利用水解淀粉高产衣康酸菌株的诱变育种

利用葡萄糖产衣康酸的土曲霉为出发株,通过紫外、Co^60等诱变方法的处理,筛选得到能利用部分水解的不溶性淀粉的菌株。同时研究诱变剂的处理剂量、致死率;并进行产酸情况的测定,糖的利用率和传代稳定性的研究。最后得到几株能够高产的土曲霉菌株。其中FZ—12—4菌株产酸率达到6．30g／100ml,产酸率比出发菌株提高45％。     

抗菌肽Dermaseptin S4及其突变体基因在大肠杆菌中的表达

目的构建表达抗菌肽Dermaseptin S4(DS4)及其突变体K4-S4的工程菌,并表达目的蛋白。方法采用重叠延伸PCR法设计和扩增抗菌肽DS4及K4-S4基因,定向克隆入载体pUC-18中,经酶切、测序鉴定,重组至表达载体pGEX-4T-1中,构建抗菌肽DS4及K4-S4基因表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)plyS,经IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE鉴定。结果构建的抗菌肽DS4及K4-S4基因工程菌所表达的目的蛋白,经SDS-PAGE鉴定可见相对分子质量34 000的特异性目的条带,37℃诱导5 h的蛋白表达量最高,且多数以包涵体形式存在。结论已成功构建抗菌肽DS4及K4-S4工程菌,并表达目的蛋白,为进一步研究其功能和应用奠定了基础。     

百日咳毒素S1亚单位突变体在大肠杆菌中的表达及纯化

目的克隆百日咳毒素S1亚单位,获得其突变体(S1/9K-129G,rS1),构建原核表达系统,并鉴定融合蛋白的特异性。方法采用PCR和重叠延伸扩增得到突变体,将其与pMD18-T连接,转化至大肠杆菌DH5α,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-T-rS1,经双酶切得到rS1活性结构域编码片段。将其插入pQE-30载体中,转化大肠杆菌M15株,经IPTG诱导表达。表达产物经镍离子柱纯化,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果PCR及重叠延伸获得了约700bp的目的基因片段,并获得阳性重组表达载体克隆,表达产物为相对分子质量27000左右的蛋白,Western blot检测能与兔抗百日咳毒素多价抗血清发生反应。结论成功表达并纯化了百日咳毒素S1亚单位突变体,为研制百日咳疫苗候补抗原的相关分子免疫学研究奠定了基础。     

甘蓝型油菜“棒状”突变体的发现及初步研究

新近,傅廷栋院士在5148—2与黄籽DH系YN90—1016的杂交F1经小孢子培养获得的DH系群体中,发现了一个“棒状”突变体。其表现为矮杆、株型紧凑、主花序及分枝短小簇生、角果不易炸裂、花期集中,非常适合高密度种植和机械化收获。利用SSR技术,对其进行了分子鉴定,并对其遗传规律进行了初步分析。     

烟草抗野火病细胞突变体筛选

烤烟品种红花大金元叶片组织悬浮培养细胞经过４～５代继代培养后，铺平板于含野火病粗毒的ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ（简称ＭＳＩ）培养基上进行筛选或置于含野火病粗毒的ＭＳＩ液体培养基上进行浅层筛选培养。存活愈伤组织转移至相同培养基进一步筛选，经两次筛选得到的愈伤组织在ＭＳ＋２，４－Ｄ０．１ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ培养基上诱导分化形成植株，通过上述方法筛选得到的抗性愈伤组织细胞比未经筛选进行继代培养的愈伤组织细胞对野火病粗毒表现出较强的抵抗力；对筛选得到的愈伤组织再生植株及其后代进行人工接种，从中筛选出一些抗病株系，研究结果表明，利用体细胞无性系变异，采用细胞离休筛选技术，可以获得抗野火病的烟草新材料。     

烟草抗PVY~N突变株eIF4E基因的克隆及表达差异分析

为了明确抗马铃薯Y病毒病的相关基因、进一步揭示其抗病机制,以烟草高抗马铃薯Y病毒脉坏死株系(Potato virus Y vein necrosis strain,PVYN)突变株SN01和SN02为试验材料,研究了突变株的抗病相关基因翻译起始因子4E(e IF4E)在寄主中的抗病作用。结果表明:从抗病突变株SN01和SN02中克隆到目的全长基因,分别命名为e IF4E01与e IF4E02,其开放阅读框ORF长度均为669 bp,编码222个氨基酸;利用MAGA4.1和CLUSTAL软件进行序列同源性比对分析表明,e IF4E01和e IF4E02与已报道的烟草e IF4E(Gen Bank:AY702653.1)基因序列相似度均达到99%,其开放阅读框序列完全一致。并与甜椒、番茄、拟南芥等物种的e IF4E家族基因也具有高度同源性;Real-time PCR结果表明,在PVYN侵染初期(接种后0~9 d),突变株SN01和SN02中的e IF4E基因表达量明显低于其感病亲本NC89和K326。说明这两个抗病突变株中的e IF4E基因的抑制表达与烟草对PVYN的抗性密切相关。     

Characteristics of hydrogen production by an aciduric transposon-mutagenized strain of Pantoea agglomerans BH18

Based on the generation of Pantoea agglomerans BH18 library using Tn7 transposon system, mutant screens were conducted for improvement the ability of hydrogen production of this strain. These mutants were used to test for ability of hydrogen production in the initial pH of 5.0. In contrast to wild type strain BH18, a transposon mutant, named as strain TB108, was screened for high hydrogen-producing capability and acid tolerance in the initial pH of 5.0. The factors required for hydrogen production of the aciduric transposon-mutagenized strain TB108 were determined. The mutant strain TB108 similar as wild type strain BH18 was able to produce hydrogen over a wide range of salt concentration from 0.4% to 6%. Under the marine conditions with the initial pH of 5.0 and glucose concentration of 10 g/L, the total hydrogen production of the mutant TB108 was (1.36 ± 0.04) mol H₂/mol glucose (mean ± S.E.), increasing by 55% compared with wild type. In addition, the mutant strain TB108 could produce hydrogen using many carbon sources such as fructose, glucose, sucrose, sorbitol and so on. This result demonstrated that the mutant strain with high acid tolerance is beneficial for improvement of hydrogen production.     

GM-CSF(12-127)突变体生物学活性的研究

GM－CSF的结构与功能研究表明，N-端的1～13位氨基酸并非生物学活性所必需，且干扰与受体的结合。作者采用PCR突变的方法删除1～11位的氨基酸，保留12位的脯氨酸。突变后的基因经全序列测定证实，之后插入原核高效表达载体pBV220中表达，基因突变后的表达量及表达产物的稳定性均有所提高。大批量表达后经提取包涵体、疏水层析、离子交换层析，最终获得了纯的GM－CSF（12－127）突变体蛋白，其生物学活性比未突变蛋白有明显提高，达3×107U／mg蛋白。受体竞争结合实验显示突变体蛋白受体亲和活性增强。     

基于代数式规范的变异测试方法的设计与实现

软件测试是软件工程中保证软件产品质量的重要组成部分.变异测试是一种衡量测试用例集完备性的测试策略,也被用于生成完备的测试用例集.为了提出一种基于代数式规范的新的变异测试方法,为此设计了12类针对代数式规范的变异操作符,对5个代数式规范进行了实验,并进行了结果分析.结果表明基于代数式规范的变异测试方法相比基于代码的传统变异测试方法,生成更少的变异体,也大幅度提升了变异测试的效率.