液体碱性脂肪酶稳定性的化学动力学研究

从多方面考察了碱性有肪酶超滤浓缩液的稳定性，推导出液体碱性脂肪酶失活动力学方程，得到了液体碱脂肪酶的失活级数为１．３６级。     

重组华根霉脂肪酶协同转谷氨酰胺酶提高冷冻面团抗冻发酵特性的研究

采用差示扫描量热仪和F3流变发酵仪研究重组华根霉脂肪酶(RCL)和转谷氨酰胺酶(TG)共同作用对冷冻面团抗冻发酵特性的影响。将面团于-18℃冻藏0、7、21、35d,结果发现:随着冻藏时间的延长,甘油含量有所降低,可冻结水含量增加;引入RCL和TG到冷冻面团中可以显著增加面团中的甘油含量,显著降低面团中可冻结水的含量,减少冰晶体的形成,并且可以提高酵母的存活数。F3流变发酵仪测定面团的发酵流变学特性,结果表明:RCL和TG同时作用可以显著降低冻藏对面团发酵高度的削弱作用,改善酵母的发酵性能和增加面团的持气率。     

Isolation and identification of lipase producing thermophilic Geobacillus sp. SBS-4S: cloning and characterization of the lipase

A thermophilic microorganism, SBS-4S, was isolated from a hot spring located in Gilgit, Northern Areas of Pakistan. It was found to be an aerobic, gram-positive, rod-shaped, thermophilic bacterium that grew on various sugars, carboxylic acids and hydrocarbons at temperatures between 45°C and 75°C. Complete 16S rRNA gene sequence of the microorganism exhibited homology to various species of genus Geobacillus. A highest homology of 99.8% was found with Geobacillus kaustophilus. A partial (0.7 kbp) chaperonin gene sequence also showed a highest homology of 99.4% to that of G. kaustophilus whereas biochemical characteristics of the microorganism were similar to Geobacillus uzenensis. Based on biochemical characterization, 16S rRNA and chaperonin gene sequences, we identified SBS-4S as a strain of genus Geobacillus. Strain SBS-4S produced several extracellular enzymes including amylase, protease and lipase. The lipase encoding gene was cloned, expressed in Escherichia coli and the gene product was characterized. The recombinant lipase was optimally active at 60°C with stability at wide pH range (6-12). The enzyme activity was enhanced remarkably in the presence of Ca(+2). The K(m) and the V(max) for the hydrolysis of p-nitrophenyl acetate were 3.8mM and 2273 μmol min(-1)mg(-1), respectively. The ability of the recombinant enzyme to be stable at a wide pH range makes it a potential candidate for use in industry.     

响应面法优化以纯棉浴巾为载体的脂肪酶固定化工艺

本文系统研究了以纯棉浴巾为载体的脂肪酶固定化条件,通过单因素实验确定了吸附剂聚乙烯亚胺(PEI)浓度及其pH、交联剂戊二醛(GA)浓度及其pH、交联时间和交联温度的优化范围,进而以PEI浓度、GA浓度和交联时间作为优化因素,通过三因素三水平响应面设计,得到固定化酶制备优化条件为:PEI浓度3.37 mg/mL、GA浓度...     

对苯醌活化法固定化脂肪酶的研究

研究了对苯醌活化法在纤维素滤纸膜载体上固定化猪胰脂肪酶的最佳条件。结果表明,当对苯醌浓度为０．０１ｇ／ｍｌ,活化６０ｍｉｎ,与浓度为０．００５ｇ／ｍｌ的酶的ｐＨ８．０的磷酸盐缓冲溶液于４℃交联２４ｈ,获得的固定化酶活最高,为０．４４Ｕ／ｃｍ＾２。固定化酶最适温度３５℃,最适ｐＨ９．０。     

矢车菊素-3-葡萄糖苷对骨骼肌细胞脂蛋白脂肪酶活性的影响

富含矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-g)的花色苷提取物可抑制肥胖,但其作用机制不明。骨骼肌细胞脂蛋白脂肪酶(LPL)活性与肥胖相关,LPL使骨骼肌中的β-脂肪酸氧化增强,从而加速清除体内循环的甘油三酯(TG),抑制TG流向脂肪组织积聚而导致肥胖。本实验建立稳定的骨骼肌细胞分离培养方法,通过花色苷Cy-3-g干预骨骼肌细胞,研究Cy-3-g对细胞LPL活性的影响及其作用机制。结果表明：Cy-3-g通过激活一磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)上调骨骼肌细胞LPL活性,提示Cy-3-g具有潜在的调节机体脂代谢作用,与含Cy-3-g的花色苷提取物的肥胖抑制作用密切相关。     

低温碱性脂肪酶产生菌的筛选及产酶培养基的优化

以橄榄油为唯一碳源,从渤海湾盐碱地被油污染的土样中分离筛选出1株产低温碱性脂肪酶菌株34-5,初步酶学性质研究表明,该菌所产脂肪酶的最适温度为25℃,最适pH为9．6,该菌的16S rDNA基因序列与伯克霍尔德氏菌（Burkholderia）的同源性为99％摇瓶实验表明,该菌株最适产酶培养基为（g／L）;淀粉10,黄豆饼粉20,玉米浆20,K2HPO4 1,聚乙烯醇大豆油乳化液20．其最高酶活为6．87U／mL。     

基于金纳米簇与纳米金的荧光内滤效应检测脂肪酶活性

目的 建立一种基于吐温80自氧化作用催化纳米金形成与荧光内滤机制,相对简单、快速、适用于蛋白浓度较高的游离酶的脂肪酶活性检测方法。方法 使用金纳米簇作为荧光基团,纳米金作为吸收剂,基于荧光内滤机制测定游离脂肪酶活力。设置对照试验对吐温80浓度、氯金酸浓度、温度、pH等反应条件进行优化,探索最适条件下脂肪酶水解反应时间及吐温80还原纳米金的时间并对反应体系进行抗干扰检测,验证该方法的可行性。结果 当脂肪酶酶活力在13.5～15092.0 U/L时,荧光强度的差值随脂肪酶活力的升高而增加,相关系数为0.9977,脂肪酶活力的检出限为2.34 U/L (信噪比为3)。结论 该方法操作相对简单、快速、检测范围较大、灵敏度高,具有实用性,可适用于蛋白浓度较高的游离酶的脂肪酶活力测定。     

酶催化合成高纯度甘油中碳酸单酯

研究了无溶剂体系中脂肪酶LRI催化合成甘油中碳酸单酯(MG)。得到适宜的反应条件为:反应温度57℃,n(酸)∶n(甘油)=1∶1 1,加酶量100U/g(酸),甘油初始含水量w(H2O)=12%,封闭物系反应4h转敞开物系反应6h。产物中甘油中碳酸单酯质量分数w(MG)=42 20%。将n(酸)∶n(甘油)降低至1∶9,反应时间缩短至4h,粗产物经脱甘油和脱酸处理,可获得高纯度甘油中碳酸单酯。纯化后产品中基本不含游离酸及甘油,其中甘油中碳酸单酯质量分数w(MG)=73 65%。过量加入的甘油全部可以回收利用,其平衡转化率降低不超过2%。     

分子动力学模拟与热稳定性实验相结合分析乙酰氨基葡萄糖与脂肪酶的相互作用机制

该研究采用分子动力学模拟方法研究南极假丝酵母脂肪酶B（CaLB）与乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）的相互作用,以及通过热稳定性实验论证GlcNAc对CaLB的保护效果。结果表明：在323.15 K下,CaLB与GlcNAc的静电势能与Lennard-Jones（L-J）在前20 ns模拟时间中显著下降,CaLB-250 mmol/L-GlcNAc模型在0~100 ns时,静电势能和L-J势能分别下降了3350 kJ/mol和2791 kJ/mol,二者间的氢键数从0增加到115左右,CaLB与GlcNAc的可及面积（SASA）接近于50 nm2。均方根偏差（RMSD）和均方根波动（RMSF）数据表明：游离酶（Free-CaLB）模型在323.15 K和353.15 K下的RMSD分别为0.2617 nm和0.3473 nm,而不同浓度CaLB-GlcNAc模型的RMSD均小于Free-CaLB的数值,且CaLB-GlcNAc组装体模型区域（Val 147-Leu 155）波动明显小于Free-CaLB模型,说明GlcNAc可以减弱Free-CaLB的韧性而有效维持脂肪酶的原始结构。热稳定性实验表明：Free-CaLB及CaLB-GlcNAc在60 ℃下处理2.0 h,Free-CaLB的残余酶活力仅为22.26%,而CaLB-GlcNAc的残余酶活力为52.11%。综上,乙酰氨基葡萄糖可以提高游离脂肪酶的热稳定性。