虾过敏原Troponin C (Pen m6)的克隆表达、免疫学鉴定及生物信息学分析

目的对斑节对虾(Penaeus monodon)第6组过敏原(Pen m6),肌钙蛋白C(Troponin C)进行克隆表达、免疫学鉴定并研究其生物学意义。方法提取斑节对虾总RNA;根据Gen Bank:HM034316.1设计引物及构建表达载体PET-24a-Pen m6;转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行表达;纯化后的重组Pen m6用Western bolt来鉴定免疫学特性;用生物信息学相关工具对Pen m6进行同源性分析,并预测其蛋白质的结构和功能。结果克隆出斑节对虾Pen m6基因开放阅读框453 bp,编码150个氨基酸。重组Pen m6蛋白呈可溶性,分子量约35kDa,能够与斑节对虾过敏患者血清IgE结合。斑节对虾与凡纳滨对虾亲缘关系比较近,其中斑节对虾Pen m6蛋白与凡纳滨对虾Troponin C1(gb|AET36896.1|)同源性为98%。理化性质预测Pen m6蛋白质不稳定。蛋白质结构预测结果显示Pen m6的结构主要以α螺旋组成。T细胞抗原表位预测得到4个肽序列(15~23、35~43、91~99、112~120)。B细胞抗原表位预测得到4个肽序列(7~16、21~30、28~37、58~67)。结论克隆的重组斑节对虾Pen m6蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研究斑节对虾过敏原的结构成分及其理化性质奠定理论基础。     

贻贝酶解物对羟自由基清除作用的试验研究

通过测定贻贝酶解物对离体实验系统（Fenton体系）产生的羟自由基的清除效果，从胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶3种酶中筛选出木瓜蛋白酶和胰蛋白酶作为酶解贻贝制备具有较高清除羟自由基活性酶解物的理想水解酶；并通过正交实验L9（3^4）对2种酶的水解条件进行优化。结果表明木瓜蛋白酶在温度60℃、酶解时间15min、DH7．5、酶质量分数1．00％的水解条件下，酶解物对羟自由基的清除效果最佳；胰蛋白酶在温度45℃、酶解时间35min,pH8，5、酶质量分数0．75％的水解条件下，酶解物对羟自由基清除效果最佳。木瓜蛋白酶酶解物在最大洗脱峰时有最大羟基自由基清除率峰，清除率为76．15％，在最大峰处酶解物中活性肽的分子量为1．4kDa；胰蛋白酶酶解物在最大洗脱峰时也有最大羟基自由基清除率峰，其清除率为69．13％，该峰处活性肽的分子量也为1．4kDa。     

酶解鸭骨制取ACE抑制肽工艺条件的优化

采用木瓜蛋白酶水解鸭骨制取血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,通过四元二次通用旋转设计优化水解工艺,建立数学模型,分析水解度与ACE抑制率的相关性,并通过不同规格的超滤离心管对酶解产物进行分离.结果表明,木瓜蛋白酶在底物浓度11.5g/100mL,酶底比8000U/g,水解温度60℃,水解时间5.5h,pH值为5.5的条件下,酶解产物的ACE抑制率最高,达到85.71％,水解度为20.81％,且水解度与ACE抑制率显著相关,曲线拟合方程为Y=- 157.572+21.215X-0.491X2.超滤后分子量为2ku～3ku的肽段ACE抑制率最高,达到91.67％,半抑制浓度(IC50)为0.927mg/mL,ACE抑制肽回收率为1.99％.     

蛋清蛋白肽体外抗氧化作用模式的研究

目的 研究蛋清蛋白肽抗氧化作用模式。方法 利用超滤技术分离蛋清蛋白木瓜蛋白酶酶解产物; 采用Fenton体系、邻苯三酚自氧化体系和亚油酸自氧化体系分别测定超滤各组分清除羟自由基、超氧阴离子及抑制脂质过氧化的能力, 同时测定各组分对二苯代苦味肼基自由基清除能力(DPPH自由基)、还原能力及对猪胎儿成纤维细胞(porcine embryonic fibroblast, PEF)过氧化损伤的保护作用。结果 超滤各组分中分子量小于3 kDa组分(蛋清蛋白酶解产物-Ⅲ, egg white protein hydrolysate, EWPH-Ⅲ)占蛋清蛋白酶解产物(EWPHs)总量的50.06%。EWPH的抗氧化活性随分子量的降低而增强(P<0.05), 其中EWPH-Ⅲ在浓度为5 mg/mL时, 对羟自由基、超氧阴离子、DPPH自由基的清除率分别为52.86%、35.05%和78.74%, 对亚油酸氧化的抑制率为74.57%。在浓度为2.5 mg/mL时, PEF细胞存活率达到70.06%。结论 蛋清蛋白肽具有较强的抗氧化活性且分子量越小, 抗氧化活性越强, 可以作为氢供体、自由基稳定剂和金属离子螯合剂来抑制过氧化作用。     

猪血红蛋白的酶解工艺研究

目的 研究猪血红蛋白的酶解工艺.方法 用组合酶Ⅰ（蛋白酶F与蛋白酶P）和组合酶Ⅱ（蛋白酶F与蛋白酶N）同步酶解猪血红蛋白.结果 确定最佳工艺参数,组合酶Ⅰ的最佳酶解条件为：酶添加量0.2％,温度50℃,料水比1∶1.25,pH 7.5,水解时间20 h;组合酶Ⅱ的最佳酶解条件为：酶添加量0.24％,温度50℃,料水比1：1.75,pH 8.0,酶解时间20h.此工艺条件下,组合酶Ⅰ和组合酶Ⅱ三氯乙酸可溶性氮含量（TCA-SN指数）分别为71.72％和87.82％,两种组合酶的蛋白质回收率均达90％.结论 组合酶Ⅱ较适于工业生产.     

不同蛋白酶制备鹅肉呈味肽的对比分析

以鹅肉为原料,采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶制备呈味肽,对比分析4 种酶解液中的水解度、寡肽含量,采用氨基酸自动分析仪对酶解液游离氨基酸组成进行测定,并利用电子舌和感官评定方法对酶解液的鲜味等味道进行滋味评定。结果表明：45 ℃恒温水浴酶解6.5 h,加酶量1 200 U/g、pH 7.0、固液比1∶3（g/mL）的条件下,木瓜蛋白酶酶解液水解度最大且寡肽质量分数最高,其次是中性蛋白酶,鹅肉蛋白水解度达到29.69%,寡肽质量分数达到0.18%。此外,中性蛋白酶酶解液的风味最好。中性蛋白酶酶解后产生的游离氨基酸类型丰富,谷氨酸和丙氨酸的含量高,最终酶解液整体鲜味浓郁,并伴有酸味。因此,确定酶解鹅肉蛋白的最佳用酶为中性蛋白酶。     

脱脂豆粕酶法生产大豆肽工艺条件的研究

采用酶法水解脱脂豆粕制备大豆肽,确定了蛋白的浸出温度,比较单双酶的水解效果.确定酶解最佳条件：中性酶、复合酶添加量分别为400,200 U（每克蛋白中）,酶解温度为55℃,pH值为7.5,时间为2h,大豆肽产率约为32%.     

水解面筋蛋白高效制备谷氨酰胺结合肽的研究

采用食品级胃蛋白酶、胰蛋白酶、Protamex复合酶双酶组合对面筋蛋白进行水解制备Gln结合肽。先确定三种单酶各自对面筋蛋白适宜的初始pH、温度、酶浓度和底物浓度。并以双酶进行两两组合水解。在进行水解度控制实验时取样,分析水解液中氨基氮的含量,计算平均肽链长度,并用高效液相色谱分析水解液中Gln的得率。实验结果表明胰蛋白酶和胃蛋白酶联合水解的效果最好,条件为:胰蛋白酶在pH8.0,50℃,S%=12.8%(W/V),E%=9%(W/W)水解6h,再用胃蛋白酶pH2.0,40℃,E%=5%(W/W)条件下水解5h,可得到平均肽链长度为2.20个氨基酸残基的蛋白水解液,Gln得率最高,为60.43%。认为胰蛋白酶和胃蛋白酶组合是面筋蛋白中高效制备谷氨酰胺结合肽的最佳组合。     

抗氧化作用延缓疲劳的研究进展

对抗氧化作用的机理进行了分析,抗氧化酶和非酶类物质是延缓疲劳的主要物质。抗氧化物质之间的协同作用可以增强抗疲劳作用,抗氧化物质对慢性疲劳综合症具有治疗作用。探讨了测定氧化应激的方法,包括直接测定自由基的含量,由自由基引起的生物大分子的氧化损害,抗氧化物质的活性等,一种方法不能有效评价抗氧化水平,通过多个指标的测定可以得到较好的结果。此外,对抗氧化物质在延缓疲劳中的应用进行了论述。大豆肽、乳清肽、鱼蛋白肽和猪脾脏蛋白肽等抗氧化活性肽都是良好的缓解疲劳的物质。植物提取物如皂甙、活性多糖、类黄酮、多酚、茶碱及其他动植物和食用菌等物质也有应用于延缓疲劳的报道。