Identification of an acidic α-amylase from Alicyclobacillus sp. A4 and assessment of its application in the starch industry

An acidic α-amylase was purified from thermoacidophilic Alicyclobacillus sp. A4 by ion exchange chromatography with 22% recovery, and showed a molecular mass of 64 kDa by SDS-PAGE. Its amino acid sequence was determined by sequencing three internal peptides and the complete genome of strain A4, and shared highest identity (64%) with Alicyclobacillusacidocaldarius α-amylase. Compared with other reported α-amylases, the purified enzyme had some distinct characteristics. The optimal activity was found to occur at 75 °C and pH 4.2, similar to the glucamylase widely used in the starch industry. The enzyme was Ca²⁺ independent, and had strong ability to digest raw starch (96.71%) with commercial glucamylase in one step. These properties of the purified enzyme make up the deficiency of the commercial α-amylases currently used and avoid repeated adjustment of pH and temperature in double-enzymatic sugar-making process. The purified enzyme will be commercially valuable in the starch industry.     

Caffeate derivatives induce apoptosis in COLO 205 human colorectal carcinoma cells through Fas- and mitochondria-mediated pathways

The objective of this study was to investigate the anticancer activity of caffeate derivatives in human cancer cells. Our results demonstrate that caffeate derivatives decreased the population growth of COLO 205, assessed using the MTT assay. However, caffeate derivatives, at the concentrations used in this study (0-250 μM) did not affect the viability of HepG2, Huh7, PLC5, and SK-Hep-1 cells. Flow cytometric analysis of COLO 205 cells exposed to decyl caffeate showed that the number of apoptotic cells increased in a time- and dose-dependent manner. Western blot analysis revealed that decyl caffeate stimulated an increase in protein expression levels of p53, Fas, FasL, AIF, and Apaf-1. Additionally, treatment with decyl caffeate changed the expression levels of Bcl-2 family members and subsequently induced the activation of caspase-12, caspase-9, and caspase-3, which was followed by cleavage of PARP. Our findings highlight the chemopreventive potential of decyl caffeate.     

蛋壳膜中胶原蛋白的提取分离

以废弃的鸡蛋壳为原料,采用酶法对鸡蛋壳膜中的胶原蛋白进行提取,探讨胶原蛋白提取的最佳条件。结果得出,壳膜的最佳分离条件为0.5 mol/L盐酸,pH7.0,温度30℃,固液体积比1∶10,反应时间1 h;胶原蛋白的最佳提取条件为0.5 mol/L醋酸,胃蛋白酶5%(150 U/g),温度40℃,pH2.5,提取体积1∶10,反应时间24 h。     

酒度、总酸、pH值以及饮用温度对干红葡萄酒涩味的影响

利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）分析唾液蛋白与模拟酒反应后蛋白减少比例,并将其表示为涩味强度;同时,以酒度、总酸、pH值以及饮用温度为考察因素,利用二次正交旋转组合设计分析各因子对涩味强度的影响。结果表明：pH值对涩度影响最大,其次是酸度和温度,酒度影响最小;其中pH值和酸度互作效应对涩味的影响显著。     

不同预处理方式对碱法提取米渣蛋白得率的影响

研究不同的预处理方式对碱法提取米渣蛋白得率的影响。结果表明：分别用质量分数0.5%柠檬酸或稀释20倍的醋酸（0.875 mol/L）对米渣在25 ℃处理180 min,再用0.1 mol/L NaOH溶液提取,温度50 ℃,提取时间27 h,则蛋白提取率有较大提高;蛋白质提取率分别为84.60%和80.1%,高于未经过酸处理的米渣蛋白提取率。质量分数为0.5%柠檬酸和稀释20 倍（0.875 mol/L）的醋酸预处理的大米渣蛋白质经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,用体积分数18%分离胶有利于蛋白质电泳的分离;蛋白质在提取过程中分解成小的片段,主要集中在9.5 kD和4.1 kD附近,其中4.1 kD蛋白含量较多,且用质量分数0.5%柠檬酸预处理后碱法提取的蛋白质颜色纯白鲜亮,质地细腻润滑。     

蟹类主要过敏原的模拟肠胃液消化及其对过敏原活性的影响

目的:通过模拟肠胃液消化试验,分析锯缘青蟹肌肉中过敏原(原肌球蛋白)的消化特性以及消化对过敏蛋白致敏性的影响.方法:采用美国药典提供的模拟胃、肠液配方,测定青蟹原肌球蛋白和肌原纤维蛋白在体外模拟肠胃环境中的消化稳定性.以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹法(Western-blot)进行分析.结果:在模拟胃液反应中,非过敏原蛋白尤其是肌球蛋白重链和肌动蛋白等被胃蛋白酶快速降解,而原肌球蛋白在60 min时仍未被完全分解.在模拟肠液反应中,相对于致敏蛋白,肌球蛋白重链、肌动蛋白等非过敏蛋白在较短的时间内被分解,原肌球蛋白尽管120 min后几乎被完全分解,但会产生一些较稳定的蛋白降解片段.以免疫印迹法检测过敏患者血清,结果分子质量为34 kDa的原肌球蛋白降解产物仍具有过敏原性.结论:蟹类过敏蛋白相对于非过敏蛋白具有较高的消化稳定性,而且其高分子质量降解产物仍可能引起过敏反应.     

超声波与菠萝蛋白酶协同作用对鸭肉嫩化的影响

采用单因素和响应面设计优化了超声波辅助菠萝蛋白酶嫩化鸭肉的最佳工艺参数,并对嫩化机理进行探讨。得到优化条件为处理温度45?℃、pH?7.2、菠萝蛋白酶添加量350?U/g、超声波功率80?W、嫩化时间15?min,在该条件下剪切力的预测值为20.208?N,实测值为21.110?N。相对于未处理的鸭肉,嫩化组鸭肉的pH值、持水力和肌原纤维小片化指数显著增加（P＜0.05）,剪切力、肌原纤维溶解度和不溶性胶原蛋白的含量显著下降（P＜0.05）,而色差无明显变化（P＞0.05）。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示嫩化组鸭肉中大分子蛋白被水解成小分子肽类或氨基酸。透射电镜结果显示嫩化组鸭肉肌原纤维Z线断裂溶解,肌节变形缩短,I带和A带模糊不清,出现了肌原纤维小片化现象。超声波与菠萝蛋白酶协同作用对鸭肉的嫩化具有显著的效果,大大缩短了嫩化时间,使鸭肉更加多汁并富有弹性,鸭肉的品质得到了极大的改善。     

荔枝汁中谷蛋白结构及特性

采用Osborne分级法制备荔枝汁中的谷蛋白,并采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）、差示扫描量热仪、红外光谱等方法分析荔枝汁中谷蛋白的分子质量分布、热稳定性以及二级结构等。结果表明：荔枝谷蛋白分子质量较大,主要集中在50?kDa及以上,而且成分复杂,约有10?个条带,经还原后,少量大分子质量条带消失,出现新的较小分子质量条带,其分子质量集中在50?kDa左右;用蛋白样品结合SDS的能力表征蛋白质的表面疏水特性,得出1?mg的荔枝谷蛋白样品结合（74.25±5.26）μg?SDS;游离巯基含量为（29.83±1.72）μmol/g,总巯基含量为（40.59±2.04）μmol/g,二硫键含量为（5.38±0.18）μmol/g;荔枝谷蛋白的变性峰值为105.24?℃;β-折叠和β-转角为荔枝汁谷蛋白主要结构,所占百分比分别为33.92%和64.7%。因此,可初步推断荔枝谷蛋白组分复杂,分子质量较大,具有较强的表面疏水性,二硫键含量较少,对热较稳定。     

西藏青稞种质清蛋白和球蛋白遗传多样性分析

为了解西藏高原青稞种质材料的遗传多样性,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对西藏54份青稞农家种,野生近缘种材料进行了清蛋白和球蛋白遗传多样性分析。研究表明,参试材料共分离出迁移率不同的清蛋白谱带26种,其变幅在10~21条,其中6、9、21和24号谱带在参试材料中均有出现,出现频率为100%,是共有带;13号谱带出现频率最低,出现频率为25.93%;清蛋白有效等位基因数(ne)为1.0~1.99;多样性指数(H)为0~0.5;Shannon's信息指数为0~0.69。球蛋白分离出迁移率不同的谱带类型31条,其变幅在12~26,出现的频率为15.63%~100%,其中9、12、13、28、29号谱带在参数材料中均有出现,其出现频率为100%,为共有带;23号谱带出现频率最低,为15.63%;球蛋白ne、H、Shannon's与清蛋白数据相似。按海拔高度将54份青稞材料分海拔3 000、3 000~3 500、3 500~4 000和4 000 m海拔的4个地理类群,各类群基因多样性指数分别为0.20±0.22、0.29±0.21、0.31±0.19和0.34±0.72,Shannon信息指数分别为0.29±0.31、0.42±0.29、0.45±0.27和0.50±0.24,多态性带百分率依次为49.12%、71.93%、77.19%和84.21%。表明随着海拔高度增加,青稞蛋白的遗传变异逐渐提高。清蛋白和球蛋白谱带聚类分析显示,在相似系数为0.775水平上,可将参试材料分为8个类群,表明清蛋白和球蛋白能在一定程度上反映种质间的亲缘关系。本研究可为西藏青稞资源开发和优良亲本选配提供理论依据。     

大豆7S蛋白-糖体系晚期糖基化终产物形成因素

目的:在大豆蛋白糖基化改性过程中会引发非酶糖基化反应,形成有害的晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs),为提高食品安全性,模拟糖基化加工条件,构建大豆7S蛋白-糖体系模型,考察影响该体系AGEs形成的因素并进行有效调控。方法:采用荧光光谱法(λ_(ex)/λ_(em)=340 nm/465 nm)检测糖种类、还原糖质量浓度、pH值、反应温度、抑制剂种类及其浓度对AGEs形成的影响,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳表征有害产物的形成及抑制效果。结果:糖种类为果糖、蛋白质与葡萄糖质量浓度配比1∶4、pH 9.2、反应温度121℃条件下产生荧光性AGEs的作用效果最强,4种黄酮类化合物槲皮素、染料木素、芦丁和木犀草素对荧光性AGEs的形成均可达到较好的抑制效果,且呈现良好的剂量-效应关系。结论:糖的种类与抑制剂种类对AGEs的形成有一定影响;降低还原糖质量浓度、降低pH值和降低反应温度,添加0.1 mmol/L大豆源染料木素可有效抑制大豆加工过程中有害产物AGEs的形成。