MALDI-TOF-MS分析基因重组糖蛋白rhEPO的一级结构

Matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) is a rather new ‘soft ionization’ techniques. Because of its high sensitivity and accuracy, it has been widely used in detection and characterization of macromolecules such as peptides, proteins and olignucleotides. It also has been applied successfully in the analysis of posttranslational modification of proteins, such as phosphorylation and glycosylation. Compared with the conventional chemical methods, mass spectrometry is simple, rapid and does not require radiolabeling. In this research, a systematic method to analyse glycoprotein by MALDI-TOF-MS was developed. A practical sample--recombinant human erythropoietin was analysed by the method. The molecular weight, content of carbohydrate and glycosylation sites of the glycoprotein were determined by MALDI-TOF-MS, combined with the endo-glycosidase digestion and peptide mapping. The experimental result shows that MALDI-TOF-MS is a very powerful technique in the characterization of glycosylation proteins.     

Na+掺杂ZnO薄膜的结构和电学性能

以醋酸锌为溶质、碳酸钠为钠源,采用溶胶-凝胶法在Si〈100〉衬底上制备了钠掺杂ZnO薄膜,掺杂浓度分别为0,0.018,0.036,0.045,0.063和0.09 mol/L.研究了钠掺杂后ZnO晶胞尺寸和表面形貌的变化规律,用霍尔效应仪测试了试样的载流子浓度及导电类型,分析了材料的拉曼光谱与试样内部缺陷浓度的关系.结果表明:Na 离子可进入ZnO晶格取代Zn2 ,导致晶胞变大,同时ZnO薄膜由n-型转变为p-型导电;当Na 掺杂浓度达0.045 mol/L时,其电阻率为75.7Ω·cm,空穴浓度2.955×1017 /cm3.     

高效液相色谱法测定化妆品中p-茴香酸含量

建立高效液相色谱法测定化妆品中p-茴香酸的分析方法.经WondaSil C18柱(4.6 mm×250 mm×5μm)分离,高效液相色谱/二极管阵列检测器检测.流动相为V(甲醇):V(水):V(冰醋酸)=90:10:0.02,流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长254 nm.结果表明,p-茴香酸质量浓度在1....     

美洲大蠊糖蛋白分子量分布及氨基酸和单糖组成分析

目的：对美洲大蠊糖蛋白(PAG)的分子量分布进行测定,并对构成PAG的氨基酸和单糖组成进行分析。方法：采用HPLC-ELSD法检测PAG的分子量分布;采用HPLC柱前衍生化法测定PAG中氨基酸和单糖的组成。结果：PAG分子量分布可分为4段,分子量大于66 kDa,占比约0.40%;分子量在66～14.5 kDa,占比约79.05%;分子量在14.5～5.8 kDa,占比约13.65%;分子量小于5.8 kDa,占比约6.90%。PAG由天冬氨酸、酪氨酸、丙氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、苏氨酸、精氨酸、甘氨酸、缬氨酸和甘露糖、盐酸氨基葡萄糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、岩藻糖组成。结论：本实验建立的PAG分子量分布测定的方法,可有效控制PAG分子量分布;PAG由10氨基酸和7种单糖组成。     

用99Tcm-MIBI在体外评价肿瘤细胞多药耐药逆转剂逆转细胞多药耐药的效果

摘要 目的 通过99Tcm-MIBI细胞内摄取变化为手段探讨单独或低剂量联合应用多药耐药逆转剂逆转肿瘤细胞多药耐药的效果,期望为进一步解决临床恶性肿瘤化疗面临的问题提供实验依据。方法 人类髓系白血病K562细胞及其耐药细胞系K562/D(高度表达Pgp)各2×106个,分别加入99Tcm-MIBI 8MBq,观察不同时间不同浓度多药耐药逆转剂环孢菌素A(CsA 0.1～0.4μg/ml)和/或维拉帕米（Ver 2.5～10μg/ml）存在时,K562细胞及K562/D细胞对99Tcm-MIBI摄取变化。两种细胞系间及逆转剂前后间比较采用t检验,组间比较采用q检验。结果①不同浓度Ver或CsA存在时,K562细胞99Tcm-MIBI摄取略有增加,但差异无显著性（P＞0.05）。K562/D细胞加入不同浓度Ver及CsA后99Tcm-MIBI摄取均明显增加。但不同浓度Ver间及不同浓度CsA间,摄取增加的差异没有显著性（P＞0.05）。②2.5μg/ml Ver及0.1μg/ml CsA同时加入K562细胞系中,60min时99Tcm-MIBI摄取率为0.303±0.076,增加率为183%。接近单独应用Ver（10μg/ml）或单独应用CsA（0.4μg/ml）。结论 99Tcm-MIBI细胞内摄取变化可评价逆转剂作用下Pgp的功能变化,低剂量逆转剂联合应用能达到与单一较大剂量应用逆转剂相似的效果,为临床逆转Pgp介导的多药耐药提示新的信息。     

有限p-幂零群一个新的判别准则

使用Glauberman和Solomon在2012年对任意有限p-群P定义的两个特征子群D*(P)和De*(P),给出了一个有限群G为p-幂零群的一个新的判别准则.即证明了对奇素数p,则G是p-幂零群当且仅当NG(D*(P))为p-幂零群,也当且仅当NG(D*e(P))为p-幂零群.     

基于演化博弈论的p-坚持CSMA网络接入控制研究

考虑到存在无线信道差错,针对p-坚持CSMA网络的非合作系统行为,建立了p-坚持CSMA演化博弈模型,推导了唯一的演化稳定策略,以饱和吞吐量最大、平均能耗最小为目标求解了最优演化稳定策略。然后,进一步研究了收益时延、成功收益以及比特差错概率对最优演化稳定过程的影响。数值仿真结果表明,当比特差错概率一定、收益时延较小时,选择合适的成本和收益,使多路访问博弈在最优传输概率处演化稳定,可获得一个稳定且性能最优的p-坚持CSMA网络。     

狂犬病毒糖蛋白基因-腺病毒E3区缺失转移表达载体的构建及表达

目的构建狂犬病毒糖蛋白基因-腺病毒E3缺失转移表达载体,并在MDCK细胞系统中高效表达。方法将含狂犬病毒SRV9株糖蛋白(Rgp)cDNA的pGT载体,经双酶切后回收Rgp基因片段,与经双酶切的真核表达载体pIRES1neo连接,得到pIRES1Rgp,再经双酶切后回收2623bp片段,与E3缺失载体pBE3L连接,得到含狂犬病毒糖蛋白基因-腺病毒E3缺失转移表达载体pBE3LCRgp,再转染MDCK细胞。结果pBE3LCRgp转染的MDCK细胞,经间接ELISA和间接免疫荧光法在其培养上清中均能检出Rgp的高效表达。结论已成功构建狂犬病毒糖蛋白基因-腺病毒E3缺失转移表达载体,并在MDCK细胞中高效表达。     

狂犬病毒糖蛋白DNA疫苗的构建及免疫效果的研究

目的构建狂犬病毒糖蛋白基因DNA疫苗,并检测其免疫小鼠的免疫应答。方法用RT-PCR法扩增和分离CTN株狂犬病毒糖蛋白基因,测序后克隆入VR1055载体中,构建重组质粒VR1055-CTN,经碱裂解法提取质粒,并经Sepharose4FF柱层析纯化后免疫NIH小鼠,用ELISA法检测体液抗体,用MTT法检细胞免疫,并进行常规效力试验。结果VR1055-CTNDNA疫苗具有较好的诱导狂犬病毒抗体的能力,在诱导细胞免疫中,刺激脾淋巴细胞转化指数和小鼠血清中的IL-2活性均高于空白载体对照,差异有显著意义(P=0.000)。效力试验的小鼠存活率分别为73%和25%。结论该疫苗既能诱导体液免疫,又能诱导细胞免疫,并具有较好的免疫保护效果。     

狂犬病毒aG株糖蛋白在CHO细胞中的表达

目的克隆狂犬病毒aG株糖蛋白(Glycoprotein)基因,构建重组真核表达载体,在CHO细胞中表达aG株糖蛋白。方法采用RTPCR,从狂犬病毒aG株基因组RNA中扩增GP基因,并将该基因克隆至真核表达载体pCIdhfr上,以脂质体介导法转染CHOdhfr-细胞。用MTX筛选的抗性克隆经ELISA、免疫荧光及Westernblot检测GP蛋白的表达。结果克隆到狂犬病毒aG株糖蛋白全长基因,并在CHO细胞中进行表达。结论成功地在CHO细胞中表达了狂犬病毒aG株的糖蛋白,为进一步开发狂犬病毒基因工程疫苗打下基础。