兽用灭活纯化狂犬病疫苗生产工艺的优化

目的优化兽用灭活纯化狂犬病疫苗的生产工艺。方法建立BHK21C13细胞主细胞库、工作细胞库,狂犬病病毒疫苗株LEP-Flury主种子批、工作种子批,并进行鉴定。优化悬浮培养工艺参数,并分析病毒原液浓缩、纯化和灭活过程中抗原及成品的稳定性。结果主细胞库、工作细胞库无外源因子污染,细胞形态、生长良好;狂犬病病毒主种子批和工作种子批无外源因子污染,病毒滴度最高可达107.8logLD50/ml。采用15L生物反应器,在优化的培养工艺条件下,细胞密度可达4.5×106个/ml,病毒按0.3MOI接种,灌流培养5次,病毒滴度平均可达106.8logLD50/ml。病毒原液合并后,经750KD中空纤维柱30倍浓缩,Sepharose Fast Flow6层析柱纯化,1/4000β-丙内酯灭活,期间加入稳定剂,纯化疫苗效价平均达(5.03±1.84)IU/头份,纯化的抗原量达(11.75±0.70)μg/头份,在4℃可保存24个月,在37℃可保存30d,在45℃可保存12h。结论优化的兽用灭活狂犬病疫苗的生产工艺可提高疫苗的安全性、有效性及稳定性。     

治疗性乙型肝炎病毒载体疫苗的构建

目的研制治疗慢性乙型肝炎的重组修饰的Ankara痘病毒(MVA)载体疫苗。方法将HBV的表面抗原基因克隆到MVA病毒的重组载体pSC11上,重组质粒与空MVA病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行同源重组。经过10轮筛选,挑选出阳性的重组MVA病毒。经PCR鉴定,感染不同细胞系,确定病毒表达量。结果获得目的重组MVA病毒,ELISA检测到表面抗原在不同细胞系中的表达。结论已成功地构建了表达HBV表面抗原的重组MVA病毒。     

2017～2018年宁波市出生儿童13价肺炎球菌结合疫苗接种率分析

目的分析2017~2018年宁波市出生儿童13价肺炎球菌结合疫苗(13-valent pneumococcal conjugate vaccine,PCV13)的接种率。方法收集宁波市“免疫预防管理信息系统”中2017~2018年出生儿童的PCV13接种信息,采用描述性流行病学方法进行统计分析。结果宁波市2017~2018年出生儿童221921人,接种PCV13有25124人,≥1剂次接种率为11.32%,其中至少接种3针PCV13的有19212人,≥3剂次接种率为8.66%。25124名<2岁儿童中,首针疫苗接种年龄≤1、2、3、4和≥5月龄者分别为5428、11287、5556、2608和245人,分别占21.60%、44.93%、22.11%、10.38%和0.98%。不同地区、户籍类型、出生年份儿童PCV13≥1和≥3剂次接种率差异均有统计学意义(P均<0.001),不同地区、性别、户籍类型、出生年份儿童PCV13首针疫苗接种年龄差异有统计学意义(P均<0.01)。结论宁波市儿童PCV13接种率处于较低水平,建议将PCV13纳入国家免疫规划项目。     

辽宁省2017-2019年肠道病毒71型灭活疫苗上市后疑似预防接种异常反应监测数据分析

目的 对辽宁省2017-2019年肠道病毒71型(enterovirus type,EV71)灭活疫苗上市后疑似预防接种异常反应(adverse event following immunization,AEFI)监测数据进行分析,评价其预防接种安全性.方法 收集中国免疫规划信息管理系统中EV71 疫苗AEFI 监测数...     

治疗性双质粒HBV DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺研究

目的研究双质粒HBV DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺。方法首先通过计算质粒拷贝数,检测工程菌DH5α/pS2.S和DH5α/pFP在传代过程中的遗传稳定性,通过摇瓶培养确定培养基组成,再在30L发酵罐内,通过改变培养基成分、培养时间、补料方式,确定最佳发酵参数。并将确定的最佳发酵参数应用于50L发酵罐连续3批中试规模的发酵,同时考察在发酵培养过程中质粒稳定性和超螺旋质粒DNA的比例。结果工程菌DH5α/pS2.S和DH5α/pFP在连续传代30次后,质粒拷贝数保持稳定。确定最佳发酵参数为以甘油为碳源的培养基培养,梯度恒速流加方式补料,培养时间为10h。通过3批稳定发酵,最终可获得湿菌58.0~71.8g/L,质粒含量可达到1.11~1.58mg/g菌,超螺旋质粒DNA的比例达93%以上。结论已建立了稳定的双质粒HBV DNA疫苗工程菌中试发酵工艺,为进一步规模化生产奠定了基础。     

高效阴离子交换色谱-脉冲安培法测定W135群和Y群脑膜炎球菌多糖中半乳糖和葡萄糖含量

目的采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培法(High-performance anion-exchange chromatography with pulsedamperometric detection,HPAEC-PAD)测定W135群和Y群脑膜炎球菌荚膜多糖中半乳糖和葡萄糖的含量,并对该方法进行验证及初步应用。方法多糖蛋白结合物原液的混合液经HCl水解处理后,进样CarboPac PA10柱,以氢氧化钠-醋酸钠梯度流洗,脉冲积分安培检测器检测。筛选样品的水解条件;对HPAEC-PAD法进行专属性、精密性及准确性验证,并进行初步应用。结果确定的样品水解条件为以2 mol/L HCl于85℃处理1 h。载体蛋白破伤风类毒素对检测结果无干扰;重复性、日内精密性和不同操作者之间精密性试验结果的RSD均小于5%;准确性试验中葡萄糖和半乳糖的回收率在90%～110%之间。HPAEC-PAD法测定多糖蛋白结合物原液的多糖含量与传统间苯二酚比色法测定结果相当;成品疫苗中的W135群和Y群多糖含量测定结果符合《A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》的规定(均≥4μg/剂)。结论 HPAEC-PAD法专属性、精密性和准确性良好,可用于A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗中W135群和Y群多糖含量的测定。     

鼠疫组分疫苗F1抗原、rV抗原含量的检测及其质量控制

目的采用双抗体夹心ELISA法检测鼠疫组分疫苗中F1和rV的抗原含量。方法利用F1、rV抗原单克隆抗体,对鼠疫组分疫苗原液进行抗原鉴别试验;分别应用F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法对疫苗原液进行抗原定量检测;验证A(l OH)3佐剂吸附抗原的完全性;将疫苗成品于4℃放置18个月,分别于1和18个月时取样,用建立的双抗体夹心ELISA法检测F1和rV抗原含量,分析抗原的稳定性;对3批鼠疫菌rV抗原原液3步纯化工艺进行验证。结果鼠疫组分疫苗原液中的F1和rV抗原具有良好的反应原性;用建立的双抗体夹心ELISA法检测4批F1和rV抗原原液中F1和rV抗原的含量与Lowry法检测结果的误差均在±20%以内;4批鼠疫组分疫苗离心后的上清液中均未检测到F1和rV抗原,表明A(lOH)3佐剂吸附抗原完全;4℃保存18个月,疫苗中的F1和rV抗原含量稳定;3批鼠疫菌rV抗原原液经阴离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析3步纯化,rV抗原在纯度增加的同时,抗原含量也增加。结论已建立的F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法可用于鼠疫组分疫苗中F1和rV抗原的定量检测。     

流感病毒的演变传播及抗病毒药物和疫苗的研究进展

流感病毒是引起人类流感的传染性病毒.1918年流感风暴席卷全球,至今仍为挥之不去的梦魇.本文综述了流感病毒的演变,在世界的传播路线和流感病毒"劫持"人体细胞的新机制,以及抗流感病毒新药和新型流感疫苗的研究进展.神经氨酸苷酶抑制剂的应用和新型流感疫苗的研制成功将为预防和治疗流感开拓广阔的前景.     

2006—2010 年中英两国主流报纸对麻疹疫苗的科技报道研究

本文遴选2006-2010年中英两国主流报纸对麻疹疫苗和MMR的新闻报道样本,采用内容分析方法以“科学的确定性与不确定”和“政府政策意见趋向”为主线分析了不同媒体环境下针对防治麻疹病疫苗的科学报道模式。通过比较研究中西方不同国家的政府、媒体以及科学家如何针对麻疹疫苗争议对公众进行正确健康疏导以及危机处理方式,拓展了科学普及的研究视野并试图从中总结出更加合理的科技报道模式。科学争议以及危机处理需要科学界与媒体正确的引导,随着网络科技报道数量的增加,传统媒体需要重视其他渠道的科技信息,尤其是来自于科学界的信息,从而对原有科技报道模式做出调整和改善。     

光动力法制备抗小鼠H22肝癌的肿瘤疫苗

研究了光动力疗法(PDT)制备的抗小鼠H22肝癌肿瘤疫苗的抗瘤效应.将昆明鼠60只,随机分为2组,每组30只.实验组取6~12周龄的昆明鼠背部皮下接种光动力疗法产生的疫苗,每3天注射一次,每次注射50μL(相当于3×105个细胞),连续两周.隔一周于第22天注射H22肿瘤细胞悬液0.1 mL(1×106个细胞);对照组:每周每次注射50μL生理盐水,连续两周.隔一周于第22天注射H22肿瘤细胞悬液0.1 mL(1×106个细胞).比较两组的抑瘤率、生存率以及两组之间免疫学的相关指标.结果表明,实验组小鼠具有显著的抑瘤效果,抑瘤率、生存率较对照组有显著提高.实验组肿瘤抑瘤率最高可达60%且长期有效,100天生存率达56%.说明光动力疗法产生的抗小鼠H22肝癌疫苗可以有效地抑制肿瘤生长,提高荷瘤小鼠的生存率,具有明显的抗瘤效应.该方法可能成为一种辅助性治疗肿瘤的手段而应用于临床.