到卵黄非磷肽,测定了卵黄非磷肽的分子组成,并采用氨基酸比值系数法,分别以鸡蛋蛋白质为标准蛋白,以WHO/FAO氨基酸参考模式为评价标准,对蛋黄非磷肽营养价值进行评价.结果表明:卵黄非磷肽的相对分子质量分布在158～1493之间,其中氨基酸种类齐全,必需氨基酸占总氨基酸量的39%,第一限制性氨基酸为蛋氨酸(Met)+半胱氨酸(Cys),其营养价值高于酪蛋白磷酸肽.     

酶法制取鱼皮胶原蛋白短肽

采用高效、环保的水解方法提取了鳕鱼皮中的胶原蛋白,并应用木瓜蛋白酶制取鱼皮胶原蛋白短肽,根据胶原蛋白的提取率确定了提取的最适反应条件,通过纸层析和SDS-PAGE电泳技术分析了鱼皮胶原蛋白的水解情况。结果表明,酶与原料比为1∶300、酶反应时间10 h、反应温度55℃、pH值为6.8,胶原蛋白的提取率最高;鱼皮胶原蛋白的水解产物主要以6~29 ku的小分子质量的短肽形式存在。以废弃鳕鱼皮作实验材料,可减少环境污染,节约资源,提高水产品废弃物的附加值。     

中性酶从米糠中制取抗氧化性活性肽的研究

以中性蛋白酶(Neutrase)为工具酶,在水相体系里水解米糠蛋白,制备具有抗氧化能力的活性肽溶液,以其对OH.自由基、O2-.自由基的清除率为指标,探讨了温度、时间、加酶量(基于米糠质量)、pH值、底物浓度对活性肽溶液制备的影响,得出较优条件为:温度45℃、时间4.5 h、加酶量0.8%、pH6.5~7.0,底物浓度1∶15.抗氧化实验表明,在此条件下制得的米糠活性肽溶液对超氧阴离子自由基和羟自由基具有良好的清除能力.     

碱性蛋白酶对鸡蛋清的酶解效果研究

试验以新鲜鸡蛋蛋清为原料,以水解度(DH)作为试验衡量指标,利用pH-stat法对底物浓度、pH值、酶解温度、加酶量、酶解时间等试验条件进行考察,并采用正交试验综合分析得到碱性蛋白酶酶解鸡蛋清制备蛋清肽的最佳工艺条件为:底物浓度4%;酶解pH值9.5;酶解温度55℃;加酶量6%;酶解反应时间4 h,水解度可达23.74%。     

溶剂法制备降血糖肽固体分散体及稳定性研究

以降血糖肽为模型，Eudragit L-100和HPMC为载体，溶剂法制备了降血糖肽固体分散体，并对其稳定性和体外释放开展了研究。本文以降血糖肽固体分散体2 h的累计释放率和DPP-IV抑制率为评价指标，通过对肠溶载体和释放调节剂的比例进行优化，利用扫描电镜、傅里叶红外光谱仪和透射电镜对固体分散体进行表征，并考察了固体分散体不同储存时间和储存温度下的稳定性。结果表明，降血糖肽固体分散体的最佳比例为降血糖肽:Eudragit L-100:HPMC=1:2:0.2，此比例下制备的固体分散体2 h的累计释放率能达到93.54%，且DPP-IV抑制率仍具有较高水平。扫描电镜和透射电镜图像表明，活性肽分散在固体分散体中，红外光谱表明，活性肽二级结构的构象发生了变化。制成固体分散体后，降血糖肽的稳定性显著增强，常温储存10 d后累计释放率仍高达90.32%，在高温环境下也表现出较强的稳定性。综上所述，利用固体分散技术能在保持降血糖肽生理活性的基础上显著提高稳定性和累计溶出率，该方法对活性肽的综合利用，特别是基于活性肽的功能性食品的研发有较大的参考价值。     

新生牛肝活性肽对小鼠血清中ALT和AST酶活力的影响

目的观察新生牛肝活性肽对四氯化碳引起的小鼠化学性肝损伤的保护作用。方法采用四氯化碳致小鼠化学性肝损伤模型,设新生牛肝活性肽低、中、高剂量组、模型对照组和正常对照组,分别灌胃给药,观察各组小鼠肝损伤情况。结果新生牛肝活性肽高剂量组可有效降低模型小鼠血清中ALT,但AST降低不明显。结论新生牛肝活性肽对化学性肝损伤具有辅助保护作用。     

高效液相色谱和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法分析天花粉蛋白胰酶肽图谱

目的建立了检测天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)肽图谱方法.方法采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)法对天花粉蛋白的肽图谱进行了测定,比较了不同批次产品一级结构的一致性,并用MALDI-TOF-MS法进行了验证.结果用RP-HPLC和MALDI-TOF-MS法检测天花粉蛋白胰酶裂解后的肽段,发现各批产品的一级结构具有一致性,此分析方法具有简单,灵敏度高,可靠等优点.结论本法适应于天花粉蛋白药物的肽谱分析,同时也为分析PEG修饰天花粉蛋白药物肽图谱提供了可以借鉴定手段.     

Alliance~(TM)HPLC系统在生物化学分析中的应用

生物化学分析研究工作的深入开展,对HPLC(高效液相色谱)仪器的系统性能,如灵敏度、准确度、可靠性,特别是重现性提出更加苛刻的要求。Waters公司研制的新一代HPLC系统——Alliance HPLC系统将 HPLC分析的重现性提高到了前所未有的新水平,为生物化学分析工作者完成复杂的生物分析任务提供了一件利器。