筛选自泡菜的发酵乳杆菌细菌素纯化及抑菌特性分析

从中国传统发酵蔬菜中筛选鉴定对食源性致病菌有广谱抗性的细菌素（命名为BLF52）产生菌株并对细菌素分离纯化和抑菌特性分析。分子筛凝胶过滤层析和半制备高效液相色谱（RP-HPLC）纯化细菌素并用Tricine-SDS-PAGE法测定其分子量。筛选得到产细菌素的发酵乳杆菌（Lactobacilus fermentum） CH-16。MRS培养基中34℃发酵至稳定期前期即24~30 h对S.aureus抑制活性最大（875 AU/mL）。BLF52纯化至单一组分,分子量5.6 kDa,40~80℃（30 min）、pH2.0~7.0（2 h）有良好稳定性。胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K处理后,抑菌活性完全丧失,α-淀粉酶对其无影响,表明BLF52有典型的细菌素特性。BLF52对食源性腐败菌和致病菌如单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌和副溶血性弧菌均有抑制活性,通过杀菌模式抑制培养中的S.aureus生长。细菌素BLF52有潜力开发为适合酸性或中性食品使用的食品防腐剂。     

高产细菌素植物乳杆菌的诱变选育研究

为获得细菌素高产菌株,以植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）JLA-9为出发菌株,对其进行亚硝基胍（NTG）诱变、常压室温等离子体（ARTP）诱变,以及基因组改组。结果表明,亚硝基胍诱变的最佳浓度为4 mg/m L,经筛选得到两株突变株N4-26、N4-27,其抑菌效价分别为2531.93、3057.32 IU/m L;常压室温等离子体诱变最佳时间为10 s,经筛选得到两株突变株ARTP10-37、ARTP10-61,其抑菌效价分别为2974.27、3261.62 IU/m L。将上述抑菌效价提高的菌株经四轮基因组改组后,得到一株突变株F4-2,其抑菌效价达到7374.76 IU/m L,相对于原始菌株提高了2.35倍,且遗传稳定性良好。研究表明理化诱变结合基因组改组的方式是快速获得理想菌株的有效方法。      

产细菌素乳酸菌的筛选与鉴定

利用溶钙圈法及牛津杯双层平板法,从欧洲萨拉米香肠、新疆奶酪、自发酵泡菜和韩式辣白菜中分离筛选产细菌素的乳酸菌,通过形态学、生理生化鉴定、16S rDNA将菌株鉴定到种,并对其细菌素基因进行克隆,确定细菌素种类。结果表明:从分离纯化到的206株乳酸菌中筛选出抑菌效果较好的菌株SA102、SA104、N105、N107、N108,在排除酸、过氧化氢等干扰因素后,菌株所产抑菌物质对蛋白酶敏感,初步判定起抑菌作用的是细菌素。16S r DNA结果表明这5株产细菌素的菌株2株为乳酸乳杆菌,3株为植物乳杆菌,通过设计引物对菌株细菌素基因进行PCR快速筛选,结果表明菌株N107、N108含有IIb类细菌素Plantaricin KJ基因编码序列,生理生化指标测试证实这些产细菌素菌株不产气、不产氨、不产硫化氢、不产粘、不产色素,具有较好的生物安全性。最后对发酵液中细菌素粗提物的酸碱稳定性和温度稳定性进行了初步探究,以期为将来细菌素的进一步实际应用提供一定的理论借鉴。      

抑制牛乳房炎嗜酸乳杆菌的筛选和抑菌物质的研究

牛乳房炎是造成重大经济损失的疾病之一,通过6株嗜酸乳杆菌对4株导致牛乳房炎的致病菌进行细菌素、H₂O₂等各种因素的抑菌实验,阐述了各个乳酸菌的抑菌能力以及影响其抑菌能力的主要抑菌物质,结果发现:6株乳酸菌普遍对金黄色葡萄球菌抑菌效果显著,其中嗜酸乳杆菌NCFM（H7）上清液对4株致病菌抑菌效果最好,KLDSAD3（H6）细菌素对无乳链球菌抑制效果最好,KLDSL6（H3）细菌素对乳房链球菌、大肠杆菌抑菌能力最强,且其H₂O₂对乳房链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌抑菌活性较强,KLDSAD2（H5）细菌素对金黄色葡萄球菌抑制效果最好,其中L6（H3）抑菌活性物质耐热能力较强,AD2（H5）抑菌活性物质热敏性很强,而且这些抑菌活性物质只有在酸性条件下才具有更强的抑菌活力。      

产细菌素弯曲乳杆菌的分离鉴定及细菌素特性初步研究

从西班牙传统色拉米香肠中分离到一株产细菌素菌株RX-6,其发酵液在排除有机酸、过氧化氢及菌体细胞干扰后,抑菌活性基本无变化;经硫酸铵盐析及透析处理后,抑菌活性明显增强;蛋白酶K处理后,抑菌活性消失,表明起抑菌作用的是蛋白类物质。通过菌体形态观察、生理生化特征实验、16SrRNA序列比对及系统发育分析,鉴定菌株RX-6为弯曲乳杆菌（Lactobacillus curvatus）。抑菌特性研究结果显示该菌株所产细菌素具有很好的热稳定性和酸碱耐受性,在121℃20min的高温处理后仍能保持一定活性,活性pH范围为3¹0;使用安全性高,胃蛋白酶和胰蛋白酶可将其完全分解,而酸性蛋白酶可将其部分分解;抑菌谱较广,对受试的7株李斯特菌（Listeria spp.）、3株金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aereu）、1株大肠杆菌（Escherichia coli）及1株假单胞菌（Pseudomonas spp.）等都有明显抑制作用,显示出作为天然食品生物防腐剂的巨大应用潜力。      

嗜酸乳杆菌zrx02的plnD基因克隆及生物信息学分析

目的:对zrx02嗜酸乳杆菌细菌素编码基因进行克隆与序列分析。方法:对分离出的菌株进行16S rRNA鉴定,并根据已报道的plnD编码产物基因设计引物,以该菌基因组DNA为模板进行PCR扩增和测序,利用Pro Param tool,TMHMM等在线软件对编码蛋白进行生物信息学分析。结果:该菌为嗜酸乳杆菌,命名为嗜酸乳杆菌zrx02,该菌含有plnD基因,通过与Gen Bank中相关的抗菌素基因进行比对,发现其基因序列与Gen Bank库中的Lactobacillus plantarum strain（WP 016526896.1）plnD gene的同源性达到100%。生物信息学分析显示该基因全长355 bp,编码92个氨基酸,相对分子量10.54 ku,理论等电点9.26,该基因编码蛋白是稳定蛋白,不具有明显的跨膜结构,二级结构主要有α-螺旋、无规则卷曲和延伸链组成,三级结构结果显示plnD蛋白模型与Streptococcus pneumoniae中的ComE同源性最高。结论:对嗜酸乳杆菌zrx02 plnD基因的克隆与分析,为进一步探究细菌素的形成机制奠定理论基础。      

乳酸菌类细菌素的研究进展

对乳酸菌进行了简要分类，然后按乳酸菌产生的细菌素的结构组成特点进行了分类，对不同类型的乳酸菌细菌素的组成特点和功能特点进行了简要介绍。此外，对其合成过程及其产生抗菌活性的可能机理进行了描述，在此基础上，对影响乳酸菌类细菌素抗菌作用效果的外界因素和内部环境条件进行了详细分析。最后，论述了目前乳酸菌类细菌素在食品中的应用现状，对其在食品行业中的应用前景进行了探讨和预测。     

In vitro antimicrobial effect and in vivo preventive and therapeutic effects of partially purified lantibiotic lacticin NK34 against infection by Staphylococcus species isolated from bovine mastitis

Lantibiotics are small (<5 kDa), polycyclic peptides produced by gram-positive bacteria; they are also known as gram-positive bacteriocins. The high antimicrobial activity of lacticins and the continuing appearance of antibiotic-resistant bacteria in recent years have resulted in a renewed interest in lantibiotics. A partially purified form of lacticin NK34 (a Lactococcus lactis product isolated from the Korean fermented fish jeotgal) was tested to determine its antimicrobial effects against Staphylococcus aureus (n = 20) and coagulase-negative Staphylococcus (CNS, n = 20) strains isolated from the raw milk of cows with subclinical bovine mastitis in the present study. The spot-on-lawn assay was used to identify the 2 strains from each group with the greatest lacticin NK34 susceptibility, and the minimal lethal dose (MLD) was measured in ICR (imprinting control region) mice. The preventive and therapeutic effects of lacticin NK34 on the mouse infection model were determined for the first time. Lacticin NK34 demonstrated antimicrobial effects in 14 of 20 (70%) S. aureus indicator strains and in 18 of 20 (90%) CNS strains. Staphylococcus aureus 69 and S. simulans 55 demonstrated the greatest susceptibility to lacticin NK34 in the spot-on-lawn assay. The S. aureus 69 MLD was measured at 1.53 × 10⁹ cfu/mouse, whereas the S. simulans 55 MLD was 3.59 × 10⁹ cfu/mouse. Mice infected experimentally with S. aureus 69 MLD or S. simulans 55 MLD were treated with lacticin NK34. Treated mice demonstrated an 80% survival rate (48 of 60 mice) compared with a survival rate of 7.5% (3 of 40 mice) in control mice treated with distilled water. These data suggest that lacticin NK34 might be useful in the control of bovine mastitis and systemic bacterial infection.     

微生物共培养对植物乳杆菌RX-8合成细菌素的诱导作用

目的:植物乳杆菌RX-8分离自中国传统泡菜,可代谢合成Ⅱb类细菌素plantaricin EF.该细菌素抑菌谱广,加工应用特性良好,有作为天然食品生物防腐剂的巨大潜力,然而,其合成水平较低,工业化生产及应用严重受限.本研究探讨外源微生物共培养作为环境刺激因子,诱导菌株RX-8高效合成plantaricin EF的可行性...     

乳酸菌细菌素分类与作用机制

乳酸菌细菌素作为天然的食品防腐剂,可抑制或杀灭食品中致病微生物和腐败微生物从而保护食品的安全。文中介绍了乳酸菌细菌素传统分类方法和新提出的分类方法,并且综述了乳酸菌细菌素的作用机制。