双歧杆菌细菌素Bifidocin A对金黄色葡萄球菌的抑菌作用及其机制

Bifidocin A是由Bifidobacterium animalis BB04代谢合成的一种新型广谱高效细菌素。以革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌为测试敏感菌,分析细菌素Bifidocin A的最低抑菌浓度及不同质量浓度下的抑菌效果,并从敏感菌细胞形态与结构、细胞膜的通透性、细胞膜的完整性以及细胞膜质子移动势的变化4个角度分别探讨该细菌素的抑菌作用机制。结果表明,细菌素Bifidocin A对金黄色葡萄球菌CVCC 26112的最低抑菌浓度为0.058μg/m L,抑菌活性较强且存在浓度依赖性;并初步推测其抑菌作用机制是通过耗散细胞膜质子移动势,增加细胞膜通透性,形成孔洞,进而破坏细胞膜完整性,并最终瓦解细胞。     

植物乳杆菌P158产细菌素培养基及培养条件的优化

为提高乳酸菌细菌素产量,以藤黄微球菌、铜绿假单胞杆菌为指示菌,通过单因素和正交试验优化植物乳杆菌P158产细菌素的培养基和培养条件。结果表明,5种乳酸菌培养基中MRS培养基为该菌株产细菌素的适宜培养基;最佳培养条件为种子液接种量3%(V/V)、培养基初始pH 6.0、34℃静置培养42 h;最佳培养基配方为葡萄糖添加量2 g/100 mL、酵母浸膏添加量2 g/100 mL、大豆蛋白胨添加量1.5 g/100 mL、MgSO_4添加量0.058 g/100 mL、MnSO_4添加量0.025 g/100 mL、FeSO_4添加量0.02 g/100 mL、Tween 80添加量0.08 g/100 mL、乙酸钠添加量0.5 g/100 mL、K_2HPO_4添加量0.2 g/100 mL。在此条件下,细菌素效价为1 145 IU/mL,较优化前(362 IU/mL)提高了216%     

发酵条件对短乳杆菌P-347生长和产细菌素的影响

采用单因素法,以MRS培养基为基础培养基,对短乳杆菌P-347产细菌素的适宜碳源和氮源的种类、氮源的浓度、起始pH和培养温度进行了初步探索。以金黄色葡萄球菌AS1.72为指示菌,采用牛津杯定量扩散法检测发酵上清液的抑菌活性。结果表明,短乳杆菌P-347以葡萄糖为碳源,以大豆蛋白胨为氮源,在起始pH 5.0、37℃培养24h,可获得最大菌体密度;以2%葡萄糖为碳源,以1%酪蛋白胨为氮源,在起始pH 6.5、30~37℃培养24h,发酵上清液的抑菌活性最大,抑菌圈直径为32.5mm。     

L.LactisKLDS4.0325细菌素理化性质的研究

该研究以分离自新疆牧民家庭自制酸马奶中的乳酸乳球菌KLDS4.0325为研究对象,以双层平板法为检测方法,以抑菌圈直径为检测指标,以大肠杆菌为指示菌,对该菌株所产细菌素进行提取、纯化及理化特性分析,首先无细胞发酵上清液通过60%饱和度硫酸铵溶液盐析得到细菌素粗提液,然后细菌素粗提液通过SP Sepharose Fast Flow阳离子交换层析法得到纯化的细菌素样品,其比活力可达51.02 IU/mg,较优化前提高了约18倍,并通过tricine-SDS-PAGE蛋白电泳测定分子量约为3.4 ku;最后,对细菌素样品的生物学特性进行研究,通过温度、pH和各种酶的敏感性试验得出,细菌素样品热稳定性强,在pH 2~10的范围抑菌圈直径变化不大,有较高的稳定性,经蛋白酶处理后,抑菌活性消失,但经淀粉酶处理后仍能保持较高的稳定性,这也说明该细菌素是蛋白类物质。     

乳酸片球菌素PA-1在大肠杆菌中的表达与纯化

为了实现该细菌素的外源表达,本实验首先利用聚合酶链式反应从乳酸片球菌PAF中扩增出乳酸片球菌素PA-1的结构和免疫基因,然后克隆到表达载体pGEX-6p-1,构建了N端含有GST-His-DDDDK标签的重组质粒pGEX/his-pedAB,然后转化进入大肠杆菌Rosetta（DE3）感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷诱导,重组乳酸片球菌素PA-1在大肠杆菌胞内成功表达。表达的融合蛋白先经过镍亲合层析柱纯化,然后注入谷胱甘肽S-转移酶亲和色谱柱用肠激酶处理,释放出成熟的乳酸片球菌素PA-1。利用高效液相色谱和质谱技术检测乳酸片球菌素PA-1纯度。以单核细胞增生李斯特氏菌CMCC54004为指示菌,利用琼脂扩散法检验乳酸片球菌素PA-1活性。结果表明,携带GST-His-DDDDK标签的融合蛋白无活性,标签切除后其抑菌活性恢复,且其纯度达90%以上。     

肠球菌素的分离提取及其在牛乳杀菌中的应用

从发酵奶酪制品中分离出1 株耐久肠球菌（Enterococcus durans）41D,其培养过程中产生能抑制李斯特菌生长的肠球菌素。本实验通过pH值吸附法将该肠球菌素分离提纯,产率约为45.7%。并进一步研究发现,当在牛乳中添加终浓度为256 AU/mL的肠球菌素时,不同的处理方式（高温杀菌,巴氏杀菌）不影响实验期间（15 d）肠球菌素抑菌活性的发挥。该肠球菌素在牛乳中应用时能够有效抑制单增李斯特菌的生长并对牛乳有较好的保存效果。     

传统发酵牦牛酸乳中细菌素产生菌的筛选与鉴定

从西藏羊八井地区、云南香格里拉的传统牦牛酸乳中分离出26株乳酸菌,以枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及酿酒酵母为指示菌。采用牛津杯双层琼脂扩散法检测菌株的抑菌谱大小,并经过有机酸排除、过氧化氢排除、蛋白酶水解检测试验,最终筛选得到5株产细菌素的菌株,编号分别为3、23、24、21和25。通过微生物形态学与16SrDNA序列同源性分析,鉴定这些菌株分别为干酪乳杆菌、植物乳杆菌和乳酸乳球菌乳球亚种。抑菌谱试验表明,这些细菌素能够抑制部分食源性革兰氏阳性菌和阴性致病菌,对真菌无抑菌活性。     

屎肠球菌B13产乳酸菌素的发酵条件优化

为提高屎肠球菌B13乳酸菌素的产量,以接种量、培养基初始pH值和发酵温度为考察因素,在单因素试验的基础上,利用Box-Behnken中心组和试验设计原理进行三因素三水平的响应面优化分析,优化后的最佳培养条件为:接种量4.4%、培养基初始pH 5.3、发酵温度33℃。在此条件下,乳酸菌素的抑菌效价达5.32×10^8 IU/mL,比优化前提高1.44倍,为屎肠球菌B13乳酸菌素的开发利用提供参考依据。     

乳酸菌细菌素应用于肉制品防腐剂的研究进展

乳酸菌现已被广泛应用于饲料、医疗、生物防治、食品和发酵工业中,其所产细菌素由于具有一定的抑菌作用且无毒副残留,因而逐渐受到人们的重视,并被利用来开发天然的生物防腐剂.概述了细菌素的分类、抑菌作用机制以及近年来国内外报道的有关乳酸菌细菌素在肉制品防腐中的作用的研究进展.     

凝结芽孢杆菌抑菌物质的理化特性研究

以益生菌凝结芽孢杆菌Bacillus coagulans LL1103为对象,研究了其生长情况与p H值和抑菌活性的关系,发现其最佳抑菌发酵时间为18 h。制备了其抑菌产物粗品并测定其抑菌谱,结果表明,抑菌产物对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有明显的抑菌效果,具有广谱抗菌性。随后对抑菌产物粗品的理化性质进行了研究,发现它在MRS培养基中培养后,最适温度37℃,最适p H=6.0下具有最强的抑菌活性。此外,进行了抑菌物质的初步鉴定,在排除酸性末端产物和菌体的干扰后,用蛋白酶K等多种蛋白酶和过氧化氢酶去处理抑菌产物粗品,发现其对蛋白酶K、胰蛋白酶、胃蛋白酶较敏感,对氧化氢酶不敏感,初步推断抑菌物质的主要成分是对蛋白酶敏感的细菌素类物质。