松茸蛋白抗氧化肽制备及构效关系研究

目的 研究松茸蛋白抗氧化肽制备及构效关系。方法 该研究利用响应面试验优化松茸蛋白提取工艺并进行氨基酸分析,质谱鉴定超滤后的松茸蛋白模拟胃肠消化产物,固相合成两条肽评分最高的肽段,通过化学方法和H2O2诱导建立的氧化损伤HepaRG细胞模型评价松茸多肽抗氧化活性,同时结合红外光谱和圆二光谱分析其构效关系。结果 松茸蛋白提取最优工艺参数为提取温度48 ℃、提取时间120 min、pH 10,此条件下的松茸蛋白提取率高达(72.56±0.45)%;松茸蛋白氨基酸种类齐全,必需氨基酸占总量氨基酸的27.65%;SHSFFLP的1,1-二苯基苦基苯肼（DPPH）和?2 ,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐（ABTS）自由基清除率显著高于SFPPIWQ (P<0.05),SHSFFLP和SFPPIWQ能显著降低受氧化损伤HepaRG细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,提升细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力。结论 该研究优化松茸蛋白提取工艺并筛选两条抗氧化肽,SHSFFLP抗氧化能力强于SFPPIWQ可能与二级结构β折叠相对含量较高有关。     

松口蘑菌丝体蛋白质诱导细胞凋亡

采用深层发酵技术培养菌丝体并提取分离出的蛋白质,进行体外抗人子宫颈癌HeLa细胞增殖及诱导细胞凋亡机理的研究.试验发现松口蘑菌丝体水提液中活性蛋白质TMP在体外具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,扫描电镜观察到TMP处理细胞产生明显的凋亡小体,TMP对细胞周期的影响是通过抑制细胞从S到G2M期的转化来抑制HeLa细胞增殖,诱导细胞发生凋亡的.DNA电泳出现以200bp左右为单位的DNA碎片.结果表明采用液体培养方法生产的松口蘑菌丝体蛋白质,具有显著的抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡作用.     

不同提取方法对松茸多糖理化性质及抗氧化活性的影响

目的研究不同提取方法对松茸多糖(polysaccharide of Tricholoma matsutake,TMP)的理化性质及抗氧化活性的影响,并以提取得率和抗氧化活性为依据,筛选出最优方法。方法采用热水浸提、超声提取、酶提取和微波提取等4种提取方法,获得4种相应的多糖。利用高效阴离子交换色谱和傅里叶红外光谱对4种多糖的化学特性进行了结构表征。结果 4种多糖的提取得率顺序为热水浸提多糖超声提取多糖酶提取多糖微波提取多糖。在4种多糖中,超声辅助多糖含量最高(48.98%),蛋白含量最低(0.2%)。抗氧化试验结果表明,超声辅助多糖的还原力和·OH的清除力均高于其他3种多糖;从清除DPPH活性来看,超声辅助多糖和热水浸提多糖的EC_(50)分别为1.06和0.98 mg/mL,二者活性相当,均远高于其他2种多糖。结论综合考虑提取得率、多糖含量和抗氧化活性,超声提取为最优方法。4种多糖的单糖组分基本相同,但它们的摩尔比有明显不同。     

冻干松茸粉中总砷及无机砷的含量测定

目的测定冻干松茸粉中总砷及无机砷的含量。方法采用电感耦合等离子体质谱法(inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS)、原子荧光光谱法(atomic fluorescence spectrometry,AFS)、液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(liquid chromatography with inductively coupled plasma mass spectrometry,LC-ICP/MS)3种方法分别测定松茸中总砷及无机砷含量。结果ICP-MS、AFS测定冻干松茸粉中总砷含量分别为71.7、0.556 mg/kg,LC-ICP/MS测定冻干松茸粉中无机砷含量为0.0114 mg/kg。结论冻干松茸粉中砷主要以有机态存在,且不同检测方法以及前处理方式都会对实验结果产生影响。     

松口蘑深层发酵上清液抗氧化活性研究

通过1，1-二苯基-2-苦肼基自由基（DPPH）体系来研究体外松口蘑深层发酵上清液的抗氧化活性。将松口蘑深层发酵上清液通过石油醚和乙酸乙酯分为不同种类萃取物，研究各萃取部位抗氧化活性。结果表明，松口蘑发酵上清液乙酸乙酯萃取物自由基清除率最强（52．4％），且自由基清除率随浓度增加而增强；其他萃取部分的抗氧化能力递减顺序为：发酵液（33％）〉乙酸乙酯萃余液（20．3％）〉石油醚萃余液（14．6％）〉石油醚萃取液（5．2％）。定性试验初步验证上清液乙酸乙酯萃取物中抗氧化成分可能为黄酮、酚类、有机酸等。     

Process development for mycelial growth and polysaccharide production in Tricholoma matsutake liquid culture

In this study, the effects of agitation and aeration on mycelial growth and exo-polysaccharide production were examined in batch cultures of Tricholoma matsutake. Agitation was varied from 100 to 300 rpm and aeration was varied from 0.5 to 1.5 vvm. Mycelial growth was 21.87 g/l at 150 rpm, and exo-polysaccharide production was 8.79 g/l at 1.5 vvm. When we analyzed the polysaccharide extractions from the cultured mycelium and the culture broth of T. matsutake, 1.4 g of crude polysaccharide was found per 100 g of dried weight in the cultured mycelium, and 1.47 g/l of polysaccharides was found in the culture broth. In addition, the amounts of β-Glucan in the soluble polysaccharide fractions of the cultured mycelium and culture broth were 75.4% and 83.6%, respectively. The cultured mycelium and the culture broth contained a higher amount of β-Glucan than that of the fruiting body.     

松茸产品开发的研究进展

文章综述了近年来我国松茸产品开发利用的相关情况,分别介绍了松茸在保健食品、医药制剂、保健饮品等方面的研究进展,为松茸产品的进一步研究开发提供参考依据。     

常熟虞山松蕈优良菌株选育及深层发酵条件的优化

针对常熟虞山松蕈菌株筛选及深层发酵条件优化展开研究。以松蕈深层液体发酵的生物量、菌丝球直径、菌丝体密度及菌丝体日生长速率为指标,筛选得到松蕈2号菌株。进一步优化了该菌株的发酵条件。通过单因素实验研究了培养温度、摇床转速及发酵周期对松蕈深层发酵的影响。最后,通过响应面实验优化得到最佳发酵条件为温度25℃,摇床转速170 r/min,发酵周期8.5 d。在此条件下培养后,松蕈菌丝体干重达14.5 mg/m L。      

基于GC/MS测定的松茸挥发性特征香气研究

以松茸和其他野生菌为样品,通过同时蒸馏萃取得到挥发性组分。采用GC/MS测定和峰面积归一化法分析其化学成分和相对含量,并探讨其化学成分与松茸特征香气之间的关系。结果表明,本法从松茸挥发发性成分中共分离出54组分,并鉴定出38种成分,占挥发性成分总量的87.76%(峰面积)。其中,1-辛烯-3-醇、肉桂酸甲酯、吲哚为松茸特征香气物质,可用于鉴别松茸及其他野生菌。     

松口蘑糖蛋白联合5-Fu体外对人肝癌细胞Bel-7402的影响及作用机理初探

采用MTT法研究了松口蘑抗肿瘤糖蛋白MTS03与化疗药物5-Fu单独及联合使用对人肝癌细胞Bel-7402的影响及对人正常肝细胞L-02的毒性作用，观察不同浓度配比及不同作用时间对细胞是否具有增效减毒的作用；采用扫描电镜观察MTS03作用后的Bel-7402细胞形态．结果表明，MTS03与5-Fu在较低浓度单独使用对肿瘤细胞无显著差异，但两者联合使用增强了对肿瘤细胞的杀伤作用，而对正常细胞的作用较小，联合使用的q值均大于0．85，说明不存在拮抗作用．扫描电镜观察到凋亡小体的形成，随着剂量升高，凋亡小体增多．这一结果说明两者合用后MTS03增加了5-Fu对肝癌细胞的敏感性，同时降低了两者单一高剂量使用时引起的毒副作用，同时MTS03能诱导Bel-7402细胞膜皱缩和凋亡小体的形成．