Performance evaluation of canine-associated Bacteroidales assays in a multi-laboratory comparison study

The contribution of fecal pollution from dogs in urbanized areas can be significant and is an often underestimated problem. Microbial source tracking methods (MST) utilizing quantitative PCR of dog-associated gene sequences encoding 16S rRNA of Bacteroidales are a useful tool to estimate these contributions. However, data about the performance of available assays are scarce. The results of a multi-laboratory study testing two assays for the determination of dog-associated Bacteroidales (DogBact and BacCan-UCD) on 64 single and mixed fecal source samples created from pooled fecal samples collected in California are presented here. Standardization of qPCR data treatment lowered inter-laboratory variability of sensitivity and specificity results. Both assays exhibited 100% sensitivity. Normalization methods are presented that eliminated random and confirmed non-target responses. The combination of standardized qPCR data treatment, use of normalization via a non-target specific Bacteroidales assay (GenBac3), and application of threshold criteria improved the calculated specificity significantly for both assays. Such measures would reasonably improve MST data interpretation not only for canine-associated assays, but for all qPCR assays used in identifying and monitoring fecal pollution in the environment.     

1-氯辛烷的合成研究

以复合催化剂H—Z取代无水氯化锌作催化剂，用正辛醇与干燥的氯化氢气合成了1-氯辛烷，产率提高了15％(wt)，反应速度提高一倍。     

MT轮胎专用胎面配方开发技术研究

介绍泥地专用轮胎胎面配方开发技术的研究。研究结果显示通过对在用越野专用胎面配方的生胶并用体系及不同比表面积的填料综合设计,新升级的MT轮胎专用胎面胶料配方的拉伸强度、抗撕裂性能均比在用配方改善明显。新设计的MT专用配方的生热更低;使用新专用配方试制的成品轮胎台架性能得到进一步优化。     

大鼠血栓调节蛋白基因引物的设计与研究

设计了大鼠血栓调节蛋白基因PCR扩增引物,并对引物与模板的加入量及退火温度等进行了研究,优化了PCR反应.结果表明,PCR反应所得产物电泳条带清晰,位置正确,无非特异性扩增带;用该方法设计得到的基因引物能够高效、特异性地进行PCR反应.     

酸胁迫下短乳杆菌谷氨酸脱羧酶系统关键基因的表达及酶活性响应

谷氨酸脱羧酶(GAD)能催化L-谷氨酸(Glu)脱羧生成γ-氨基丁酸(GABA),而GAD和位于细胞膜上的Glu/GABA反向转运蛋白的协同作用则和一些细菌的耐酸机制有关。短乳杆菌GAD系统主要含有两个谷氨酸脱羧酶(Gad A和Gad B)和一个Glu/GABA反向转运蛋白(Gad C)。研究以Lactobacillus brevis CGMCC NO.1306为材料,在不同培养条件下,采用实时定量PCR的方法研究了酸胁迫对gad A、gad B和gad C表达的影响。实验结果表明,gad B和gad C组成操纵子,在菌体生长进入对数后期以后,低p H环境能极大地促进gad CB的表达,菌体的GAD活力主要由Gad B提供且在菌体生长进入稳定期时达到最大值;相对而言,gad A的表达水平几乎不受p H环境和细胞周期的影响。以上结果将为短乳杆菌GABA发酵工艺的优化和研究酸胁迫对该菌株耐酸能力的影响提供理论指导。     

通过有限元分析解决子午线轮胎胎肩偏磨问题

利用哈尔滨工业大学开发的轮胎专用三维非线性有限元分析软件,通过最大拉伸应变、最大拉伸应力以及轮胎接地压力分布等分析轿车子午线轮胎胎肩偏磨现象。分析发现,在靠近胎肩部位的连接弧内开一小花纹沟能够较好地解决肩部偏磨现象;纵向花纹沟的合理布置对抑制胎肩偏磨现象有较明显的作用。     

PCR生物芯片微加工技术的研究

聚合酶链式反应（PCR）在生命科学研究及诸多相关领域已经得到了广泛应用。PCR生物芯片是利用微加工技术制作的能够实现PCR扩增反应的微装置。文中给出了基于MEMS技术的PCR生物芯片的微加工技术及加工方法，特别对集成在芯片上的加热器及温度传感器的微加工方法进行了重点介绍，并对它们的特性进行了分析比较。最后预测了PCR生物芯片微加工技术的发展方向及要克服的主要难题。     

Real-time PCR检测核酸疫苗中宿主基因组残留DNA

目的建立Real-time PCR方法,用于定量检测核酸疫苗中宿主基因组的残留DNA。方法以Lightcycler平台为基础,选择大肠杆菌23S核糖体RNA基因为靶标基因设计扩增引物,建立基于SYBR GreenⅠ荧光染料的Real-time PCR检测方法,并用于核酸疫苗纯化过程中间产物的检测。结果整个检测过程可在30min内完成,特异性强,检测灵敏度可达10fg/μl,其标准曲线的相关系数为-0.99。结论该方法可用于核酸疫苗中宿主基因组残留DNA的检测。     

分子生物学技术在生物除磷中的应用及进展

本文主要总结了应用于生物除磷研究中的分子生物学技术,如基于聚合酶链式反应（PCR）的核酸序列分析技术、以荧光原位杂交（FISH）技术为主的核酸杂交技术等,对其中相关问题进行了分析并提出需要进一步研究的内容。     

慢性粒细胞白血病ssDNA适配子PCR扩增条件的优化

目的优化慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)ssDNA适配子的PCR扩增条件。方法以合成的核苷酸适配子为模板并设计引物,根据引物解链温度(Tm值)设置不同的退火温度(38.0、39.2、41.2、44.2、48.3、51.5、53.6、55.0℃)、循环次数(12、16、20、24、28、30、35、38、40)及非限制性与限制性引物比例(1∶1、30∶1、50∶1、70∶1、80∶1、100∶1),进行PCR扩增,优化CML ssDNA适配子对称PCR及间接不对称PCR扩增条件,并验证优化的PCR条件的重复性。结果对称PCR扩增的最佳退火温度为44.2℃,最佳循环次数为30次;间接不对称PCR的最佳循环次数为38次,非限制性引物与限制性引物浓度比例为50∶1时,可获得理想的ssDNA和较少的dsDNA;优化的PCR条件重复性较好。结论优化了CML ssDNA适配子的PCR扩增条件,为筛选到特异性的ssDNA适配子提供了参考,也为后续试验奠定了基础。