HPLC法测定大枣提取液中环腺苷酸含量的研究

采用HPLC法对大枣提取液中的环腺苷酸(cAMP)含量进行测定。色谱条件为,色谱柱为VP-ODS(25cm×2.6mm,5μm)柱,流动相为V(甲醇):V(0.05mol/L磷酸二氢钾)=20:80,流速0.8mL/min,紫外检测波长254nm,检测器UV254nm×0.1AUFS。测定结果表明:标准曲线在0.02~0.64mg/mL范围内线性良好,回收率为98.45%,相对标准误差为0.93%。     

樟芝固态发酵产品活性代谢产物分析

对樟芝固态发酵产品的活性成分进行了初步分析。结果显示,樟芝固态发酵产品富含马来酸和琥珀酸衍生物、核苷类化合物、甾醇、多糖、不饱和脂肪酸等多种生理活性物质,与子实体具有一定的相似性。樟芝固态发酵产品含有护肝活性极好的两种化合物Antrodin B和Antrodin C。除此之外还含有腺苷、虫草素和Ergostatrien-3β-ol,含量分别为5.15 mg/g、0.178 mg/g和11.02 mg/g;樟芝固态发酵产品富含樟芝多糖,其中活性β-1,3-D-葡聚糖含量为102.4μg/g;此外,产品不饱和脂肪酸是优势脂肪酸,相对含量为81.96%,主要为亚油酸、油酸。     

清涧红枣乳酸菌发酵饮料工艺优化

以清涧红枣为原料,提取红枣枣清汁。通过选择干酪乳杆菌、植物乳杆菌和鼠李糖乳杆菌3种乳酸菌进行单独及复配发酵,探索发酵时间、发酵菌种、接菌量及枣清汁初始可溶性固形物含量对发酵饮料pH及感官评价影响,并通过正交试验优化发酵工艺。结果表明,红枣枣清汁以干酪乳杆菌:植物乳杆菌:鼠李糖乳杆菌=6:1:1 (m/m)复配发酵为宜,接菌量为0.01%,在初始可溶性固形物含量13.5%,37 ℃发酵48 h,pH为3.61,乳酸菌活菌数≥1.5×108 CFU/mL,还原糖含量为10.46 g/100 g,总酸含量为8.99 g/kg,符合QB/T 5356-2018果蔬发酵汁标准;环磷酸腺苷含量为21.4 μg/mL,较好的保留了发酵前枣清汁中含有的环磷酸腺苷。本文制备出一款营养丰富、风味俱佳地清涧红枣乳酸菌发酵饮料。     

微生物发酵生产腺苷的研究

以肌苷产生菌BacillussubtilisJSIM 10 19为出发菌株[1] ,用物理、化学诱变剂对亲株进行诱变处理 ,获得了 3株黄嘌呤营养缺陷型突变株MG 16、H 12、AD 6 ,获得的黄嘌呤营养缺陷型突变株经单菌分离后 ,36℃培养 72h在培养基中最高积累 10 g/L腺苷 ,一般产腺苷7～ 8g/L     

ATP生物发光法快速检测电子烟雾化液菌落总数

利用三磷酸腺苷(ATP)生物发光法建立快速检测电子烟雾化液微生物菌落总数的方法并进行优化,与国家标准微生物检测方法进行对比分析。结果表明:(1)ATP荧光检测仪的最优检测温度为25℃,反应时间为30s,ATP检出限为2.36×10~(-12) mol/L,RSD为3.5%~8.2%,加标回收率为97%~108%;(2)滤膜过滤富集检测可实现低活菌数样品的检测,混合纤维素酯滤膜的富集检测效果优于聚碳酸酯滤膜和醋酸纤维滤膜,富集后检测ATP生物荧光的相对光度值与富集前活菌总数具有良好的对数线性相关关系(r~20.96);(3)采用ATP检测方法估算的活菌总数结果与平板计数检测结果没有显著性差异(P0.05),对电子烟雾化液的卫生情况评价结果一致。ATP生物发光检测方法可快速计算电子烟雾化液菌落总数,对于电子烟安全卫生风险评估具有建设意义。     

蛹虫草发酵产虫草素的培养条件研究

研究外源添加物,麸皮、玉米芯、腺苷等对蛹虫草液体发酵合成虫草素的影响,结果表明,发酵5d后加入3g/L腺苷,虫草素的产量最高。当腺苷添加量大于4g/L时,虫草素对腺苷的得率维持在25%,虫草素产量最大能达到1.62g/L。通过分析菌丝体生长与虫草素合成的动力学关系,发现虫草素的合成属于部分生长偶联型发酵。当振荡发酵4d后,静置发酵7d,虫草素的产量达到1.60g/L,产率达到145.5mg/L/d。这一蛹虫草合成虫草素的发酵工艺具有潜在的工业应用价值。     

金属离子对面包酵母合成ATP的影响机制初探

对Mg2+, K+和Na+在面包酵母酶系合成ATP过程中的影响机制进行了初步研究. 发现Mg2+对ATP的合成影响很大,当Mg2+浓度为40 mmol/L时,ATP合成量达到最大值,为6.07 mmol/L;高浓度磷酸钾缓冲液会抑制ATP的合成,进一步研究发现高浓度K+对ATP合成具有明显抑制作用,但K+完全缺乏时,也不利于腺苷的转化;Na+可通过激活腺苷酸激酶的活性来促进ATP合成,同时激活腺苷脱氨酶的活性,其存在会使底物腺苷向肌苷转化.     

虫草菌丝体中腺苷和虫草素的定性分析

介绍了虫草菌素的生物活性;对比了虫草菌素与腺苷的3种定性分析方法,其中薄层层析和高效液相色谱法可行。检测结果表明待测的古尼拟青霉519样品中含有腺苷,蛹草拟青霉菌丝体中含有虫草菌素。     

过表达嘌呤合成途径关键酶基因对重组酿酒酵母菌株生产cAMP的影响

研究了环磷酸腺苷(cAMP)合成途径中的3个关键酶基因(磷酸核糖焦磷酸合成酶基因PRS1和PRS3、磷酸核糖焦磷酸氨基转移酶基因ADE4、腺苷酸激酶基因ADK1)过量表达对重组酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)发酵向胞外分泌cAMP的影响,利用酿酒酵母游离型质粒YEplac195和磷酸甘油酸激酶PGK的强启动子PGK1p及终止子PGK1t构建含PRS1, PRS3, ADE4和ADK1的单基因表达载体,分别转入cAMP生产菌GA125,通过摇瓶发酵实验考察重组菌株与对照菌株的生长、cAMP生产及胞外腺嘌呤消耗情况. 结果表明,在外加腺嘌呤条件下,与对照菌株相比,PRS1, PRS3和ADE4基因过表达菌株的cAMP产量分别提高4.17%, 9.03%和6.06%,而ADK1过表达菌株的cAMP产量降低3.85%.     

异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用

目的：考察异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,探究其作用机制。方法：采用3T3-L1前脂肪细胞,利用磺酰罗丹明B（sulforhodamine B,SRB）法检测异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响,采用传统的鸡尾酒法诱导3T3-L1细胞分化为脂肪细胞,利用油红O染色法检测分化细胞脂滴形成;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应方法,检测细胞CCAAT增强子结合蛋白（CCAAT-enhancer-binding proteins,C/EBP）亚型C/EBPα、C/EBPβ、脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase,FAS）、脂肪分化相关蛋白adipophilin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferators activated receptor γ,PPARγ）、腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphateactivated protein kinase,AMPK）的mRNA表达水平,Western blotting法检测AMPK蛋白磷酸化水平。结果：异甘草素可浓度依赖性地抑制3T3-L1细胞增殖,并明显抑制分化细胞内脂滴形成,同时抑制了细胞分化相关基因C/EBPα、C/EBPβ、FAS、adipophilin、PPARγ mRNA的表达,AMPK mRNA的表达未受影响,但异甘草素处理明显上调了AMPK蛋白的磷酸化水平。结论：异甘草素可抑制3T3-L1前脂肪细胞向脂肪细胞分化,其机制可能与活化AMPK信号通路相关。