重组人成骨蛋白-1基因在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达

目的　研究重组人成骨蛋白 -1(rhOP -1)在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达。方法　利用RT -PCR技术 ,从正常胎儿肾组织总cDNA中扩增得到rhOP- 1成熟肽基因片段 ,再将rhOP- 1成熟肽基因克隆于原核融合表达载体pGEX- 4T- 2中 ,构建表达质粒pCCBC- OP- 1,并转化到大肠杆菌JM10 9(DE3)中 ,在发酵过程中不添加任何诱导剂。表达产物经SDS -PAGE分析。结果　扩增的目的基因序列与文献报道一致。表达的目的蛋白相对分子质量为 14 0 0 0 ,表达量达到菌体蛋白的 4 0 %。结论　克隆了人OP -1成熟肽基因 ,并实现了rhOP- 1的非诱导高效表达。     

微小隐孢子虫CP15/60基因在Hela细胞中的表达

目的 构建隐孢子虫CP15/60真核表达载体pcDNA3.1-15/60,观察其在Hela细胞中的表达。方法用Xho I和EcoR　I从pMD18-T-15/60中酶切得到CP 15/60基因,将其插入真核表达载体pCR3.1（+）的 XhoI和EcoRI位点,构建CP15/60真核表达载体pcDNA3.1-15/60,用脂质体介导法将其转染Hela细胞,并用G418加压筛选,用RT-PCR方法检测外源CP15/60基因的转录,ELISA法和间接免疫荧光法检测其活性。结果 酶切鉴定表明已成功构建了重组真核表达载体pcDNA3.1-15/60,外源CP15/60基因能在转染细胞中有效转录,经检测表达产物具有良好的生物活性。结论 已成功地构建了pcDNA3.1-15/60真核表达载体,并在Hela细胞中具有良好的表达。     

Destabilizing interactions between the partners of a bifunctional fusion protein

Hybrid MalE–GVP is a bifunctional protein in vitro sinceit binds maltose as protein MalE of Escherichia coli and sinceit is dimeric and specifically binds single-stranded DNA asprotein GVP of phage M13. The oxidation rate of a unique cysteineresidue was used to compare the stabilities of GVP in its freeand hybrid forms, under conditions where MalE was either foldedor unfolded by a denaturing agent. The results showed that boththe covalent link and tertiary non-covalent interactions betweenMalE and GVP destabilized GVP in MalE–GVP. To test whetherGVP had identical structures in its free and hybrid forms, mutationswere used as local conformational probes. The effects of thesemutations on the capabilities of MalE–GVP to dimerizeand to bind single-stranded DNA were assayed in vitro. Theywere compatible with the effects of the same mutations on theglobal activity of free GVP in vivo and with the effects thatcould be predicted from the known data on free GVP, in particularits crystal structure. Thus, one partner of a hybrid proteincan be destabilized by the other partner while maintaining itsstructural and functional characteristics.     

采用基因表达式编程的沟灌入渗模型参数估计方法

入渗参数的准确估计是沟灌系统设计优化的关键问题。本文基于基因表达式编程(GEP)算法,通过数值试验获得了沟灌入渗模型参数γ估计GEP算法所需的有效数据集合,进行了参数γ的敏感性分析,确定了模型参数γ估计GEP算法的输入因子及其最优组合,建立了γ与最优组合因子的定量关系,进而提出了γ的估计方法。研究结果表明,γ对积水深度、初始有效含水率和沟深度最敏感;土壤水力特性参数对γ影响较大,模型参数γ估计GEP算法的最优输入因子组合为积水深度、沟深、初始有效含水率、饱和导水率和进气值参数;变积水深度条件下γ的估计值与定积水深度的γ值相近;在变积水深度条件下,与利用HYDRUS-2D模型计算得到的"精确"入渗量相比,应用基于γ估计值的沟灌入渗模型计算的累积入渗量误差小于5%,满足计算精度要求。入渗过程中边界效应对总入渗量的贡献逐渐增大,与细质土壤相比,粗质土壤中边界效应对总入渗量的贡献更大,本研究条件下黏壤土中边界效应最终贡献约为25%,砂土中约为37%。研究表明GEP算法可作为沟灌入渗模型参数γ估计的一种有效方法。     

A method for construction of long randomized open reading frames and polypeptides

A method is presented for construction of randomized open readingframe sequences (ORFs) and gene libraries containing them. Thebuilding blocks for the ORFs were 75 bp long DNA fragments generatedby cloning sequences from a single synthetic oligonucleotidepreparation by bridge mutagenesis. The fragments had the propertythat, regardless of their orientation in the ligated product,the ORF of the construct was maintained. The heterogeneity ofthe ORFs resulted from the random ligation of 2000 differentDNA fragments. The randomized ORFs were cloned downstream fromthe lac promoter in a multicopy plasmid in Escherichia coli.To test the method, a library of 10⁶ clones was constructed.     

马立克病病毒中meq基因对CEF细胞chTERT mRNA转录水平的影响

目的研究鸡马立克病病毒(MDV)meq基因对鸡胚成纤维细胞(CEF)的端粒酶催化亚单位基因(chTERT) mRNA转录水平的影响,并探讨meq基因与端粒酶活性的关系。方法构建重组载体pcDNA-meq,转染CEF细胞,利用Taq- Man探针,经实时荧光定量RT-PCR检测meq基因对CEF细胞chTERT mRNA转录水平的影响,并用TRAP法测定端粒酶活性。结果meq基因能激活CEF细胞中chTERT mRNA的转录,在48h的转录水平是72h的16倍,端粒酶活性在转染后48h是转染后72h的12倍。结论meq基因可能是MDV基因组中的主要致瘤基因,可以在体外导入正常的CEF细胞中,激活端粒酶的活性。     

明清家具雕刻与传统绘画造型相似性研究

中国传统雕塑和传统绘画都是历史上最具有魅力的两种艺术形式,也是素材和品种最为繁多的艺术,两者有很多方面是相融相通的,其中又以木雕,尤其是明清家具木雕与绘画最为相似。文章将通过对明清家具和传统绘画的客观比较,得出两者在造型方面的相似之处,这种互通性对当今新中式家具及发展当代家具雕刻有着积极的现实意义。     

基于.Net架构的科研管理系统

该文对高校科研管理工作进行了详细分析,结合高职院科研工作的特点,设计并开发了基于C/S和B/S混合模式的科研管理信息系统,该系统从某高职院科研管理工作的业务流程和教职工的实际需要出发,设计了相应的功能模块和操作流程,应用了正则表达式技术直接从“知网”提取教职工论文发表信息,节省了数据录入时间. 该系统投入运行近两年,使用结果表明,该科研管理系统使科研管理工作更加规范,工作效率大大提高.     

人工免疫优化的汽车散热器功能设计

应用公理设计原理设计车用散热器时,耦合功能的存在是一个普遍问题。国内外学者提出使用人工免疫方法求解耦合功能集。针对这些算法在度量抗体优异性时存在的不足,提出了新的度量指标：耦合功能集聚度,并给出相应公式,同时在抗体生成算法中引入基因优选的方法。经在银轮股份进行车用机油散热器设计仿真实验,表明新的算法具有较高的效率。     

基于优化支持向量机的人脸表情分类

分析了支持向量机（support vector machine, SVM）目前主要存在的问题和参数选择对分类性能的影响后, 提出了以改进粒子群算法优化SVM关键参数的优化SVM算法。将加入拥挤度因子的微粒群算法引入到SVM中, 在不牺牲泛化性能的前提下, 对其参数进行优化, 增加了SVM初始化参数的多样性, 减慢了局部搜索, 促进其在全局范围内的寻优搜索, 以有效克服SVM算法过分依赖初始值和容易陷入局部极小值的缺点, 并利用由粗到精的策略构造多层SVM人脸表情分类器, 在提高准确率的基础上加快分类的速度。实验证明, 新算法具有速度快、准确率高的优点。