运用试验设计方法提高胞外杂合b-葡聚糖酶在重组大肠杆菌中的表达

A genetically engineered Escherichia coli JM109 harboring pLF3 was used to produce a hybrid extracellular β-glucanase. Starting with enzyme production medium, glycerol and yeast extract combined with NaNO3 were screened to be the most suitable carbon and nitrogen source, respectively. Analysis of six components of the enzyme production medium by employing statistical optimization methods such as Plackett-Burman design and steepest ascent showed that yeast extract was the only significant variable and its best concentration for enzyme production was 12g·L^-1. After optimization of the medium, 297.71U·ml^-1 of β-glucanase activity in the medium and 352350U·g^-1 of β-glucanase selectivity could be obtained, which were 14 and 72 folds higher than those obtained from original medium, respectively. Even higher enzyme activities were achieved by batch cultivations in a conventional stirred bioreactor on the optimized medium.     

饲料中维生素C和β-葡聚糖对牙鲆免疫力和抗病力的影响

以初始体重为(40.5±1.0)g的牙鲆幼鱼为实验对象,在室内水循环系统中进行了为期12周的饲喂实验,探讨了饲料中不同含量的维生素C和β-葡聚糖对牙鲆免疫力和抗病力的影响.结果表明,当不添加β-葡聚糖时,维生素C显著提高了牙鲆替代途径补体活力(ACH50)(P＜0.05),但维生素C对牙鲆溶菌酶、呼吸爆发活力、感染爱德华氏菌后开始死亡的时间和7d内的累积死亡率并没有显著影响(P＞0.05).当不添加维生素C时,牙鲆血清ACH50随着β-葡聚糖的添加而显著升高(P＜0.05);当饲料维生素C含量为1.0 mg/kg和495.0 mg/kg时,β-葡聚糖缺乏组的呼吸爆发活力显著低于添加β-葡聚糖实验组(P＜0.05);当饲料中维生素C含量为495.0 mg/kg和1980.0 mg/kg时,高水平的β-葡聚糖(0.6%)显著延缓了牙鲆感染爱德华氏菌后的死亡时间,并降低了感染细菌后7d内的累积死亡率(P＜0.05).以上结果对于牙鲆饲料中免疫增强剂的开发具有理论指导价值.     

新型PVDF中空纤维智能凝胶膜的制备及其性能的研究

采用强碱处理方法制备具有温度、pH双敏感的聚偏氟乙烯（PVDF）中空纤维智能凝胶膜,并对智能水凝胶及其智能膜的环境响应性进行了研究.结果表明,这种双敏感智能凝胶膜可以分别通过控制温度和pH值的变化,有效地控制纯水通量和卵清蛋白的截留率.     

裸燕麦麸β-葡聚糖的流变学特性及凝胶形成

以两个不同相对分子质量的燕麦β-聚糖为实验原料，配制成不同质量分数的溶液，对其流变学特性进行研究．结果表明：质量分数0．2％～39／6的燕麦β-葡聚糖溶液随着剪切速率增大而呈现剪切变稀，表现非牛顿流体行为，相对分子质量对流变性产生一定的影响．质量分数3％的β-葡聚糖溶液可以形成触变环．动态测量结果表明，燕麦β-葡聚糖具有粘弹性和弱的凝胶特性，一定条件下可以形成凝胶．DSC测定结果显示，质量分数59／6的燕麦β-葡聚糖凝胶的溶解温度为75℃．     

绿色木霉AS3．3711的葡聚糖内切酶V基因的克隆与表达

采用RT-PCR方法克隆到绿色木霉(Trichoderma viride)AS3．3711的葡聚糖内切酶V(EGV)的cDNA基因。测序后构建到酿酒酵母诱导型表达载体pYES2上，转化酿酒酵母，同时研究了超声波处理对酵母完整细胞转化的影响。转化子用2％的β-D-半乳糖进行诱导，用Northem杂交和CMC糖化力法分别对目的基因的转录和表达产物的葡聚糖内切酶活性进行检测。结果表明，EGV的cDNA基因开放阅读框长度为741bp，编码247个氨基酸，推测的蛋白质分子量为24．99kDa。超声波处理60s的酿酒酵母的转化率最高，在相同条件下是未处理组的2倍。酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达并分泌到胞外。发酵液中的酶活在培养60小时达到最高0．046U／ml。最适酶解温度为60℃，最适pH值为5．4。     

生物还原响应的葡聚糖修饰的线性聚乙烯亚胺基因释放载体的研究

通过二硫吡啶端基化的线性聚乙烯亚胺(LPEI-SSPy,M_n=5 000)与巯基化葡聚糖(Dex-SH,Mw=5 000)的偶联反应,制备出生物还原响应的葡聚糖基线性聚乙烯亚胺(Dex-SS-LPEI),并将其用于基因释放载体的研究。核磁共振氢谱分析表明Dex-SSLPEI的氢谱与其化学结构一致。动态光散射及琼脂糖凝胶电泳分析证明Dex-SS-LPEI能够复合基因形成纳米尺寸的、表面带正电荷的复合物。毒性实验表明该聚合物对细胞的毒性较小。在n(N)/n(P)为最佳值(10/1)时,Dex-SS-LPEI与绿色荧光蛋白报告基因的复合物可以有效转染MCF-7和HepG2细胞,其效率优于22kDa的线性聚乙烯亚胺(LPEI,M_w=22kDa)阳性对照。荷瘤小鼠体内转染实验表明Dex-SS-LPEI可以通过静脉给药输送荧光素酶基因,导致体内各器官及肿瘤的转基因表达。在肿瘤内该转基因表达较其它脏器更高,并高于22kDa的LPEI在肿瘤内的基因表达。     

高纯度燕麦β-葡聚糖测定方法研究

目前国内外对于高纯度燕麦β-葡聚糖含量的测定还没一个成熟的方法，实验探索了酶法测定高纯度燕麦β-葡聚糖的条件。确定地衣多糖酶酶解时间为2h，酶解温度为40℃，β-葡萄糖苷酶酶解时间为30min，酶解温度为40℃。通过对精密度和回收率判断，验证了该方法的可行性。     

硒化葡聚糖结构测定及药效研究

对硒化葡聚糖进行紫外光谱、红外光谱和１３Ｃ—ＮＭＲ分析，基本确证了其结构为硒化试剂与单糖上两个顺式相邻羟基形成五员环的亚硒酸酯（１．２和６．６位）．经药效实验，证明硒化葡聚糖在小鼠上具有广泛的免疫作用．     

葡聚糖多克隆抗体竞争抑制ELISA检测方法的建立

采用广州甘蔗糖业研究所和厦门大学共同研制的抗葡聚糖多克隆抗体和DEX-OVA交联的免疫原,确定了最佳的抗原包被浓度为5ug/ml,最佳的多抗工作浓度为1:8000。建立了竞争抑制ELISA定量检测葡聚糖的方法,并尝试了对原糖样本的检测。     

大麦多糖的分离纯化鉴定

大麦多糖为β葡聚糖，通过离心透析等方法得到纯净的β葡聚糖，多糖测定为８６％，薄层层析为单一葡萄糖，表明此多糖为以葡萄糖分子连接而成的多分子长链。