坛紫菜单性组织培养的性逆转研究

为了进一步研究坛紫菜的单性组织发育特征并验证其可能存在的单性生殖途径,本文对坛紫菜雌、雄营养细胞、组织发育过程中两性生殖组织的形成和繁殖特征以及两种单性遗传来源的子代叶状体的性别发育特征进行观察研究．结果表明,单性营养细胞和组织能够通过性逆转产生两性生殖组织并形成丝状体,该繁殖方式不属于单性生殖．单性遗传来源的子代叶状体群体由于性逆转产生了雌性、雄性以及雌雄同体三种性别表现．这种性逆转现象在紫菜属植物中尚未见报道．坛紫菜性逆转现象的发现为育种过程中丝状体纯系的分离以及性别发生机制的研究提供了新的理论借鉴．     

酶法降解坛紫菜多糖及其产物分析

以单因素试验为基础,通过正交试验确定了坛紫菜多糖的最佳酶解工艺条件为：酶解温度40 ℃、pH?6.0、酶解时间3 h。在此条件下,坛紫菜多糖酶解后的还原糖质量浓度为（1.42±0.12）mg/mL。利用液相色谱和质谱技术对酶解产物进行了组分分析和抗氧化活性检测。结果表明：酶解产物S1和S2均以半乳糖为主,半乳糖在两样品中分别占93.0%、90.5%,S1和S2的单糖组成相差不大。S1和S2都具有抗氧化活性,尤其对·OH的清除作用明显,且抗氧化活性大小S1＞S2。聚合度在10～16内的偶数糖比聚合度为4～6的坛紫菜寡糖清除·OH和O2 － ·的能力好,说明酶解产物的抗氧化活性与其聚合度有关,只有处于特定聚合度范围内才具有明显的抗氧化活性。     

坛紫菜不同溶剂组分的抗氧化活性

为研究坛紫菜酚类化合物的抗氧化活性,通过提取和萃取得到坛紫菜4 种溶剂组分：石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水溶性组分,对其DPPH 自由基清除率和还原力大小进行比较,并研究其中多酚和黄酮类化合物的分布。结果表明：4 种溶剂组分在0.2～1.5g/L 质量浓度范围内与抗氧化活性均存在显著剂量效应关系,其DPPH 自由基清除率和还原力大小均为：乙酸乙酯＞正丁醇＞石油醚＞水溶性组分。在质量浓度为1.5g/L 时,乙酸乙酯组分的还原力吸光度为1.97,大于80% 茶多酚(1.90),接近于BHT(2.00)。对多酚类化合物和黄酮类化合物而言,同样是在乙酸乙酯组分中分布最多(分别为69.84mg GAE/g md 和299.49mg RE/g md),在水溶性组分中最少(分别为11.1mgGAE/g md 和32.36mg RE/g md),因此酚类化合物主要分布在中等极性溶剂中,而不是强极性溶剂中。研究还发现,1g/L 坛紫菜4 种溶剂组分的多酚类化合物含量与DPPH自由基清除率、还原力间的相关系数为：r =0.9311 和r=0.7530,而黄酮类化合物含量与DPPH 自由基清除率、还原力间的相关系数为r=0.8899 和r=0.7211,可见坛紫菜多酚类化合物为其抗氧化的主要活性成分。     

采用UPLC-Q-TOF MS技术分析坛紫菜中脂质成分

采用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF MS)联用技术快速鉴定坛紫菜中脂质成分。以乙腈、甲醇、异丙醇和水作为梯度洗脱剂,Waters Acquity UPLCTM BEH C8色谱柱为固定相,快速分离坛紫菜中的脂质成分;同时,结合脂质成分的高分辨质谱裂解规律,鉴定了脂质结构,并确定了脂质的酰基位置和脂肪链长度及其不饱和度。结果表明,坛紫菜中脂质成分大致分为糖脂、磷脂和甘油三酯,其中糖脂类包括5种,分别为DGDG、Lyso-DGDG、MGDG、SQDG和Lyso-SQDG;磷脂类包括3种,分别为PG、Lyso-PG和Lyso-PC。该方法在鉴定坛紫菜的脂质成分种类和定性分析脂质成分方面具有很好的应用价值。     

体外消化和结肠发酵对不同采收期坛紫菜中酚类物质生物可及性和肠道菌群的影响

为科学评价不同采收期坛紫菜及其酚类物质的健康益处,本研究主要探究不同采收期（早期、中期、末期）的煮制坛紫菜经体外口腔、胃和小肠3 个阶段消化后,其酚类物质的生物可及性和抗氧化活性,以及经体外结肠发酵后对肠道菌群的调节作用。结果表明,经体外消化后,坛紫菜中总酚具有极高的生物可及性,约为104.80%～117.03%,总黄酮的生物可及性约为35.21%～59.60%。早期坛紫菜中酚类物质含量和消化后释放量均高于中期和末期坛紫菜。坛紫菜经体外结肠发酵后可促进肠道菌群产生丙酸和正丁酸,并有效抑制异丁酸和异戊酸的生成。通过16S rRNA测序可以看出坛紫菜的添加促进了Bacteroidetes、Megamonas和Lactobacillus等有益菌的生长。综上所述,坛紫菜是较好的酚类物质来源,经胃肠道消化后其酚类物质具有较高的生物可及性和抗氧化活性,且对肠道菌群有明显的调节作用。对于不同采收期的坛紫菜而言,头水坛紫菜对消费者而言似乎是更好的选择。     

乳杆菌发酵提高坛紫菜的抗氧化和抑制糖脂代谢关键酶活性

目的：研究乳杆菌发酵对坛紫菜发酵上清液营养成分及其抗氧化和抑制糖脂代谢关键酶活性的影响。方法：采用福林-酚法和亚硝酸钠-硝酸铝法分析乳杆菌发酵坛紫菜上清液中总酚和总黄酮含量;基于1H核磁共振代谢组学技术分析发酵上清液中的主要代谢产物;通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基、羟自由基清除能力实验和α-葡萄糖苷酶及胰脂肪酶活力分析实验,评价发酵清液的抗氧化活性和抑制α-葡萄糖苷酶及胰脂肪酶的活性。结果：乳杆菌发酵可有效提高坛紫菜发酵上清液中总酚和总黄酮的含量,促进乳酸、精氨酸、脯氨酸等代谢产物的释放。乳杆菌发酵增强坛紫菜上清液的抗氧化活性,其中乳杆菌发酵对羟自由基的清除效果最为显著,相当于700 μg/mL VC对羟自由基的清除能力。此外,乳杆菌发酵坛紫菜上清液对α-葡萄糖苷酶的抑制活性较未发酵坛紫菜上清液提高了2.1～2.2 倍,对胰脂肪酶的抑制活性最高可达（95.3±1.3）%,相比于未发酵坛紫菜上清液提高了95.7%;上清液中总酚和总黄酮的增加是其抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶及胰脂肪酶抑制活性增强的主要原因。结论：乳杆菌发酵可提高坛紫菜发酵上清液的抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶及胰脂肪酶抑制活性,具有减缓和辅助治疗糖尿病、肥胖等慢性疾病的潜在功效。     

坛紫菜别藻蓝蛋白的纯化及多克隆抗体的制备

通过液氮研磨、超声波破碎、硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sephadex-A-50柱层析等手段,建立了从坛紫菜叶状体体细胞中快速高效纯化别藻蓝蛋白的技术,并以该蛋白为抗原,通过动物免疫,制备了抗别藻蓝蛋白的多克隆抗体.电泳及Western印迹杂交分析的结果表明,纯化的别藻蓝蛋白已达到电泳纯,A650/A280达到3.5,计算蛋白回收率为70.5%.制备的多克隆抗体特异性强,效价高达1∶100 000.本研究的结果为进一步研究别藻蓝蛋白的功能和进行开发提供了基础材料和有用的工具.