一种兼具生物和物理特征的E基因签名方法——以p53家族基因为例

在原来的具有生物特性的基因签名方法上,引入具有一定的物理特性的核苷酸游离电子的平均能量(EIIP),建立了一种新的E基因签名方法。定义了两序列间的E欧氏距离及e均方差公式,并对相关物种进行层次聚类分析。通过对20个物种的p53家族基因m RNA完整的CDS序列进行E基因签名得出,在每种基因中均有,物种关系越近,其基因签名相似度越高。将聚类结果与原来的基因签名方法的聚类结果作对比,发现了E基因签名方法更准确,从而更有利于深入了解p53家族基因的性质。     

通过核糖核苷酸还原酶M2逆转肝癌细胞对5-氟尿嘧啶耐药

目的：探讨核糖核苷酸还原酶M2（RRM2）在肝癌细胞对5-氟尿嘧啶（5-FU）耐药中的作用,并开发潜在的策略来提高肝癌细胞对5-FU的敏感性。方法：利用Western blot检测5-FU耐药肝癌细胞（BEL/5-FU）与非耐药肝癌细胞（BEL7402）中RRM2蛋白的表达差异;通过用RNA干扰技术下调BEL/5-FU细胞中RRM2的表达或RRM2抑制剂3-AP（Triapine）抑制RRM2活性;CCK-8和集落形成实验用于检测细胞的增殖能力;使用高内涵细胞成像系统仪检测与分析细胞凋亡。结果：BEL/5-FU细胞中RRM2的表达量是BEL7402细胞的2.5倍。RNA干扰技术能够下调BEL/5-FU细胞中RRM2的表达,并使5-FU对BEL/5-FU细胞的半数抑制浓度（IC50）下降约50%,同时细胞集落形成能力也显著减弱。3-AP与5-FU联合处理BEL/5-FU细胞,使5-FU对BEL/5-FU细胞的IC50下降约40%,细胞集落形成能力减弱,并促进5-FU导致的细胞凋亡。结论：RRM2与肝癌细胞对5-FU的耐药相关,本研究通过抑制RRM2的活性来逆转肝癌细胞对5-FU的耐药,为提高肝癌的5-FU化疗疗效提供新靶点和新思路。     

固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时检测食品中的烟酰胺单核苷酸α、β异构体和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸

目的 建立固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定食品中烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide, NMN) α、β异构体和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide, NAD⁺)含量的方法。方法 样品经5%甲醇水溶液超声提取, HLB固相萃取柱和混合型阴离子交换固相萃取柱分别净化,采用Waters ACQUITY UPLC?HSS T色谱柱进行分离,流动相为5 mmol/L乙酸铵含0.1%(V/V)甲酸水-甲醇,梯度洗脱;流速0.2 mL/min;柱温30℃;多反应监测(multiple reaction monitoring, MRM)模式定量分析,定量离子对NMN为m/z 335.0/123.0、NAD⁺为m/z 662.0/540.0。结果 在最优条件下, α-NMN和β-NMN两种异构体的分离度为5.56。该方法中α-NMN、β-NMN和NAD⁺均在10～1000 ng/mL范围内线性良好,相关系数分别为0.9999, 0.9998...     

30种酱油中基本成分和呈味核苷酸的高效液相色谱法分析研究

通过对不同等级的市售酱油的pH值、NaCl含量、吸光度、氨基态氮、总氮、铵盐、总酸度等几项理化指标的检测,并采用反向高效液相色谱法测定酱油中呈味核苷酸含量,结合其主要成份对市售酱油中呈味核苷酸含量及其与产品质量档次进行相关性分析.方法:酱油样品用甲醇/水(75/25,v/v)沉淀30 min,提取液用C18固相萃取小柱去杂,定容后过0.22 μm滤膜后进行液相色谱分析.色谱条件:色谱柱Zorbax SB-Aq C18 (4.6×250 mm,5 micron);流动相为磷酸二氢钾(0.01 mol/L,pH为4.5),流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长254 nm.结果:高效液相色谱法测定呈味核苷酸加标回收率98.5％～102.5％,相对标准偏差小于1.05％,该法最低检出限量10μg.结论:本法适用于酱油中5’-肌苷酸一钠和5'-鸟苷酸二钠的测定,检测速度快,结果准确,尤其适用于批量样品分析.     

提高酵母精呈味核苷酸含量的研究

本文试验以啤酒废酵母为原料，采用自溶液中外加从大麦芽根中提取的5‘-磷酸二脂酶，来探讨啤酒废酵母自溶过程中不同因素对5‘-磷酸二脂酶定向水解酵母RNA生成5‘-核苷酸的影响，然后得出提高酵母精中呈味核苷酸含量的最佳酶解工艺条件，从而大大地提高了酵母精中呈味核苷酸的含量，生产的膏状酵母精（含水份28．7％）产品中5‘-核苷酸含量高达2067.5mg/100g。     

香菇中5''''-核苷酸的高效液相色谱-质谱分析

采用高效液相色谱／质谱法，对香菇中5’-核苷酸进行了分析。在ODS柱上，以含0．05％磷酸的水．甲醇(90／10，V／V)为流动相进行了分离。以HPLC与LC／MS联合定性香菇中5’-核苷酸为5’-肌苷酸，5’-鸟苷酸，5’-尿苷酸和5’-腺苷酸。采用外标法定量，它们的标准加入回收率分别为100．4％、99．0％、97．8％、和97．2％，相对标准偏筹分别为2．07％、2．18％、1．91％和2．76％，检出限分别为2．5、2．1、3．2、和3．5μg／ml。该方法准确可靠，简便易行。     

5’-核苷酸喂养SD大鼠90天实验研究

目的:评价5’-核苷酸的安全性。方法:采用大鼠90d喂养实验,96只SD大鼠随机分为6组,每组16只,雌雄各半,分别喂饲添加不同剂量核苷酸(0、0.01、0.04、0.16、0.64、1.28g/kgbw)的饲料。观察大鼠体质量、进食量、食物利用率、血压、血液常规、生化指标及病理结果的变化。结果:5’-核苷酸组与对照组相比,大鼠的总体质量增大、总进食量、总食物利用率、血压均没有明显差异(P>0.05);雄性大鼠前4周的体质量明显增高(P<0.05),雄性0.04g/kgbw组第4周、雌性0.16g/kgbw组第1周和0.01g/kgbw组第2周的食物利用率显著增高(P<0.05);雄性大鼠的白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板、总蛋白含量、白蛋白、甘油三酯与对照组比较有统计学差异,但均未超出正常范围。镜下观察各组大鼠的脏器未见有意义的病理学改变。结论:在本实验的剂量范围内添加5’-核苷酸是安全的。     

婴幼儿配方乳粉中核苷酸检测方法的研究进展

近年来,核苷酸在婴幼儿配方乳粉中广泛应用,本文总结了婴幼儿配方乳粉中核苷酸含量检测的相关技术及应用情况,并详细介绍了核苷酸检测样品前处理过程及检测方法的研究进展。前处理方法主要有沉淀法、固相萃取法和快速溶剂萃取法三大类,其中固相萃取法去干扰能力更强,适用范围更广。检测方法主要有高效液相色谱法、高效液相色谱-串联质谱法和离子色谱法。固相萃取净化-高效液相色谱法是目前比较理想的检测婴幼儿配方乳粉中5种核苷酸含量的方法,而简单提取净化-高效液相色谱-串联质谱法将会是今后核苷酸含量检测研究的重点方向。本文通过对婴幼儿配方乳粉中核苷酸检测技术的文献综述,对其发展前景予以展望分析,旨在为婴幼儿配方乳粉的质量监控和研究提供参考和依据。     

反相高效液相色谱法测定中国对虾肉中的呈味核苷酸

核苷酸5＇-CMP、5＇-UMP、5＇-GMP、5＇-IMP、5＇-AMP 等是食品重要的鲜味物质。采用C18 高效液相色谱柱,以甲醇与0.05mol/L KH2PO4 溶液1:1(V/V)为流动相,梯度洗脱,能将其很好地分离。DAD 检测器在260nm处检测,各呈味核苷酸的测定标准曲线在0.00～0.10mg/ml 的范围内呈很好的线性关系,R2 分别在0.9902～1.0000之间。对中国对虾肉中的呈味核苷酸进行测定,结果表明：加标回收率在99.96%～100.34% 之间,变异系数在0.04%～0.4% 之间。方法的精密度和准确度均较高,可应用于食品中呈味核苷酸的分析检测。     

啤酒酵母RNA降解产物5′-核苷酸的高效液相色谱分析

研究了高效液相色谱法同时测定啤酒酵母RNA降解产物4种5′-核苷酸的适宜条件。应用Hypersil ODS2色谱柱,在260nm检测波长下,以0．08mol／L KH2PO4缓冲溶液（pH2.5）作流动相,10min内可完成CMP、UMP、AMP、GMP含量的同时测定,最小检测限分别为0．2mg／L、0．2mg／L、0．1mg／L和0．3mg／L,平均回收率分别为99．21％、100．39％、100．07％和99．88％,相对标准偏差（RSD）分别为2．27％、2．83％、2．05％和1．85％。