葡萄糖氧化酶基因在黑曲霉中的分泌表达

通过PCR扩增从一株葡萄糖氧化酶生产菌黑曲霉中克隆得到1818bp葡萄糖氧化酶基因GOD,将GOD基因与糖化酶基因的5’同源臂、3’同源臂进行重叠延伸,构建葡萄糖氧化酶基因的表达框。将此表达框插入载体pSZH中,构建黑曲霉同源重组表达载体pSZH-GOD。将载体pSZH-GOD通过冻融法转化农杆菌AGL1,进而通过农杆菌介导法转化高产糖化酶的黑曲霉。经潮霉素筛选和PCR鉴定获得8株重组菌株。对8株重组菌株的发酵液上清液进行酶活测定,结果表明葡萄糖氧化酶基因在高产糖化酶的黑曲霉中得到了分泌表达,静置培养6d后其分泌表达的葡萄糖氧化酶酶活最高可达1.166U/mL,而在出发菌株中检测不到葡萄糖氧化酶的分泌表达。同时,重组菌株胞内表达的葡萄糖氧化酶最高酶活可达11.45U/mL,是出发菌株的266倍。此研究结果为简化葡萄糖氧化酶发酵生产工艺、提高酶产量提供了新的途径。     

黑曲霉菌丝体活力对α-L-鼠李糖苷酶发酵的影响

α-L-鼠李糖苷酶是工业上一种重要的水解酶。为了方便地优化和监控α-L-鼠李糖苷酶的发酵生产过程,在5 L发酵罐水平研究黑曲霉菌丝体活力与α-L-鼠李糖苷酶产量之间的关系,菌丝体活力采用TTC-脱氢酶法进行测定。实验结果表明,在发酵过程中维持适宜的菌丝体活力对α-L-鼠李糖苷酶的产量非常重要:当摇瓶种子菌丝体活力达到最大值0.388 U/mL时,对应的5 L发酵罐中α-L-鼠李糖苷酶的产量最大;控制发酵过程的pH恒定于5.5,可以有效延缓菌丝体活力下降速度,使α-L-鼠李糖苷酶的产量提高28.7%;当搅拌转速低于400r/min或通气量低于0.3 vvm时,发酵24～36 h的菌丝体活力大幅下降,α-L-鼠李糖苷酶的产量显著降低。因此,可以将菌丝体活力作为α-L-鼠李糖苷酶发酵工艺优化和生产过程控制中一项重要的监控参数。     

单宁酶产生菌的发酵培养基优化

用响应面试验对一株单宁酶产生菌黑曲霉的固体发酵培养基进行优化,优化后的最佳发酵培养基组成为:在250mL三角瓶中装入5g麸皮和5mL由(蔗糖12g/L,KNO325b/L、玉米浆22.4g/L、五倍子65.1g/L、MgSO4 13.6g/L,CoCl2 0.2g/L、柠檬酸钠3g/L、NaCl2.5g/L)组成的盐溶液,在此条件下,发酵单宁酶酶活为13.54U/g,比优化前提高了1.82倍.     

传统发酵豆酱中产α-淀粉酶菌株的筛选

α-淀粉酶广泛分布于动物、植物和微生物中,能水解淀粉产生糊精、麦芽糖、低聚糖和葡萄糖等,是食品工业中应用最为广泛的酶制剂之一。从东北三省传统的家庭自制豆酱上获得纯培养真菌389株,通过可溶性淀粉平板初筛获得具有α-淀粉酶活性的菌株34株,其中曲霉属的真菌14株、青霉12株、毛霉2株、镰孢菌2株、帚霉1株、犁头霉1株、木霉2株。米曲霉(Aspergillus oryzae)、橘灰青霉(Penicillium aurantiogriseum)和疣状青霉(Penicillium verrucosum)出现频率较高,是豆酱发酵过程中产生α-淀粉酶的优势种群。     

大豆蛋白水解液脱苦的研究

大豆蛋白酶解常常会产生苦味,蛋白质水解物苦味肽的苦味是长期困扰其应用的问题。本文研究了酶法与微生物法对大豆蛋白水解液脱苦的效果。结果表明:采用端肽酶黑曲霉酸性蛋白酶(3000u/g)与内切酶枯草杆菌碱性蛋白酶(Alcalase 2.4L)协同作用水解大豆蛋白可有效降低水解液苦味,并且由酿酒酵母对水解液进一步处理后,大豆蛋白水解液的苦味降至更低。     

Further mycotoxin effects from climate change

Climate change will affect mycotoxins in food. The 2007 Intergovernmental Panel on Climate Change report is reinterpreted herein to account for what may occur with mycotoxins. Warmer weather, heat waves, greater precipitation and drought will have various impacts, depending on which regions of the world and mycotoxin systems are considered. The humidity issues are more complex as some areas will experience drought and others greater precipitation: in vivo data on the effects of moisture on mycotoxins in crops are more ambiguous than those for temperature. In vitro data on fungal growth and mycotoxin production may not relate directly to the situation in the field or post harvest, but are useful for base-line assumptions. The effects of climate in various regions of the world, i.e. Africa, Europe, Asia, Latin America and North America are considered in terms of mycotoxin contamination. Crops introduced to exploit altered climate may be subject to fewer mycotoxin producing fungi (the “Parasites Lost” phenomenon). Increased mycotoxins and UV radiation may cause fungi to mutate on crops and produce different mycotoxins. Whereas there is relevant information on aflatoxins, deoxynivalenol, and ochratoxin A, more mycotoxins require to be considered: Data on patulin are missing. The current paper considers uniquely ergot alkaloids. Amelioration strategies are provided. There is considerable urgency in the need to address these issues.     

响应面法优化鹿皮曲霉ZJOU-AC1产壳聚糖酶的发酵条件

以壳聚糖酶活力为评价指标,在单因素试验的基础上,采用响应面法对鹿皮曲霉(Aspergillus cervinus)ZJOU-AC1产壳聚糖酶的发酵条件进行优化。结果表明,最佳发酵条件为胶体壳聚糖1.5%,硫酸铵0.4%,磷酸二氢钾0.2%,硫酸镁0.05%,麸皮2%,Tween-80 0.06%,发酵时间96 h,发酵温度30 ℃,初始pH 5.9,接种量3%。在此最佳条件下,最终测得壳聚糖酶平均酶活为8.26 U/mL,是优化前(2.05 U/mL)的4.03倍。     

利用葡萄渣黑曲霉固态发酵产果胶酶的研究

对黑曲霉（Aspergillus niger）BB-6利用葡萄渣固态发酵产果胶酶的发酵条件进行研究。结果表明,在基础发酵培养基中添加葡萄糖4%、硫酸铵0.6%,含水量60%,培养温度30 ℃条件下培养72 h,果胶酶酶活达12.226 U/g。     

黑曲霉单宁酶发酵工艺

用黑曲霉Aspergilhus niger QG 0301进行单宁酶发酵，制得酶制剂。实验结果表明：Aspergillus niger QG 0301进行单宁酶发酵的适宜培养基包括：混合碳源（或玉米淀粉）、硫酸铵、磷酸二氢钾、碳酸钙、硫酸镁、单宁酸；在30℃、120r/min振荡培养5天，单宁酶产量平均为18．55u／mL。     

冷冻聚丙烯酰胺法固定化黑曲霉生产柠檬酸的研究

本文建立了冷冻聚丙烯酰胺包埋固定化微生物的方法，并用于固定化黑曲霉生产柠檬酸，与常规方法进行了比较。优化了固定化细胞生产柠檬酸的条件：蔗糖浓度１００～１４０ｇ／Ｌ，ＮＨ４Ｃｌ３．０～４．０ｇ／Ｌ初始ｐＨ３．０，培养温度３０℃。固定化细胞在半连续发酵中重复使用５批次，在连续发酵中使用３００ｈ，其余酸活性没有明显下降。