高效阴离子色谱法测定当归果胶多糖中的糖醛酸含量

建立高效阴离子色谱-脉冲安培检测(HPAEC-PAD)当归果胶多糖中糖醛酸的定性、定量方法,并对测试样品的预处理方法进行研究。分别对多糖样品进行不同预处理,采用外标法测定糖醛酸含量。结果表明,多糖样品需经脱脂处理并结合弱酸水解和酶解才能获得准确、真实的结果;建立了半乳糖醛酸(GalA)和葡萄糖醛酸(GlcA)的线性回归方程,相关系数均为0.9990。经计算,HPAEC-PAD法测定当归多糖的GalA含量为53.62%,与比色法(58.27%)的相对误差为8.67%,并具有良好的重现性。采用HPAEC-PAD法对糖醛酸定性、定量,无需衍生化,且灵敏度高、重现性好,是快速测定糖醛酸含量的有效方法。     

冬虫夏草与韩芝液体混合发酵条件研究

平板培养基上比较了冬虫夏草、韩芝及树舌的菌丝生长速度和对淀粉的利用情况,结果显示三者的生长速度分别达到1.28、0.64和0.55cm/d,且韩芝与树舌对淀粉的利用均优于冬虫夏草;混合培养结果得出菌种的最佳菌龄比为虫草:韩芝=3d:5d,最佳的接种比例为2:3;正交试验混合发酵最佳的培养基配方为(% ):葡萄糖1.0 、淀粉2.0、黄豆粉2.0、酵母粉0.5.在此条件下,菌丝生物量达到最大值1.97g/100ml.     

青蛤多肽的酶法制备及对前列腺癌DU-145细胞的抑制活性

探讨青蛤多肽的制备工艺及体外抗前列腺癌DU-145细胞的活性。以氨基氮含量为检测指标,筛选最优酶种类并进行正交试验以获取最佳酶解青蛤内脏酶解工艺。经超滤截留、琼脂糖凝胶层析、高效液相色谱分离纯化及噻唑蓝（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT）活性筛选得到含有5 个氨基酸的多肽（Ile-Leu-Tyr-Met-Pro）。对所得多肽采用MTT法测定DU-145细胞增殖抑制率;采用倒置显微镜、Hoechst 33258染色及透射电子显微镜技术观察细胞形态学变化;采用荧光法检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;采用线粒体膜电位检测DU-145细胞凋亡情况;采用免疫组织化学法检测非转移性克隆23型（nm23H1）蛋白的表达。结果表明：制备青蛤多肽最佳酶是木瓜蛋白酶,最佳酶解条件是料液比1:4、pH 7.0、加酶量1 500 U/g、温度45.0 ℃、酶解时间4 h;所得多肽对DU-145细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈时间与剂量依赖性;处理后的DU-145细胞出现凋亡的形态学特征;其质量浓度和细胞内ROS的表达量呈正相关关系;线粒体膜电位降低率从4.22%提高到25.07%;免疫组织化学法结果显示nm23H1蛋白的表达量增加。青蛤多肽能明显抑制DU-145细胞的增殖,并通过诱导其发生凋亡而发挥作用。     

盘龙参内生真菌S-3产黄酮发酵条件的优化研究

盘龙参内生真菌S-3可产生黄酮类化合物,通过ITS法测序分析,S-3鉴定为嗜松青霉Penicillium pinophilum。为了增加内生真菌S-3产黄酮量,以单因素结合正交法优化S-3菌株发酵条件,结果表明,最佳发酵条件如下:发酵培养基组成为马铃薯100 g,玉米粉40 g,葡萄糖10 g,豆饼粉10 g,磷酸二氢钾3 g,硫酸镁1.5 g,水1 000 mL,pH6.7;发酵温度28℃,摇床转数160 r/min,发酵时间4 d。     

生物信息学方法筛选华支睾吸虫成虫功能基因——钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白

目的本文通过建立华支睾吸虫成虫cDNA文库,筛选其功能基因。方法应用SMART方法构建华支睾吸虫成虫cDNA文库,进行大量EST测序,然后应用生物信息学方法将EST序列与GenBank中登陆的序列进行同源性比对、序列拼接及基因完整性判断;并应用NCBI上的RPSBLAST对所筛选基因的保守域进行搜索比对,利用PredictProtein分析、预测其功能域及二级结构。结果从华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选的钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白(CsCBLP)基因,经同源性分析,CsCBLP与褐家鼠钙调神经磷酸酶(CaN)同源性为53%,与尾刺耐格里原虫CaNB同源性为40%,与新小杆线虫属结合蛋白的同源性为51%;保守域的比对及功能域、二级结构的预测显示所筛选的CsCBLP是钙调神经磷酸酶B亚基的的类似物,属于钙结合蛋白家族。结论应用生物信息学方法从华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选出钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白基因。     

当归净油抗衰老及抗炎祛痘功效的体外实验研究

通过人真皮成纤维细胞(HDF-a)模型,考察了当归净油对细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)的影响。结果表明,当归净油在最大安全质量浓度25 mg/L时,能有效增加HDF-a细胞分泌Col-Ⅰ达33.5%。利用痤疮丙酸杆菌刺激人急性单核细胞THP-1,建立了特异性痤疮炎症细胞模型,考察当归净油对细胞分泌炎症因子人白细胞介素1β(IL-1β)的影响。结果表明,当归净油最大安全质量浓度为12.5 mg/L,此时对痤疮丙酸杆菌诱导的THP-1细胞炎症因子IL-1β分泌抑制率高达94.51%,当质量浓度减半为6.25 mg/L时,抑制率为64.34%。当归净油作为一种芳香性中草药,有望成为抗衰老及抗炎祛痘的个人护理天然原料,在化妆品中得到进一步开发和利用。     

Quality control method of sterols in fermented Cordyceps sinensis based on combined fingerprint and quantitative analysis of multicomponents by single marker

In this study, we established a new pattern for differentiating and comprehensively evaluating the quality of fermented Cordyceps sinensis based on high-performance liquid chromatography (HPLC) fingerprint analysis combined with similar analysis (SA), principal component analysis (PCA), hierarchical cluster analysis (HCA), and the quantitative analysis of multicomponents by single marker (QAMS). These methods indicated that fermented Cordyceps sinensis samples could be categorized into one class by PCA and HCA. The fingerprints of fermented Cordyceps sinensis were established, and four HPLC peaks were identified as ergosterol, daucosterol, stigmasterol, and β-sitosterol in Jinshuibao capsules and tablets (two products of fermented Cordyceps sinensis). Ergosterol was chosen as the internal reference substance, and the relative correction factors (RCFs) between ergosterol and the other three sterols were calculated using the QAMS method. Moreover, the accuracy of the QAMS method was confirmed by comparing the relative error between the results of the method used with those of an external standard method (ESM). No significant difference between the two methods was observed. The total sterols content in Jinshuibao products were calculated by the QAMS method, and the total sterols content of the two products were similar. This study showed that the method established herein was efficient and successful in the identification fermented Cordyceps sinensis and may further act to facilitate systematic quality control of fermented Cordyceps sinensis products.     

阿根廷马黛茶与广东红茶挥发性成分比较分析

本研究以阿根廷马黛茶和广东红茶为研究对象,采用顶空固相微萃取-气质联用仪(HS-SPME-GC/MS),分析马黛茶和红茶的挥发性成分,探明其差异组分,明晰马黛茶的特征挥发性成分。结果表明:醇类是马黛茶(MD)和广东红茶中主要的挥发性成分种类。萜醇(24.34%)和萜酮(18.97%)是MD中主体挥发性成分,MD中香叶基丙酮(4.84%)相对含量高于优选5号红茶(YX5,1.14%)和大叶奇兰10号红茶(QL10,0.89%)。脂肪醛、萜醛、脂肪酮、脂肪醇和萜烯类挥发性成分在MD中相对含量高于YX5和QL10。甲氧基化合物是MD特征挥发性成分,相对含量为6.43%。芳香醇、酸类和酚类化合物在MD中没有检测到。萜醇和酯类是广东红茶的主体挥发性成分。水杨酸甲酯是酯类中相对含量最高的成分,YX5(14.79%)和QL10(12.04%)中相对含量高于MD(2.43%)。     

沉香叶黄酮类化合物的提取及其抗氧化活性

以沉香叶为原料,采用溶剂浸提的方法提取黄酮类化合物,利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）法、2,2-联氮-双-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate),ABTS）法和铁氰化钾还原法测定提取物的抗氧化能力。在单因素试验的基础上,选择乙醇体积分数、提取温度、液料比为自变量,以黄酮类化合物得率为响应值,采用响应面法优化提取工艺。结果表明,沉香叶黄酮类化合物提取的最优工艺为乙醇体积分数60%、提取温度60 ℃、液料比20∶1（mL/g）、提取时间3 h,在此条件下黄酮类化合物的得率为2.88%（m/m）。抗氧化实验结果表明,沉香叶黄酮提取物具有较强的清除DPPH自由基和ABTS＋·能力,其半数有效质量浓度值分别为（1.14±0.08） mg/mL和（0.23±0.01） mg/mL。