康宁木霉cbh2基因在毕赤酵母中的表达

为拓宽酵母菌的应用领域,构建具有分泌纤维素酶能力的酵母工程菌,利用质粒pPICZαA构建了康宁木霉纤维素酶cbh2基因的酵母表达载体,经线性化后采用电穿孔法转入毕赤氏酵母菌中.以甲醇为诱导物进行诱导,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果证明该基因可成功表达.对重组蛋白进行了产酶活性测定,结果证明该重组蛋白具有纤维二糖水解活性,从而获得了一株可产生纤维素酶的酵母工程菌.     

一种新型的Tet-off慢病毒调控系统的构建及其调控作用

四环素调控的真核表达系统是真核细胞诱导表达系统的重要组成部分.当前大多数研究者采用双质粒四环素表达调控系统调控外源基因的表达.由于,双质粒四环素表达调控系统的基因表达调控严格依赖于两个单载体同时感染同一个细胞,因而限制其在体内实验中的效率.为解决该问题,研究构建了由慢病毒载体构成的单质粒四环素表达调控系统-pLV300(Tet-off).构建的载体经酶切鉴定及测序均正确.通过荧光观察及RT-PCR实验结果显示,该单质粒四环素调控的慢病毒载体体外可以高效地转移并且维持目的基因的表达,其表达调控效应高、无明显毒副作用,且调控严密.该表达调控系统为慢病毒的临床应用奠定了一定基础.     

固定化基因工程菌应用于水环境污染治理的研究进展

固定化细胞技术和基因工程技术在环境污染物治理领域是新兴技术。本文综述了近年来固定化细胞技术和基因工程技术在水环境污染治理中的研究及应用情况。通过固定化基因工程菌处理废水的一系列成功实验,表明了其在废水好氧反硝化等水环境污染治理中的广阔应用前景。     

含气脂质体的超声波介导体外基因输送的实验研究

研究不同超声频率对含气脂质体声致基因转染效率的影响.采用物理及化学法制备含气型脂质体,并比较不同磷脂配比的含气脂质体含气量差异.以不同频率超声联合化学法制备的含气脂质体转染A549细胞,比较各组报告基因的转染效率.结果表明:应用化学法制备的含气脂质体含气量显著高于物理法,脂质体含气量在卵磷脂与胆固醇配比为7∶3时达到最大值(21%);频率为45kHz的超声波转染效率显著高于其他频率对照组(p0.001),其中以含气脂质体与质粒电荷比1∶1与1∶2时为最佳.超声波联合含气脂质体可以成功介导报告基因的转染,是一种极有希望的基因输送方法.     

Expression of green fluoscrescent protein gene in Sclerotinia sclerotiorum

Protoplasts of the pathogenic plant fungus,Sclerotinia sclerotiorum,were transformed using the pPGF plasmid,which contains green fluorescent protein gene,under the control of Aspergillus nidulans regulatory sequences. The pPGF plasmid was introduced by PEG/CaCl2 treatment. Positive transformants were harvested with hygromycin B (HYG) resistance as selective marker,and then were observed with green fluorescence phenomena in response to blue light,which suggested that GFP gene was cloned into genome DNA of S. sclerotiorum. The transformants were verified mitotically stable by Southern blotting analysis and passage culturing. This study is developed as an initial step for further research into infection mechanisms of S. sclerotiorum to plants and interactions with bio-control fungus.     

Isolation and identification of a sulfate reducing bacteria and sequence analysis of its dissimilatory sulfite reductase gene

A sulfate reducing bacteria was isolated from mining sewage of Daqing Oilfield by Hungate anaerobic technology. Physiological-biochemical analysis showed that the strain could utilize polyacrylamide as sole carbon and nitrogen source. The sequence analysis of 16S rDNA illustrated that the similarity of F8 and Desulfovibrio desulfuricans (AF192153) was 99%, and the similarity sequence of dissimilatory sulfite reductase gene (DSR) cloned from the strain and Desulfovibrio desulfuricans (AF273034) was 98%. Their phylogenitic analysis was basically anastomosed, and thus temporarily named as Desulfovibrio desulfuricans F8. The DSR cloned from F8 strain was 2740 bp in length consisting of three ORF, DSRA, DSRB and DSRD as a single operon (DSRABD) regulated by the same operator. DSRA contained typical conservative box of sulfate—sulfite reducing enzyme (SiteⅠand SiteⅡ), which could bind siroheme and [Fe4S4]. DSRB retained a [Fe4S4] binding site, with an uncomplimentary structure for siroheme binding. There was no conservative box in DSRD. Sequence analysis of DSR will provide a theoretical basis for quantitative detection, metabolic pathway modification through gene engineering, and sulfate reducing bacteria (SRB) suppression.     

两种不同选择标记的转化效率比较

为了弄清两个选择标记在相同条件下的转化效率,为转基因选择遗传标记时提供参考,以优良恢复系明恢63为受体材料,采用农杆菌介导的遗传转化法,分别以hpt和bar基因为选择标记进行了转化．结果显示：1500块胚性愈伤共培养后获得214块抗性愈伤,转化效率为14．3％;5400块胚性愈伤共培养后获得156块抗性愈伤,转化效率为2．9％;两者的分化率分别为79．0％和80．7％．此外,以hpt和bar为选择标记,从胚性愈伤诱导到获得转基因植株分别需要75天和125天．因此,以hpt为选择标记的遗传转化,比较适合基因功能验证和共培养培育无选择标记水稻植株;如果是培育商品化的转基因水稻植株,则最好以bar为选择标记基因．     

微囊藻毒素生物合成研究进展

全球的淡水湖泊不同程度发生水华现象,其危害主要表现在毒素特别是微囊藻毒素的释放。有效控制微囊藻毒素应该首先了解其生物合成过程。针对这个问题,综述了微囊藻毒素的硫模板合成机制、基因簇结构、基因表达调控及环境因素对藻毒素合成的影响等方面的最新研究进展。     

酵母多基因表达载体在纤维素生物转化中应用

构建含酿酒酵母组成型强启动子PGK、G418抗性基因及rDNA片段的整合型载体pScIKP,利用rDNA多个同源重组位点,将外源基因以多拷贝整合到酵母染色体上,无需诱导即可持续表达;利用载体位于表达盒两端同尾酶,可插入多个基因表达盒,实现多基因稳定共表达.为检验共表达情况,反转录从绿色木霉中获得纤维素酶基因eg3和cbh2, 克隆并转化获得重组酵母菌株S.cerevisiae-ec. 该重组酵母能降解羧甲基纤维素形成水解圈;用羧甲基纤维素还原糖法和滤纸酶活力法测定酶活力,其最适温度和最适pH值与所表达单酶相似,表明共表达未影响两种酶的生物学特性;且双酶具有协同作用,能更有效降解非结晶纤维素.pScIKP载体能成功用于多个外源基因共表达和产物协同作用的研究,为构建能直接降解纤维素的酿酒酵母菌株,实现纤维素可再生能源的生物利用奠定了基础.     

基于图形表达的基因序列模糊聚类应用研究

给出了一种新的非退化的基因图形三维表达方法,这一表达方法不仅避免了图形的重叠和交叉,同时还保留了序列的生物学特征.利用这种表达方法对H5N1病毒基因序列进行数字特征的提取,并引入基于多维PFS判别函数进行模糊聚类分析应用.在聚类分析过程中直接利用数字特征作为源数据,分析结果表明,利用该图形表达建立基因序列数字特征矩阵进行的聚类分析具有一定的合理性.