黑曲霉xynC基因编码一种低温酸性木聚糖酶

木聚糖酶(xylanase,EC 3.2.1.8)可以随机切割木聚糖主链的β-1,4-糖苷键,在饲料、食品、造纸和纺织等领域具有广泛的应用。该研究通过分子克隆技术将黑曲霉CICIM F0510来源的木聚糖酶基因xyn C在毕赤酵母中进行了克隆表达,构建获得了重组菌GS115(p PIC-XynC)。在摇瓶水平上,重组菌的酶活为1.14 U/m L。酶学性质的研究表明,重组酶XynC的最适反应温度和pH分别为30℃和2.5,且它在25~40℃或pH 2.0~5.0有较好的稳定性;K+对XynC的活性有微弱的促进作用,而Ca~(2+)、Co~(2+)、Mn~(2+)、Zn~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)、Sn~(2+)、EDTA和SDS等对XynC的活性有不同程度的抑制作用。此外,该酶还可以水解戊聚糖产生聚合度为3~6的低聚木糖。这些良好的理化性质为重组酶XynC在饲料及食品等领域的应用奠定了基础。     

黑曲霉DB056柚苷酶制剂对琯溪蜜柚果汁的脱苦效果

采用高效液相色谱法测定琯溪蜜柚果汁中柚皮苷及其降解产物的变化,研究黑曲霉DB056柚苷酶制剂脱苦琯溪蜜柚果汁的优化条件;并且在此优化条件下,使用该柚苷酶制剂对琯溪蜜柚鲜柚汁、浑浊浓缩柚汁和澄清浓缩柚汁进行脱苦。结果表明：黑曲霉DB056柚苷酶制剂催化琯溪蜜柚果汁中柚皮苷水解成普鲁宁和柚皮素;该柚苷酶制剂在40～55℃、果汁自然pH值条件下对琯溪蜜柚鲜柚汁进行脱苦,酶用量90U/mL、处理时间80min,柚皮苷脱除率达到89%;处理不同浓缩程度的浑浊浓缩柚汁,脱苦率约为80%左右。结果说明黑曲霉DB056柚苷酶制剂对琯溪蜜柚果汁具有良好的脱苦作用。     

黑曲霉产纤维素酶混合发酵条件的研究

为选出高产纤维素酶菌株,对不同菌株进行筛选,通过4种纤维素酶活力大小比较单一菌株与混合菌株的产酶能力。利用3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测定各单一菌株及混合菌株的内切葡聚糖酶活、滤纸酶活、外切葡聚糖酶活和β-葡萄糖苷酶活,筛选最优组合,在单因素试验的基础上通过响应面试验确定最佳产酶条件。结果表明,混合菌最佳产酶条件：混合菌株D2∶D2-1=2∶1,发酵时间6 d,接种量6%,发酵温度28 ℃。优化后滤纸酶活力达到156.26 U/mL,较优化前的滤纸酶活（113.96 U/mL）提高了37.1%。     

复合诱变选育耐高温高产葡萄糖酸盐的黑曲霉菌株

以黑曲霉（Aspergillus niger）Y8为研究对象,经过紫外-高温复合诱变处理后,利用初筛及复筛,得到一株耐高温高产葡萄糖酸盐的黑曲霉菌株UT-1。菌株UT-1在45 ℃,220 r/min条件下进行摇瓶发酵,其平均产葡萄糖酸盐的量为（23.23±0.02） g/100 mL,较出发菌株提高了32.44%,经4次传代培养后,菌株UT-1遗传稳定性能良好。5 L发酵罐试验结果表明,菌株UT-1与出发菌株相比适应期缩短了2 h,发酵周期缩短了4 h,葡萄糖酸盐产量提高了17.14%,为葡萄糖酸盐工业化生产提供理论基础和技术支持。     

黑曲霉孢子粉粗提物对两种植物病菌的抑制作用

黑曲霉是集安全和具有许多活性强大酶系等诸多优点于一身的优良工业发酵用菌种。研究分离得到一株黑曲霉（Aspergillus niger）xj,为充分开发利用这一真菌资源,利用50 g含有1×109 CFU/g、5×109 CFU/g、15×109 CFU/g黑曲霉孢子的干燥孢子体粉末提取出三种不同的浸膏,并在筛选最佳接种量和最佳培养时长的基础上对这3种浸膏进行抑菌试验,发现这3种浸膏对青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）及根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）这两种常见植物病菌均体现了良好的抑制效果,且抑制率均＞92.02%。     

黑曲霉产胺氧化酶培养及诱导条件的优化

黑曲霉可经诱导产生胺氧化酶,该酶具有催化生物胺氧化脱氨生成相应醛、氨气和过氧化氢的特性。黑曲霉胺氧化酶产生分菌体生长和诱导产酶两个阶段。通过单因素试验优化得出黑曲霉产胺氧化酶的菌体生长最佳培养条件：氮源为NaNO3,碳源为麦芽糖,接种量1%,培养时间24 h;诱导产酶的最佳培养条件：诱导氮源为质量浓度60 g/L的正己胺,诱导碳源为葡萄糖,培养时间36 h,培养温度30 ℃,摇床转速160 r/min,初始pH 7.0,胺氧化酶酶活力从诱导前的1 006.5 U/g提升至1 422.4U/g,提高幅度为41.3%。     

ARTP诱变及高效筛选高产葡萄糖氧化酶菌株

以黑曲霉为出发菌株,采用常压室温等离子体(ARTP)注入技术对前培养后的出发菌株进行诱变,并结合改进后的邻联茴香胺高效平板显色圈进行初筛及摇瓶复筛。获得一株产葡萄糖氧化酶高产菌株,其产量由出发菌的45.6 U/m L提高到85.3 U/m L。通过对发酵关键条件碳酸钙和吐温-80添加量进行优化,结果显示酶活提高到125.6 U/m L,较原始菌株提高了175.4%。经6代传代培养,产葡萄糖氧化酶性能稳定。     

黑曲霉胞内β-葡萄糖苷酶分离提纯及其性质的研究

采用丙酮沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换层析、Sephactyl S-200凝胶过滤、Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析等步骤,从黑曲霉菌丝体中获得了一种凝胶电泳均一的胞内β-葡萄糖苷酶,其单亚基相对分子质量为122.7K,纯化倍数和得率分别为7.2和19.3%.以纤维二糖为底物时,该酶葡萄糖的抑制常数Ki为0.19 mmol/L,Km值和Vmax分别为2.99 mmol/L、1.49 μmol/min.该酶最适反应温度60℃,最适反应pH为5.0;在60℃以下及pH3～6范围内均能保持稳定.甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮和乙酸乙酯等有机溶剂对胞内β-葡萄糖苷酶有很好的激活作用.     

黑曲霉苹果酸酶基因的敲除及其功能研究

通过敲除黑曲霉(Aspergillus niger)菌株ATCC1015的苹果酸酶(Malic enzyme,ME)基因,研究了ME基因敲除对黑曲霉TCA循环相关代谢的影响。利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的转化方法转化黑曲霉,通过同源重组敲除黑曲霉ME基因,筛选ME基因敲除菌株,获得了遗传性能稳定的ME基因敲除菌株。通过发酵实验,对比了野生菌株和ME基因敲除菌株在代谢产物累积方面的差异,发现ME基因敲除菌株的TCA循环中各种有机酸的产量与野生菌株相比没有明显变化。表明,ME基因的敲除对TCA循环没有产生明显影响。     

复合杂粕多菌种发酵工艺研究

以枯草芽孢杆菌、黑曲霉和酿酒酵母为出发菌株,通过对固态发酵工艺条件的优化,获得复合菌种固态发酵生产蛋白质饲料的最佳工艺参数。结果表明:以棉籽粕45%、菜籽粕15%、玉米酒精糟15%、麸皮21%和硫酸铵2%为发酵基质,枯草芽孢杆菌∶酿酒酵母∶黑曲霉为2∶1∶1、接种量12%、发酵基质初始含水率45%、发酵温度34℃和发酵时间60h为发酵条件,发酵后粗蛋白质达42.5%,比发酵前提高15.5%;游离棉酚从1 240mg/kg降至360mg/kg,脱毒率达71%;粗纤维含量下降。