小麦球蛋白单克隆和多克隆抗体制备及建立酶联免疫吸附法快速检测技术

目的建立小麦球蛋白的ELISA检测技术,用于蛋白质掺假以及过敏原成分的快速检测。方法从麦胚粉中提取球蛋白,抗原免疫Balb/c小鼠进行4次免疫后,通过脾脏细胞杂交瘤技术及间接ELISA筛选制备单克隆抗体,同时制备兔抗小麦球蛋白的多克隆抗体。通过棋盘滴定法,初步确定单克隆抗体和多克隆抗体的最佳工作浓度,建立双抗夹心ELISA。结果通过免疫和杂交瘤技术获得了抗小麦球蛋白的单克隆抗体,纯化后抗体的效价均达到1:107,通过免疫兔制备的多克隆抗体经纯化后效价在1:2.4×105左右,所建立的双抗体夹心ELISA方法最低检测限为10 ng/m L,与其他物种的蛋白不发生交叉反应。结论本文建立的双抗体夹心ELISA方法具有良好的特异性和灵敏度,为建立乳品中小麦成分掺假及过敏原成分快速检测提供理论依据。     

不同比例球蛋白组成对大豆蛋白溶液乳化性与界面特性的影响

本文研究大豆蛋白组成(不同配比7S和11S蛋白)对水包油型乳液乳化和界面吸附特性的作用规律。结果表明:自提7S和11S球蛋白基本处于天然未变性状态;随着大豆蛋白中11S含量的增加,乳液整体粒径分布增大,乳液乳化活性指数、ζ电位绝对值、油水界面蛋白浓度及含量均逐渐减少,乳滴絮凝和合并指数显著上升,乳液整体乳化活性及稳定性也随之降低;由乳化特性数据可知7S球蛋白对大豆蛋白整体乳化性能贡献大于11S;界面蛋白电泳结果表明所有亚基均可吸附至界面,且吸附的两类蛋白各亚基含量变化与各样品蛋白所占比重基本一致;乳液微结构随着11S球蛋白含量提升由清晰球状转变为无规则絮凝聚集态;整体上本实验所提大豆11S球蛋白在油水界面扩散、展开和重排速率高于7S球蛋白,不同11S含量的大豆蛋白界面重排速率均高于吸附展开速率,通过调整大豆蛋白组成可一定程度上调控蛋白在乳液界面吸附行为。     

等电点冷沉法分离大豆11S的研究

研究等电点冷沉法提取与分离低温脱脂大豆粕中11S的方法,优化11S冷沉条件,并利用SDS-PAGE凝胶电泳来评定不同条件下分离大豆11S的纯度。通过试验确定的最佳工艺条件是:pH 6.2、冷沉时间10 h、加酸搅拌速度30r/min。11S纯度达76.14%,得率40.8%。     

热处理大豆球蛋白的体外消化稳定性

为了有效评估大豆球蛋白抗原性变化,对热处理后的大豆球蛋白进行体外模拟消化实验,考察其体外消化稳定性。首先采用碱溶酸沉法从脱脂大豆粉中提取大豆球蛋白,然后将其经400 MPa超高静压处理15 min后进行加热(70、90、110、130℃)处理20 min,然后进行体外模拟消化实验,采用SDS-PAGE、邻苯二甲醛(OPA)法和间接竞争酶联免疫(ELISA)法研究消化过程中大豆球蛋白的蛋白质分子质量、水解度和抗原性的变化。结果表明:经体外模拟消化实验后,与未处理样品相比,不同温度热处理后大豆球蛋白的蛋白质条带逐渐变浅,生成更多的小分子蛋白;在胃消化过程中,未处理和热处理大豆球蛋白的水解度逐渐增强,在肠消化过程中,经过90、110、130℃热处理的大豆球蛋白水解度总体先增加后降低;与未处理的大豆球蛋白相比,热处理大豆球蛋白经过胃肠消化后抗原抑制率显著下降,最低可从87%降至4%。大豆球蛋白经过热处理,通过胃肠消化后可显著降低其抗原性。     

Changes in structural and functional properties of globulin–polyphenol complexes in mung beans: exploration under different interaction ratios and heat treatment conditions

In this study, mung bean was used as raw material to reveal the interaction mechanism between mung bean protein and polyphenols in the water solution system of heat treatment and to speculate the binding form of the two. Structural and functional changes of globulin–polyphenol complexes in mung bean under different interaction ratios and heat treatment conditions (70, 85 and 100 °C) were analysed using 2D and 3D fluorescence, Fourier transform infrared spectroscopy, particle size and ζ potential. The results showed that mung bean globulin–polyphenol binding was a static quenching mechanism, with mainly hydrophobic interactions. Heat treatment had little effect on binding sites and may induce partial covalent binding. Antioxidant activity of the interaction improved; however, heat treatment reduced the antioxidant capacity of the complexes. Before and after heat treatment, globulin–polyphenol complexes had poor solubility, but its emulsification and foaming ability are significantly improved. Polyphenol addition improved mung bean globulin secondary structure, and the thermal stability of the complex was greater than that of mung bean globulin. This study provides a theoretical reference for clarifying the binding mechanism of mung bean protein and polyphenols, which is significant for mung bean food processing and production.     

Thanh法提取7S、11S球蛋白功能特性的研究

以中豆36为原料,分别提取大豆分离蛋白(SPI)、7S、11S球蛋白,系统地比较了它们的功能性质的差异。结果表明:SPI、7S及11S的功能特性之间存在较大差异,11S球蛋白具有较强的凝胶性、吸油性和溶解度;7S球蛋白具有较高的持水性和乳化性。     

单孔孔板水力空化对大豆球蛋白理化性质的影响

本研究利用单孔孔板水力空化处理大豆球蛋白,通过比较处理前后大豆球蛋白的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）图、粒径分布、Zeta电位、内源荧光光谱、表面疏水性及巯基含量等的变化,研究单孔孔板水力空化对大豆球蛋白理化性质的影响。结果表明：经单孔孔板水力空化处理30 min后,大豆球蛋白的分子质量分布未发生改变,平均粒径从（335.67±3.43）nm减小至（234.73±4.32）nm,Zeta电位绝对值从（24.47±0.51）mV增加至（31.30±2.74）mV,内源荧光光谱最大吸收峰红移,表面疏水性从1 970.67±35.00增加至2 373.67±75.57,暴露巯基含量从（5.11±0.35）μmol/g降低至（3.76±0.16）μmol/g,总巯基含量从（7.31±0.27）μmol/g降低至（5.35±0.28）μmol/g。由此可见,单孔孔板水力空化可改变大豆球蛋白的高级结构,从而使其理化性质发生变化。该研究可为水力空化技术应用于蛋白质的改性提供一定的理论依据。     

酶标记羊抗兔间接法检测烟草马铃薯Y病毒的研究

本文是对辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG间接法检测浸染烟草的马铃薯Y病毒(PVY)的报导。试验证明该方法检测烟草植株内的PVY具有特异性,健株对照及非PVY病毒均为阴性,检测烟草植株汁液的稀释度可达1/1000,在我们的测试条件下,第一抗血清浓度1/2000,测试抗血清(酶标记羊抗兔)浓度1/140为好。      

抗人淋巴细胞球蛋白制剂的质量比较

抗人淋巴细胞球蛋白(ATG/ALG)是一种有效的免疫抑制剂。目前对ATG制剂的活性及质量体外检测方法均以细胞毒和花环抑制试验为主。本文用上述方法检定了兔抗人淋巴细胞球蛋白(R-ATG)和马抗人淋巴细胞球蛋白(E-ATG)。结果表明:两种制剂的细胞毒滴度和花环抑制试验基本相同。应用~3H—胸腺嘧啶渗入试验研究ATG对PBMC促有丝分裂活性,结果表明:R-ATG的活性高于E-ATG。ATG体外促有丝分裂活性可作为预测ATG临床疗效的一个参数。