A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量HPLC检测方法的验证及应用

目的验证A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量的检测方法。方法采用色谱柱XBridge Amide(4. 6 mm×150 cm,3. 5μm),流动相为乙腈、水、三乙胺(75∶25∶0. 1)的混合液,流速为1 mL/min,柱温为40℃,示差检测器温度为40℃,进样量为50μL。同时验证该方法的系统适用性、特异性、线性范围、精密度、稳定性、准确度及定量限。采用该方法对3个厂家生产的30批A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量进行检测。结果乳糖对照品色谱峰的理论塔板数为8 123,与其他色谱峰的分离度> 1. 5;乳糖对照品及供试品溶液图谱于相应保留时间处可见乳糖峰,阴性对照溶液未见该色谱峰;乳糖浓度在0. 050 03～0. 650 4 mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=3. 484 3×10⁵X-7. 378 4×10²,R²=0. 999 97。批号为Y201409089-1、Y201501002和201410050的3批供试品溶液分别测定6次结果的RSD分别为0. 71%、1. 01%和...     

冬虫夏草多糖的研究开发

该项目对虫草菌菌种SD-801进行了分离纯化及选育,筛选出最佳菌株C-235,虫草多糖含量在10％～12％。经过提取及精制,虫草多糖含量达到45.9％。该项目还对多糖组分进行了分析,通过红外光谱、核磁共振得出各组分结构特点。急性毒性试验及药理试验表明,虫草多糖无毒,是很有前景的抗癌药物。虫草多糖的提取、精制工艺还有待于进一步优化,以降低生产成本和提高产品纯度。     

液体深层发酵鸡腿菇菌丝体多糖分离提取研究

进行了鸡腿菇深层发酵菌丝体多糖分离提取的工艺研究,确定了最佳工艺和参数,采用Sevag法脱蛋白去除大部分蛋白质和超声破壁等技术,将多糖与蛋白质等其它细胞成分分离,得多糖收率为1 92%。     

螺旋藻回用培养液组成对藻细胞生长的影响

将螺旋藻回用培养液补齐营养盐用于培养螺旋藻,考察了螺旋藻生物量、培养液中硝酸盐和磷酸盐及培养末期螺旋藻胞内生化成分含量对藻细胞生长的影响;用超滤膜对回用培养液中物质进行分子量分级,分析各级组分对螺旋藻的抑制效应,确定抑制物的分子量分布范围,并分析其成分. 结果表明,回用培养液中的螺旋藻胞外分泌物对藻细胞生长有明显抑制作用,比生长速率比新鲜培养基中低23%,且会抑制藻细胞对营养盐的吸收及胞内蛋白和叶绿素合成,对硝酸盐、磷酸盐的吸收分别低36%和37%,胞内蛋白及叶绿素含量分别为新鲜培养基中的0.85和0.65倍. 抑制物为分子量大于100 kDa的螺旋藻胞外多糖.     

伤寒Vi多糖与不同载体蛋白制备的结合物的特性分析

目的比较以白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)和重组铜绿假单胞菌外毒素A(recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,r EPA)为载体蛋白,分别与伤寒Vi多糖(typhoid Vi polysaccharide,STVi)偶联的结合物的理化特性、抗原性及免疫效应。方法分别以DT、r EPA为载体蛋白,以己二酰肼(adipyl dihydrazide,ADH)为连接剂,使Vi多糖与载体蛋白共价偶联制备多糖蛋白结合物STVi-DT和STVi-r EPA,检测其理化特性指标、抗原性,再将其于0、14、28 d免疫NIH小鼠,经眼眶采血,分离血清,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗体水平,分析其免疫原性、免疫记忆效应及免疫持久性。结果 STVi-DT、STVi-r EPA理化特性指标相似。STVi-DT针对STVi、DT抗血清均具有明显抗原性,而针对r EPA抗血清无抗原性,STVi-r EPA针对STVi、r EPA抗血清均具有明显抗原性,而针对DT抗血清无抗原性。Vi多糖和Vi多糖蛋白结合物均具有动物免疫原性,STVi蛋白结合物较STVi具有更强的免疫原性,STVi-DT的动物免疫原性试验结果略优于STVi-r EPA;免疫2剂STVi-DT和STVi-r EPA后,小鼠血清GMT明显升高,且STViDT组明显高于STVi-r EPA组(P0.05),具有较强的免疫记忆效应;免疫STVi-DT和STVi-r EPA后,小鼠血清GMT随免疫剂次增加和时间延长持续升高,直至稳定在一定水平,免疫持久性较好。结论 STVi-DT、STVi-r EPA理化特性相似,均具有显著的免疫原性、免疫记忆效应及免疫持久性,而STVi-DT免疫原性、免疫记忆效应更强。     

22F型肺炎球菌荚膜多糖的活化及其多糖蛋白结合物的免疫原性

目的用不同活化剂进行22F型肺炎球菌荚膜多糖(type 22F streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide)的活化,并探讨其多糖蛋白结合物的免疫原性。方法分别用溴化氰(cyanogen bromide,CNBr)和1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸酯(1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate,CDAP)作为22F型肺炎球菌荚膜多糖的活化剂,1,6-己二酰肼(1,6-adipic acid dihydrazide,ADH)作为链接剂,制备22F型肺炎荚膜多糖衍生物(3批Pn22FpsADH1和3批Pn22Fps-ADH2);在碳二亚胺[N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDAC]的作用下,将衍生物与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)共价结合,经凝胶过滤柱层析纯化,得到22F型肺炎链球菌荚膜多糖蛋白结合物(3批Pn22Fps-TT1和3批Pn22Fps-TT2);并对其生化指标、血清学特异性、免疫原性及异常毒性进行检测。结果衍生物Pn22Fps-ADH2的衍生率及回收率均略高于Pn22Fps-ADH1;结合物Pn22Fps-TT2的生化指标检测结果相对Pn22Fps-TT1较好;结合物Pn22Fps-TT1和Pn22Fps-TT2均可与22F型肺炎球菌诊断血清特异性结合;结合物Pn22Fps-TT1和Pn22Fps-TT2均具有良好的免疫原性;无异常毒性。结论 CNBr和CDAP均可作为22F型肺炎球菌荚膜多糖活化剂,经活化和结合反应,其抗原位点得到较好保留,但CDAP作为结合疫苗多糖的活化试剂效果更佳。     

新型水溶性复合肥防结块剂的制备及其防结块效果研究

由改性天然多糖和表面活性剂复配制备一种水溶性防结块剂。研究改性天然多糖与表面活性剂的质量配比、改性天然多糖和表面活性剂的总质量分数及防结块剂的用量对防结块效果的影响,并将其防结块效果与高聚物/表面活性剂型防结块剂比较。结果表明:当改性天然多糖与表面活性剂质量比为0.50、w(改性天然多糖+表面活性剂)为20%、防结块剂质量分数为0.3%时,通过加速结块法处理复合肥,可使其防结块率达到87%以上,与高聚物/表面活性剂型防结块剂相差不大,防结块效果较好。     

Succinyl pullulan-crosslinked carboxymethyl chitosan sponges for potential wound dressing

The crosslinked succinyl pullulan-carboxymethyl chitosan composite sponges (Pullulan-CMCS) were fabricated for potential wound dressing. The structure and micromorphology of Pullulan-CMCS sponges were investigated by FTIR spectroscopy and SEM. Pullulan-CMCS sponges had lots of porous structures, making it absorb much liquid and quickly reach swelling equilibrium. WVTR results showed that Pullulan-CMCS sponges can reduce the accumulation of wound exudates in a certain degree. Biocompatibility test showed these sponges had no cytotoxicity or hemolytic potential. In vivo experiments demonstrated that Pullulan-CMCS sponges can effectively heal full-layer wound of skin defects of male ICR mice with accelerated fibroblast proliferation and enhanced epithelial migration.     

高效阴离子交换色谱-脉冲安培法测定W135群和Y群脑膜炎球菌多糖中半乳糖和葡萄糖含量

目的采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培法(High-performance anion-exchange chromatography with pulsedamperometric detection,HPAEC-PAD)测定W135群和Y群脑膜炎球菌荚膜多糖中半乳糖和葡萄糖的含量,并对该方法进行验证及初步应用。方法多糖蛋白结合物原液的混合液经HCl水解处理后,进样CarboPac PA10柱,以氢氧化钠-醋酸钠梯度流洗,脉冲积分安培检测器检测。筛选样品的水解条件;对HPAEC-PAD法进行专属性、精密性及准确性验证,并进行初步应用。结果确定的样品水解条件为以2 mol/L HCl于85℃处理1 h。载体蛋白破伤风类毒素对检测结果无干扰;重复性、日内精密性和不同操作者之间精密性试验结果的RSD均小于5%;准确性试验中葡萄糖和半乳糖的回收率在90%～110%之间。HPAEC-PAD法测定多糖蛋白结合物原液的多糖含量与传统间苯二酚比色法测定结果相当;成品疫苗中的W135群和Y群多糖含量测定结果符合《A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》的规定(均≥4μg/剂)。结论 HPAEC-PAD法专属性、精密性和准确性良好,可用于A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗中W135群和Y群多糖含量的测定。     

伤寒Vi多糖柱层析纯化工艺的优化

目的优化伤寒Vi多糖柱层析纯化工艺,以替代传统苯酚抽提、乙醇分级沉淀法。方法采用DEAE离子交换层析柱,分别在缓冲液(20 mmol/L Tris-Cl)pH值为6.0、7.0和8.0的条件下纯化1批伤寒Vi多糖粗糖,并与传统苯酚抽提、乙醇分级沉淀法进行比较。按《中国药典》三部(2010版)要求检测纯化样品的蛋白质含量、核酸含量、O-乙酰基含量、分子大小及内毒素含量,并计算样品的多糖回收率。采用优化的DEAE柱层析纯化工艺纯化3批伤寒Vi多糖粗糖,验证该工艺的稳定性。结果 DEAE离子交换柱缓冲液(20 mmol/L Tris-Cl)pH值为7.0和8.0时,可有效将伤寒Vi多糖的杂质与纯化产物分离,多糖回收率分别为36.52%和38.35%,明显高于传统工艺的多糖回收率(15.52%),且纯化产物的内毒素含量(10 EU/μg)明显低于传统工艺(200 EU/μg)。以优化工艺(pH 7.0)纯化3批伤寒Vi多糖粗糖获得的6批精糖的蛋白质含量、核酸含量、O-乙酰基含量、分子大小、内毒素含量及多糖回收率差异较小,标准偏差均小于5%。结论优化了伤寒Vi多糖柱层析的纯化工艺,该工艺稳定性良好,可替代传统苯酚抽提、乙醇分级沉淀法,应用于伤寒Vi多糖的纯化。