不同分子特性玉米蛋白高F值活性肽的制备及其模拟消化吸收

以玉米黄粉为原料,通过碱性蛋白酶和风味蛋白酶复合酶解制备玉米蛋白高F值活性肽(High Fischer ratio peptide,HFRP),同时根据分子量、电荷性和疏水性差异将HFRP进行分离纯化,并对其吸收特性和耐胃肠消化特性进行探究。结果表明:通过复合酶解法对玉米黄粉进行水解,得到HFRP(F值=26.29)。将HFRP分别按照分子量、电荷性和疏水性进行分离、收集,得到12种组分。通过构建Caco-2细胞体外吸收模型,研究不同分子特性组分的吸收状况,采用质谱扫描鉴定出质荷比(m/z)分别为203.1409、229.2980、226.9517、284.2966的高吸收短肽LA、IP、PL、HQ;通过研究不同分子特性组分的胃肠消化状况,采用质谱扫描鉴定出质荷比(m/z)分别为226.9517、284.2966的耐消化短肽PL和HQ。短肽PL和HQ分子量小,疏水性高,在溶液中带有正电荷,具有优先吸收和耐胃肠消化的特点。本研究为玉米蛋白高F值活性肽的开发提供了理论依据。     

中华圆田螺肉抗氧化肽的分离纯化及小鼠体内外活性研究

采用超滤、大孔树脂、凝胶过滤色谱和半制备液相色谱对中华圆田螺肉的酶解液进行分离纯化,以DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、铁离子还原能力(FRAP)、氧自由基吸收能力(ORAC)为指标,制备抗氧化肽,并通过小鼠体内抗氧化酶活性及MDA生成量进行测定试验。结果表明:分子质量1kDa部位的抗氧化活性最强,分离出的混合物抗氧化肽纯度达到90%。体外抗氧化活性显示,该抗氧化肽的DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、ORAC均为最高,且ORAC与谷胱甘肽相比效果无显著差异(P0.05),通过小鼠体内抗氧化酶及MDA增加值的测定显示,除GSH-PX外,试验组与谷胱甘肽阳性对照组无显著差异(P0.05),说明试验所获得的抗氧化肽具有和谷胱甘肽相当的抗氧化活性,具有深层的开发利用价值。     

苦荞蛋白源肽AFYRW对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的：探讨苦荞蛋白源肽AFYRW在脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的血管内皮细胞损伤中的作用。方法：采用LPS诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）建立血管内皮细胞炎症损伤模型;采用CCK8试剂盒检测AFYRW对细胞增殖活力的影响;Western blot检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhension molecule-1,VCAM-1)、细胞内黏附分子-1(intercellular adhension molecule-1,ICAM-1)、白细胞介素（interleukin,IL）-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,e NOS）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitricoxide synthase,iNOS）水平及核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)p65的磷酸化水平;酶法...     

高谷氨酰胺低聚小麦肽制备用酶的筛选

本文研究了胰酶(Pancreatin)、碱性蛋白酶(Alcalase)、中性蛋白酶(Neutrase)、胃蛋白酶(Pepsin)、酸性蛋白酶(Acidic protease)、复合蛋白酶(Protamex)和风味蛋白酶(Flavourzyme)等8种蛋白酶对小麦蛋白的水解作用。以获得高谷氨酰胺低聚小麦肽为目标,通过分析水解过程中谷氨酰胺肽释放规律变化,筛选出Alcalase和Protamex为最佳水解酶。与其余蛋白酶制剂相比,Alcalase和Protamex可实现对小麦蛋白的有效降解、并最大限度减少蛋白酶对酰胺基团的破坏作用,产物有效谷氨酰胺含量可达20%以上,其中分子量低于3000 Da的水解产物高达95%,尤其是Alcalase酶解产物中分子量小于1000 Da的水解产物含量达到75%。与以往研究相比,本试验以分子量分布替代DH作为蛋白酶筛选的重要依据,从而更加准确反映蛋白酶解特性和难易程度,避免了游离氨基酸的干扰。     

酶解大黄鱼制备咸味增强肽的研究

本文采用木瓜蛋白酶、胰酶对大黄鱼蛋白进行酶解,对酶解产物进行感官咸味评分,并结合味觉传感系统-电子舌进行味觉数值化分析。通过蛋白回收率、水解度以及肽氮回收率研究蛋白酶解过程中氮存在形式的变化规律,结果表明,酶解大黄鱼制备咸味增强肽的最优条件为采用胰酶酶解大黄鱼3 h,此时加酶量为蛋白含量5‰,酶解温度55℃,肉水比1:1,在控制蛋白含量和钠离子含量一致的情况下,感官咸味值和电子舌咸味电信号值均达到最大,具有较好咸味增强作用。抗氧化实验结果表明,3 h时胰酶酶解咸味增强肽还原力可达0.149 mmol TE/mmol,DPPH自由基清除活性可达0.057 mmol TE/mmol。咸味增强肽作为一种生物活性肽,具有重要的营养价值和生物活性,可用于开发高档调味品以及作为功能性食品配料。     

促进米黑根毛霉脂肪酶分泌的毕赤酵母内源信号肽的筛选

米黑根毛霉脂肪酶（Rhizomucor miehei Lipase,RML）在造纸、食品、化妆品以及医药等行业应用广泛。本研究通过SignalP 4.1在线预测软件预测出9种具有分泌潜力的毕赤酵母内源信号肽序列：FLO10、CPR5、PRY2、DSE4、NUP145、MSB2、SSP120、FRE2、FLO9。以广泛应用的酿酒酵母α-交配因子（α-mating factor,α-MF）信号肽为对照,考察这九种内源信号肽对增强型绿色荧光蛋白（Enhanced green fluorescent protein,EGFP）和RML在蛋白酶缺陷型PichiaPinkTM表达系统的分泌效果。结果发现FLO10、PRY2、DSE4、MSB2、SSP120、FRE2能有效介导EGFP分泌,且PRY2、DSE4、MSB2、FRE2介导EGFP的分泌水平优于α-MF,分别是α-MF的2.15倍、1.15倍、1.33倍、1.30倍;FLO10、PRY2、DSE4、FRE2能有效介导RML的分泌,且FLO10介导RML的分泌水平最高,是α-MF的1.50倍,说明内源信号肽FLO10更能有效分泌RML。本研究为提高米黑根毛霉脂肪酶在蛋白酶缺陷型毕赤酵母的表达量奠定了一定的基础。     

南极磷虾粉脱脂前后胰蛋白酶降解产物的变化

采用测序级胰蛋白酶酶解南极磷虾冻虾粉和脱脂南极磷虾粉,然后利用液相色谱-飞行时间质谱(LC-Q-TOF)对酶解产物进行扫描分析,寻找有差异的肽段,并用三重四级杆质谱进行验证。结果表明,共鉴定出四条肽段在南极磷虾加工成脱脂虾粉过程中丢失,其中有两条肽段来源于南极磷虾的精氨酸激酶,它们的序列分别为EDMELQK、ASVHVDLPGWAK,另外两条肽段来源于南极磷虾的原肌球蛋白,它们的序列分别为DQVSEALLK、LQNAEGEVAALNR。本文为利用质谱技术分析南极磷虾多肽提供了一定的理论基础。     

响应面法优化酶解藜麦糠蛋白制备抗氧化肽工艺

以藜麦糠蛋白为研究对象,酶法制备藜麦糠抗氧化肽,进行酶解蛋白酶的筛选,确定最佳复合酶组合。根据单因素试验结果,利用响应面法分析各因素及交互作用对响应值（还原能力）的影响,得到藜麦糠蛋白最优酶解工艺为加酶量3?600?U/g、pH?7.66、酶解时间2.13?h、酶解温度50.53?℃,在此酶解条件下,抗氧化肽得率为76.25%,制得的藜麦糠抗氧化肽有很强的还原能力。该条件下藜麦糠抗氧化肽还原能力预测值为0.636?5,验证实验所得实测平均值为0.644,实测结果与预测值符合良好。同时藜麦糠抗氧化肽对超氧阴离子自由基和羟自由基均有良好的清除能力,且呈现较好的量效关系,在天然抗氧化剂和保健食品领域有一定的开发利用价值。     

仿刺参卵和体壁多肽的制备及免疫活性

以仿刺参卵和体壁为原料制备多肽,测定其基本营养成分和分子质量分布,并研究其对淋巴细胞增殖作用和小鼠免疫功能的影响。采用生物酶解技术和切向流超滤技术分离和制备仿刺参卵和体壁多肽,磺酰罗丹明B比色分析法测定了多肽质量浓度（10、50、100、500 μg/mL）对小鼠淋巴细胞增殖（spleen lymphocyte proliferation,SLP）能力的影响,设定水对照组和多肽低、中、高（日剂量83.3、166.7、500.0 mg/kg）剂量组进行30 d小鼠灌胃实验,检测了小鼠脏器/体质量、迟发型变态反应能力、伴刀豆球蛋白A诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力、抗体生成细胞数、小鼠血清溶血素水平、小鼠碳廓清能力、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力及自然杀伤细胞活力等指标。结果表明,仿刺参卵和体壁1～10 kDa多肽（EP1和BWP1）在500 μg/mL时均对SLP具有显著的促进作用,其粗蛋白含量分别为64.74、70.25 g/100 g,氨基酸总量分别为45.69、63.26 g/100 g,分子质量分别分布在130～1 600 Da及130～2 500 Da之间。经口服灌胃给予小鼠不同剂量的多肽30 d,EP1可提高小鼠的细胞免疫功能和单核-巨噬细胞吞噬功能,BWP1可提高小鼠的体液免疫功能和单核-巨噬细胞吞噬功能。结果提示EP1和BWP1均具有增强免疫力的功能,可开发为新的免疫调节产品。